60例胃腺癌微淋巴管密度的研究

60例胃腺癌微淋巴管密度的研究

【摘要】目的探討胃腺癌中微淋巴管的分布特點及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法采用微淋巴管特異標記D2-40對60例胃腺癌的癌中心組織、癌邊緣區(qū)組織及其相應正常組織進行免疫組織化學染色檢測微淋巴管密度，以CD34標記血管作對比。結(jié)果胃癌中心未見明顯微淋巴管；邊緣區(qū)微淋巴管明顯增多，胃癌邊緣區(qū)淋巴管密度較正常胃組織增高()，胃癌邊緣區(qū)微淋巴管密度與胃腺癌分化程度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(或)。結(jié)論胃癌組織邊緣區(qū)存在新生微淋巴管，癌周圍微淋巴管密度增加與胃腺癌分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，胃癌邊緣區(qū)微淋巴管密度測定對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移可能性的判斷具有一定意義。

【關(guān)鍵詞】胃腫瘤；淋巴管新生；微淋巴管密度；淋巴轉(zhuǎn)移；腫瘤轉(zhuǎn)移

Abstract：ObjectiveToinvestigatethedistributionpatternsoflymphaticmicrovesselingastricadenocarcinomaandtheirrelationshipwithlymphonodemetastasisofgastricadenocarcinoma.MethodsIncentralcancertissues，theperitumoraltissuesandcorrespondentnormaltissuesof60patientswithgastricadenocarcinoma，theexpressionofD2-40andCD34weredetectedbyimmunohistochemistry，bywhichthelymphaticmicrovesseldensity(LMVD)wascalculated.ResultsThemicrovesseltissueswerenotfoundincentralgastricelevatedmicrovesseltissueswereshowninperitumoralgastricadenocarcinoma，comparedtonormaltissues，therewasasignificantdifference().Themicrovesseldensityinperitumoraltissuesofgastriccarcinomawasassociatedwiththedifferentiationdegreeandthelymphaticmetastasis(or).ConclusionThelymphangiogenesisisshowninperitumoraltissuesingastricadenocarcinoma，elevatedLMVDingastricadenocarcinomashowedpositiverelationswithlymphaticmetastasisanddifferentiationtype.

Keywords：stomachneoplasms；lymphangiogenesis；lymphaticmicrovesseldensity；lymphaticmetastasis；neoplasmmetastasis

腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移機理與腫瘤新生淋巴管研究成為繼血管生成機理研究的前沿領(lǐng)域，新的淋巴管的特異性標記物的發(fā)現(xiàn)為深入淋巴管機理的研究提供了可能。新近研究表明［1］，許多腫瘤可能存在新生淋巴管機理，通過用淋巴管內(nèi)皮細胞表面標記證實在腫瘤周圍存在著淋巴管新生和淋巴管擴張的現(xiàn)象，腫瘤具有使其周圍淋巴管數(shù)目增加的特性，導致其轉(zhuǎn)移的可能性得到提高。本組在同一組織中用單克隆抗體D2-40和CD34兩種免疫組化方法，對人胃腺癌組織進行微淋巴管與微血管的染色，觀察微淋巴管的分布特點，探討其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1資料與方法

一般資料選取60例2001～2002年桂林醫(yī)學院附屬醫(yī)院行根治術(shù)切除原發(fā)性胃癌病例，高、中、低分化腺癌各20例；要求包癌中心組織、癌邊緣區(qū)組織和相應周圍大致正常組織，癌邊緣區(qū)組織距腫物邊緣以內(nèi)，周圍大致正常胃壁組織距腫物邊緣≥5cm。其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者38例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例。所選病例男34例，女26例；年齡34～60歲，平均歲。

免疫組織化學染色聯(lián)合運用兩種免疫組化D2-40和CD34。淋巴管特異標記D2-40對60例胃癌組織、癌邊緣區(qū)組織及其相應正常組織進行免疫組織化學染色檢測微淋巴管密度，以CD34標記微血管作為對比。常規(guī)石蠟切片共4張，一張為HE常規(guī)染色，兩張分別以D2-40和CD34為一抗標記微淋巴管和微血管，一張以PBS代替抗體作為陰性對照。D2-40(購自美國SantaCruz公司)和CD34抗體(福州邁新生物技術(shù)公司)免疫組織化學染色方法按兩步法步驟進行，經(jīng)DAB顯色后，蘇木素復染，中性樹膠封片，PBS代替一抗作陰性對照。

