體外診斷試劑分析性能評估課件

體外診斷試劑分析性能評估指導(dǎo)原則1整理ppt1.檢測限2.線性范圍3.可報告范圍4.準(zhǔn)確度（回收實驗）5.準(zhǔn)確度（方法學(xué)比對）6.精密度7.干擾實驗8.穩(wěn)定性9.參考值（參考區(qū)間）2整理ppt檢測限檢測限評估的基本原則實驗人員應(yīng)熟悉檢測方法與儀器操作；采用合適的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品并保持儀器處于正常狀態(tài)；用于實驗的試劑應(yīng)為同一批號，且在有效期內(nèi)。3整理ppt檢測限檢測限的評估和數(shù)據(jù)處理方法實驗材料和基本要求空白樣本的制備：空白樣本應(yīng)不含被測物，但其基質(zhì)應(yīng)與待測定常規(guī)樣本相同。如空白樣本難以得到，可采用5%牛血清或人血清白蛋白溶液?；蚋鶕?jù)測定項目選用相應(yīng)基質(zhì)的樣本，但應(yīng)注意將基質(zhì)效應(yīng)減至最小。實驗方法在一次運行中將空白樣本重復(fù)測定20次。數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)記錄：將測定結(jié)果記錄于表格中。如果檢測系統(tǒng)對于低于零的結(jié)果報告為零，應(yīng)記錄初始響應(yīng)值，如吸光度值等。數(shù)據(jù)統(tǒng)計：計算20次結(jié)果的均值與標(biāo)準(zhǔn)差SD。結(jié)果報告：以空白均值加兩倍標(biāo)準(zhǔn)差報告方法的檢測限。4整理ppt線性范圍線性范圍評估的基本原則實驗操作人員應(yīng)熟悉方法原理與操作，能對樣本進行正確處理，確保儀器工作狀態(tài)正常，采用適當(dāng)?shù)男?zhǔn)品對儀器進行校準(zhǔn)。儀器的各項性能指標(biāo)（如精密度）應(yīng)與標(biāo)稱值相符，不存在明顯的攜帶污染等。應(yīng)使用同批號試劑及校準(zhǔn)品。5整理ppt線性范圍基本要求樣本基質(zhì)應(yīng)與臨床實驗樣本相似，但不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣本，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣本。進行血清學(xué)標(biāo)志物檢測時，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清。建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇7-11個濃度水平。如將預(yù)期測定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實驗結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。當(dāng)對標(biāo)稱線性參數(shù)進行驗證時，需在已知線性范圍內(nèi)選擇5-7個濃度水平。無論是建立或驗證線性范圍，所選用的濃度水平應(yīng)可覆蓋整個預(yù)期測定范圍并包括與臨床有關(guān)的重要評價濃度，如最小測定濃度或線性范圍的最低限、不同的醫(yī)學(xué)決定水平、最大測定濃度或線性范圍的高限等。6整理ppt線性范圍制備方法不同濃度水平的樣本可通過將高濃度樣本與低濃度樣本進行倍比稀釋得到，注意在進行液體吸取時應(yīng)選擇精密度與準(zhǔn)確性好的移液裝置。制備時應(yīng)將樣本完全混合并避免蒸發(fā)或其他使樣本變質(zhì)的情況。每份樣本的濃度與體積單位應(yīng)統(tǒng)一。如果高/低濃度血清的值未知，可將每種血清編碼，用編碼代表每個血清的相對濃度。對于等濃度間隔樣本，可用連續(xù)整數(shù)（如1、2、3、4、5）代表連續(xù)樣本。進行數(shù)據(jù)處理時可用樣本號代替X值。樣本的特殊處理：在無法得到適用的人血清時，需對樣本進行一些特殊處理以滿足實驗要求。這些處理過程包括稀釋、加入添加物或透析、熱處理等，無論進行何種處理均應(yīng)以保持基質(zhì)恒定為基本原則。