潑尼松龍對脂多糖誘導(dǎo)的MCP

潑尼松龍對脂多糖誘導(dǎo)的MCP【摘要】目的探討潑尼松龍對脂多糖誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞激活時所分泌的趨化因子MCP-1的影響。方法采用MEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)小膠質(zhì)細(xì)胞，培養(yǎng)液中添加不同濃度的LPS及LPS與10μmol·L-1的潑尼松龍后再培養(yǎng)12h后，用ELISA法測定細(xì)胞外液所分泌的MCP-1的含量。結(jié)果LPS能高度激活小膠質(zhì)細(xì)胞并且能使MCP-1分泌增加，潑尼松龍明顯抑制MCP-1的含量。結(jié)論潑尼松龍有抑制趨化因子MCP-1的分泌作用。

【關(guān)鍵詞】潑尼松龍小膠質(zhì)細(xì)胞脂多糖

EffectsofPrednisoloneonMCP-1ProductionInducedbyLPS

Abstract：ObjectiveTostudytheeffectsofprodnisoloneonMCP-1inducedbyLPSbymicroglia.MethodsThemicrogliawasincubatedwithMEMculturemediumanddifferentconcentrationsofLPSorLPSandprodnisolone(10μmol·L-1)wereincubatedinculturemediumseparately12hlater,andtheamountofMCP-1weremeasuredbymarkedlyproducedMCP-1inresponsetoLPS.ProdnisolonesignificantlyreducedtheproductionofMCP-1inhasprotectiveeffectontheproductionofchemokinessuchasMCP-1.

Keywords：Prodnisolone；Microglia；LPS

小膠質(zhì)細(xì)胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一種組織巨噬細(xì)胞，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中起重要作用［1，2］。研究顯示，靜息狀態(tài)的小膠質(zhì)細(xì)胞缺乏巨噬細(xì)胞樣功能，但大腦受損傷時可激活小膠質(zhì)細(xì)胞，一方面可通過與神經(jīng)細(xì)胞直接接觸，發(fā)揮腦內(nèi)吞噬細(xì)胞的毒性作用；另一方面是分泌的一些炎癥介質(zhì)如NO,TNF-α和IL-1，趨化因子MCP-1和RANTES等，導(dǎo)致繼發(fā)性腦損傷。趨化因子是一類對白細(xì)胞游走和活化具有重要作用的蛋白超家族，除了具有對T細(xì)胞的募集功能外，還能參與調(diào)控多種生物過程，如細(xì)胞黏附、吞噬、細(xì)胞因子產(chǎn)生、T細(xì)胞激活、血管生成與增殖等［3，4］。在各種原因所致的腦損傷過程中，趨化因子分泌增加，使炎癥反應(yīng)不斷放大，會進一步加重腦損傷［5］。

糖皮質(zhì)激素類由于具有抗炎、穩(wěn)定細(xì)胞膜的作用，多年來一直被作為重型顱腦損傷的重要輔助治療藥物之一［6］。潑尼松龍屬于中效腎上腺皮質(zhì)激素類藥。主要用于嚴(yán)重的細(xì)菌感染和過敏性疾病、各種血小板減少性紫癜、粒細(xì)胞減少癥、嚴(yán)重皮膚病、器官移植的免疫排斥反應(yīng)、腫瘤的治療及對糖皮質(zhì)激素敏感的眼部炎癥等。本文研究了潑尼松龍對小膠質(zhì)細(xì)胞被LPS激活時所分泌的趨化因子MCP-1的影響。

1資料與方法

試劑

潑尼松龍和脂多糖(LPS)為美國Sigma公司產(chǎn)品，細(xì)胞培養(yǎng)液用的MEM(MinimumEssentialMedium)為美國GibcoBRL公司產(chǎn)品，MCP-1ELISA試劑盒為美國R&DSystems公司產(chǎn)品。

方法

小膠質(zhì)細(xì)胞的體外培養(yǎng)及藥物處理取10只新生小鼠(1～2d齡)，在無菌條件下，剪開顱骨，取出腦組織［7］。分離后的細(xì)胞用10%熱滅活胎牛血清的MEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)10d后使用。細(xì)胞接種于48孔培養(yǎng)板(×105細(xì)胞·ml-1，ml/孔)中12h后進行實驗。實驗可分為空白對照組、LPS處理組、潑尼松龍組、試藥組，并繼續(xù)培養(yǎng)12h后，用相應(yīng)的ELISA試劑盒來測定趨化因子MCP-1的含量。