結(jié)果判定D2-40和CD34陽性的判定以細胞質(zhì)染色有清晰淡黃色至棕黃色顆粒。本組將D2-40+/CD34-管腔視為微淋巴管，將CD34+管腔視為微血管。管腔的判定標準：棕黃色細長管壁包繞的條索狀或塌陷狀不規(guī)則形的管腔，內(nèi)無紅細胞，由大且向腔內(nèi)突出的單層內(nèi)皮細胞構(gòu)成。

結(jié)果計數(shù)參照OhnoM等［2］報道方法進行微淋巴管密度計數(shù)；微淋巴管密度計數(shù)方法為每張切片先在低倍鏡下先選取胃癌組織、癌周組織、以及周圍正常組織陽性染色脈管最豐富區(qū)，確定5個管腔著色最密集的區(qū)域，然后在高倍光鏡視野下分別對微淋巴管進行計數(shù)，每例數(shù)5個視野，然后取其平均值進行統(tǒng)計學分析。

統(tǒng)計學分析采用t檢驗，統(tǒng)計學處理采用統(tǒng)計分析軟件。

2結(jié)果

微淋巴管結(jié)構(gòu)和分布特點通過免疫組織化學染色，本組60例中有5例(%)癌組織、癌旁組織及正常胃癌組織中均未見D2-40陽性的淋巴管。其余55例(%)在癌組織、癌旁組織及正常胃組織中均可見D2-40+/CD34-的淋巴管。光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，淋巴管內(nèi)皮染色為棕黃色，呈條索狀或不規(guī)則裂隙狀。在癌邊緣區(qū)組織淋巴管壁薄，缺乏基底膜，散在或成簇分布，部分擴張或形成狹窄的腔隙。正常胃組織淋巴管形態(tài)正常，分布于胃壁各層中，以粘膜下層最多，淋巴管數(shù)目較癌邊緣區(qū)減少。原發(fā)性胃癌組織中心區(qū)未見明顯開放性淋巴管。高分化腺癌與低、中腺癌相比，微淋巴管數(shù)目有明顯差異；有淋巴轉(zhuǎn)移患者微淋巴管數(shù)目比沒有淋巴轉(zhuǎn)移患者增多。

胃腺癌邊緣區(qū)組織與周圍正常組織微淋巴管密度比較胃癌邊緣區(qū)組織微淋巴管密度(±個/HP×400)較周圍正常胃組織微淋巴管密度(±個/HP×400)增高(t=，P＜)。

高、中、低分化胃腺癌邊緣區(qū)組織微淋巴管密度比較高分化腺癌陽性表達17例，邊緣區(qū)組織微淋巴管密度為±個/HP×400；中分化腺癌陽性表達19例，邊緣區(qū)組織微淋巴管密度為±個/HP×400；低分化腺癌陽性表達19例，邊緣區(qū)組織微淋巴管密度為±個/HP×400。兩兩比較可見高分化腺癌與中、低分化腺癌比較差異均有顯著性(t分別為與，或)，而中、低分化腺癌比較差異無顯著性(t=，)。

有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例胃腺癌邊緣區(qū)組織微淋巴管密度比較在胃腺癌邊緣區(qū)組織有淋巴轉(zhuǎn)移患者36例，微淋巴管密度為±個/HP×400；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者19例，微淋巴管密度為±個/HP×400；前者微淋巴管密度明顯增高(t′=，P＜)。

3討論

淋巴道轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤最常見、最重要的轉(zhuǎn)移途經(jīng)。SabinF在上世紀初通過對豬胚胎發(fā)育的研究認為一部分內(nèi)皮細胞從靜脈出芽生長后形成原始淋巴囊，然后再向周圍蔓延生長形成淋巴管系統(tǒng)，在發(fā)育過程中與血管系統(tǒng)相互連通。但多年來對其轉(zhuǎn)移過程和機理不甚清楚，主要原因是沒有可靠的淋巴內(nèi)皮標記物，近年來，VEGF-C、D的克隆成功以及淋巴管內(nèi)皮細胞特異標記物(如podoplanin、prox-1、LYVE-1、D2-40等)的相繼發(fā)現(xiàn)，逐漸為腫瘤淋巴管生成研究提供了較為可靠的手段。單克隆抗體D2-40［3，4］是氧連接型唾液酸糖蛋白，僅存在于淋巴內(nèi)皮細胞上，目前被廣泛作為淋巴管的特異性標記物。