在評價報告中應(yīng)對所使用的稀釋液、添加物、溶劑等的材料來源加以注明。7整理ppt線性范圍實驗過程建立線性范圍：需測定9-11個濃度水平，每個濃度水平重復(fù)測定3-4次驗證標(biāo)稱線性參數(shù)：需測定4-6個濃度水平，每個濃度水平重復(fù)測定3-4次。所有樣本應(yīng)在一次運行中或幾次間隔很短的運行中隨機測定，最好在一天之內(nèi)完成。8整理ppt線性范圍結(jié)果報告線性范圍報告的具體格式不要求，但至少應(yīng)包括以下幾方面：進行線性評價的實驗室或生產(chǎn)廠家名稱。被評價的方法或試劑名稱，批號。測定項目。線性范圍（如為二階線性應(yīng)包括臨床允許誤差）。如可能應(yīng)標(biāo)出測定項目的醫(yī)學(xué)決定水平及在此水平處的臨床允許誤差。9整理ppt可報告范圍可報告范圍評估的基本原則1.實驗人員應(yīng)熟悉測定方法與儀器操作。2.采用合適的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品并保持儀器處于正常狀態(tài)。3.用于評價實驗的試劑應(yīng)為同一批號，并在有效期內(nèi)。10整理ppt可報告范圍樣本要求最好選擇與測定樣本具有相同基質(zhì)的樣本。制備方法低值樣本：將待測樣本（含被分析物）用混合人血清（含被分析物濃度水平較低）或5%牛血清白蛋白生理鹽水溶液進行稀釋，產(chǎn)生接近于方法線性范圍低限濃度水平的樣本，一般為5個濃度水平，濃度水平間隔應(yīng)小于線性范圍低限的10%。高值樣本：選取含被測物的高值樣本，必要時可添加被分析物的純品，并計算出理論值。使用混合血清或5%牛血清白蛋白生理鹽水溶液或測定方法要求的稀釋液對高值待測樣本進行稀釋，使其接近于線性范圍的上1/3區(qū)域內(nèi)，并記錄稀釋倍數(shù)。至少選用三個高濃度樣本，稀釋倍數(shù)應(yīng)為方法性能標(biāo)明的最大稀釋倍數(shù)、并適當(dāng)增加或減小稀釋比例。11整理ppt可報告范圍實驗過程在一次運行中將低值樣本重復(fù)測定10次，高值稀釋樣本重復(fù)測定3次。數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)記錄：可根據(jù)附表進行數(shù)據(jù)記錄。數(shù)據(jù)統(tǒng)計：分別計算AVE、SD、CV值。對于可報告范圍高限還應(yīng)計算乘以稀釋倍數(shù)后的還原濃度和相對偏差。結(jié)果報告可報告范圍低限：以方法性能標(biāo)示的CV值為可接受界值，由數(shù)據(jù)中選取CV值等于或小于可接受界值的最低濃度水平做為可報告范圍低限?？蓤蟾娣秶呦蓿哼x取還原濃度與理論濃度的偏差（%）等于或小于方法標(biāo)示CV值時的最大稀釋倍數(shù)為方法推薦的最大稀釋倍數(shù)，方法線性范圍的上限與最大稀釋倍數(shù)的乘積為該方法可報告范圍的高限。12整理ppt準(zhǔn)確度——回收實驗回收實驗評估的基本原則1.實驗人員應(yīng)熟悉測定方法與儀器操作。2.采用合適的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品并保持儀器處于正常狀態(tài)。

13整理ppt準(zhǔn)確度——回收實驗實驗樣本的基本要求和制備方法1選擇合適濃度的常規(guī)檢測樣本，分為體積相同的3-4份。2在其中2-3份樣本中加入不同量的待測物標(biāo)準(zhǔn)，制成2-3個不同加入濃度的回收樣本，計算加入的待測物的濃度。3在另一份樣本中加入同樣量的無被測物的溶劑，制成基礎(chǔ)樣本。實驗過程用待評價方法對回收樣本和基礎(chǔ)樣本進行測定，通常對樣本進行2-3次重復(fù)分析，取其均值進行計算。數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報告1計算回收率：回收率1=2可接受判斷：比例系統(tǒng)誤差不大于CLIA88允許總誤差的1/2