統(tǒng)計學(xué)處理

實驗各項數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理分析，P被認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

LPS對小膠質(zhì)細(xì)胞分泌MCP-1的影響

如圖1所示，LPS能高度激活小膠質(zhì)細(xì)胞并且能使MCP-1分泌增加。在MEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)小膠質(zhì)細(xì)胞，培養(yǎng)液中添加不同濃度的LPS，用ELISA法測定細(xì)胞外液所分泌的MCP-1的含量。LPS處理后6h時已細(xì)胞培養(yǎng)液中MCP-1含量較空白對照組有明顯增高，成劑量依賴性和時間依賴性(圖1A和B)。

潑尼松龍對LPS誘導(dǎo)的MCP-1含量的影響

圖2顯示，培養(yǎng)液中添加LPS與10μmol·L-1的潑尼松龍后，再培養(yǎng)12h時，測定細(xì)胞外液所分泌的MCP-1的含量。結(jié)果，潑尼松龍明顯抑制MCP-1分泌，與LPS組比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3討論

小膠質(zhì)細(xì)胞參與CNS的各種生理和病理過程。腦缺血后，反應(yīng)性小膠質(zhì)細(xì)胞一方面轉(zhuǎn)化為吞噬細(xì)胞，通過吞噬死亡神經(jīng)細(xì)胞殘骸和變性的突觸，有利于神經(jīng)元再生和死亡周邊區(qū)神經(jīng)元的存活。同時通過釋放和分泌一系列的神經(jīng)毒性物質(zhì)和炎性因子，如氧自由基、NO、超氧化物、TNF-α，IL-β和蛋白酶等，導(dǎo)致繼發(fā)性腦損傷。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)與神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生密切相關(guān),如Alzheimer癥、多發(fā)性硬化、AIDS性癡呆、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化及創(chuàng)傷后腦缺血損傷。在這些疾病發(fā)生過程中,大腦定居的免疫細(xì)胞-小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)揮重要作用。大量研究結(jié)果證明,活化的小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生大量的NO，TNF-α，IL-β、自由基及類花生酸類物質(zhì)等致炎物質(zhì)和潛在的細(xì)胞毒性因子,引發(fā)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng)是神經(jīng)變性疾病發(fā)展早期主要事件,過量生成/積聚的炎癥因子與神經(jīng)細(xì)胞死亡有關(guān)。因此,抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活性被認(rèn)為是研究神經(jīng)保護策略中的主要焦點之一。LPS能高度活化小膠質(zhì)細(xì)胞并產(chǎn)生NO，TNF-α，IL-β、自由基及趨化因子等致炎物質(zhì),從而引起神經(jīng)元的損傷［8］。因此,常把能否逆轉(zhuǎn)LPS引起的小膠質(zhì)細(xì)胞活化作為評價神經(jīng)保護作用的客觀指標(biāo)。趨化因子在各種中樞性損傷的急性相反應(yīng)，可能促進損傷的修復(fù)和痊愈。然而它們的慢性病變增加和過多分泌會加重炎癥和損傷。

MCP-1屬于CC趨化因子家族中一員，在腦損傷過程中起非常重要的作用。

潑尼松龍屬于中效糖皮質(zhì)激素類藥。主要用于嚴(yán)重的細(xì)菌感染和嚴(yán)重的過敏性疾病、各種血小板減少性紫癜、腫瘤的治療及對糖皮質(zhì)激素敏感的眼部炎癥等。糖皮質(zhì)激素類由于具有抗炎、穩(wěn)定細(xì)胞膜的作用，多年來一直被作為重型顱腦損傷的重要輔助治療藥物之一。白宇等［9］曾有報道，甲基潑尼松龍對急性腦衰竭有顯著治療作用,對于全身性疾病所致的急性腦衰竭療效顯著優(yōu)于顱內(nèi)疾病所致者。為進一步研究潑尼松龍的神經(jīng)保護作用機制，本實驗研究了潑尼松龍對小膠質(zhì)細(xì)胞激活時所分泌的趨化因子MCP-1的影響。結(jié)果表明潑尼松龍對正常的小膠質(zhì)細(xì)胞無明顯影響，卻對LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞激活時所分泌的MCP-1的含量有明顯的抑制作用。這些結(jié)果提示，潑尼松龍的神經(jīng)保護作用可能通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化時所分泌的趨化因子的產(chǎn)生,為進一步闡明潑尼松龍的神經(jīng)保護作用機理提供有力的實驗依據(jù)。

【參考文獻】

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［8］KimWG.,Mohney,RP.,Wilson,B.,