最近的研究［5］，通過用淋巴管內(nèi)皮細胞表面標記證實在腫瘤周圍存在著淋巴管新生和淋巴管擴張的現(xiàn)象，腫瘤具有使其周圍淋巴管數(shù)目增加的特性，通過腫瘤邊緣組織的淋巴管而進入淋巴系統(tǒng)造成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，導致其轉(zhuǎn)移的可能性得到提高。已在食管癌、胃癌、大腸癌、黑色素瘤等疾病中發(fā)現(xiàn)有淋巴管新生，新生淋巴管在腫瘤周邊部呈擴張狀。體內(nèi)動物實驗［6］證實，通過抑制VEGF-D、VEGF-C的表達，抑制腫瘤的淋巴管新生，可抑制腫瘤的生長速度和大小癌組織內(nèi)的微淋巴管密度明顯低于正常組織()，癌巢間隙的微淋巴管數(shù)目少，可能因為腫瘤組織過度生長使原有的淋巴管結(jié)構(gòu)破壞，并擠壓原有的淋巴管，使癌巢間隙的淋巴管數(shù)目減少，管腔變窄。癌組織內(nèi)可能并無新生淋巴管生成。本實驗結(jié)果與此相吻合。

腫瘤邊緣淋巴管新生這一概念已經(jīng)漸漸被人們所接受。在腫瘤發(fā)展過程中，腫瘤邊緣相關(guān)的淋巴管形成，淋巴管增生，促進腫瘤細胞的淋巴管轉(zhuǎn)移。本實驗結(jié)果與其相吻合，胃腺癌邊緣組織的微淋巴管密度比周圍正常粘膜差異有顯著性()。本實驗比較了高、中、低分化腺癌邊緣組織微淋巴管密度的差異，結(jié)果可知高分化腺癌與中、低分化腺癌差異有顯著性(或)，而中低分化腺癌間差異無顯著性()，與Xing-ELiu等［7］相吻合，可見胃癌分化程度與微淋巴管密度密切相關(guān)。

但是，Wilting等［8］最近指出，“一個完全公開的問題是腫瘤淋巴系統(tǒng)的發(fā)展和淋巴轉(zhuǎn)移灶形成的關(guān)系?！盡ichael等［9］指出VEGF-C本能地引起人類腫瘤，和腫瘤細胞到局部淋巴結(jié)促進淋巴管新生與播散相關(guān)聯(lián)。然而不知道是原來的淋巴管有效完成這個功能，還是轉(zhuǎn)移需要毛細淋巴管的重新形成(淋巴管新生)，Leu［10］提出不一定產(chǎn)生淋巴管新生，原來的淋巴系統(tǒng)擴大VEGF-C在腫瘤中的反應將能足夠的論證這種假設(shè)正確，可能有必要調(diào)用VEGF-C非淋巴管新生的功能促進淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，這可能包括營養(yǎng)的產(chǎn)生，促有絲分裂或VEGF-C刺激淋巴上皮產(chǎn)生趨化因子，或改變淋巴上皮細胞的粘附性等。目前，對這種潛在的交互作用一無所知。

VEGF-C、VEGF-D/VEGFR-3信號通路異?？赡苁悄[瘤淋巴管生成或擴張的機理，因此，通過應用VEGFR-3的中和抗體、可溶性細胞外片段或低分子量抑制物抑制該信號通路，可能是抗腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移治療的一種新方法［11］。對于主要經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移的腫瘤可采用腫瘤新生淋巴管抑制劑治療，如目前實驗階段的VEGFR-3抗體通過阻斷VEGF-C與VEGFR-3的結(jié)合從而抑制腫瘤的淋巴管生成與轉(zhuǎn)移?？鼓[瘤新生淋巴治療有希望成為繼抗腫瘤新生血管治療之后的又一腫瘤生物治療新模式，具有美好的應用前景［12］。淋巴管新生有利于腫瘤病人的早期發(fā)現(xiàn)、早期治療及康復。

【參考文獻】

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［6］KarkkainenMJ，MakinenT，Alitaloendothelium：anewfrontierofmetastasisresearch［J］.NatCellBiol，2002，4(1)：E2-5.

［7］Xing-ELiu，Xiao-DongSun，Jin-MinandsignificanceofVEGF-CandFLT-4ingastriccancer［J］.WorldJGastroenterol，2004，10(3)：352-355.

［8］Wil