14整理ppt準(zhǔn)確度——回收實驗注意事項：1加入體積：加入的標(biāo)準(zhǔn)液體積一般在樣本體積的10%以內(nèi)；并且保證在加樣過程中的取樣準(zhǔn)確度。2加入待測物的濃度：在保證總濃度在方法分析測量范圍內(nèi)，盡量使加入標(biāo)準(zhǔn)液后樣本中的被測物濃度達到醫(yī)學(xué)決定水平。3標(biāo)準(zhǔn)物濃度：因為標(biāo)準(zhǔn)物溶液加入體積不到10%，為保證得到不同濃度的回收樣本，標(biāo)準(zhǔn)物的濃度應(yīng)該足夠高。15整理ppt準(zhǔn)確度——方法學(xué)比對方法學(xué)比對的基本原則1.熟悉待評價系統(tǒng)。2.編寫儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，其中包括校準(zhǔn)程序和室內(nèi)質(zhì)控程序。3.比對方法的選擇：對于比較、對方法，采用符合生產(chǎn)廠家要求的實驗室現(xiàn)行方法，或采用公認的參考方法。比對方法應(yīng)具有以下條件：（1）具有比實驗樣品方法更好的精密度。（2）沒有已知的干擾物。（3）同實驗樣品方法具有相同單位。比較方法應(yīng)該選擇正確性經(jīng)過驗證的方法,根據(jù)實際條件,選擇的順序如下：參考方法、原裝系統(tǒng)、配套系統(tǒng)、經(jīng)過驗證的非配套系統(tǒng)。4.待評價方法的處理：進行方法學(xué)對比實驗前，應(yīng)該對系統(tǒng)進行初步評價（可參考NCCLSEP-10），并且對待評價方法進行精密度評價（參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)）,只有在以上評價完成并且達到相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)后，才可進行對比實驗。16整理ppt準(zhǔn)確度——方法學(xué)比對實驗樣本的基本要求1按照實驗對樣品的要求收集處理病人樣品，樣本貯存時間及條件由被測組分的穩(wěn)定性而定，盡可能避免使用貯存的樣品。2樣品應(yīng)來自于許多病人，并且此病人的疾病對于被測組成的影響應(yīng)該是知道的，不要使用含有干擾此方法的組分或條件(如溶血)樣品。3在具有臨床意義范圍內(nèi)即醫(yī)學(xué)決定水平范圍內(nèi)，評價實驗樣品方法，通?；緩牡陀趨⒖挤秶牡拖薜礁哂趨⒖挤秶母呦?。分析濃度盡可能在報告的濃度范圍內(nèi)均勻分布。商品質(zhì)控物或者校準(zhǔn)物可能存在基質(zhì)效應(yīng)，應(yīng)避免使用。17整理ppt準(zhǔn)確度——方法學(xué)比對實驗過程1每天選擇8個臨床病人樣本，按1到8的順序編號。用兩種方法同時進行實驗，按照1，2，3，4，5，6，7，8，8，7，6，5，4，3，2，1的樣本順序進行測定。2以上實驗至少重復(fù)5天，即至少分析40個不同的臨床病人樣本。每天實驗必須進行校準(zhǔn)和室內(nèi)質(zhì)控。只有在室內(nèi)質(zhì)控合格的情況下，當(dāng)天的實驗室數(shù)據(jù)才有效。18整理ppt精密度1.批內(nèi)精密度是眾多種類精密度中最基本的一個，它是在嚴格的相似條件下，所得到的最佳的精密度。2.批間精密度指在同一實驗室，由同一（組）操作員在同一儀器上，使用同一方法和同種、同一批號試劑，在一段時間內(nèi)(一般為一個月或20個工作日)對同一測試樣品（常用質(zhì)控品）測量結(jié)果的精密度。19整理pptTextinhere精密度精密度評估的基本原則1.操作者必須熟悉方法和/或儀器工作原理，了解并掌握儀器的操作步驟和各項注意事項，能在評估階段維持儀器的可靠和穩(wěn)定。2.用于評估試驗的樣品一般常采用臨床實驗室收集的穩(wěn)定和冷凍貯存的血清(漿)庫；當(dāng)實驗室收集的樣品不穩(wěn)定或不易得到時，也可考慮使用穩(wěn)定的、以蛋白質(zhì)為基質(zhì)的商品物質(zhì)，如校準(zhǔn)品或質(zhì)控品。3.評估精密度時，應(yīng)至少評估二個濃度水平樣本的精密度。當(dāng)二個濃度的精密度有顯著差異時，建議增加為三個濃度。所選樣本濃度應(yīng)在測量范圍內(nèi)有醫(yī)學(xué)意義，即至少有一個濃度在醫(yī)學(xué)決定水平(medicaldecisionlevels)左右。不要為了得到較小的精密度，都選用較高值的樣品，甚至超出測量范圍。也不應(yīng)選用靠近最低檢出限的樣品，此時所得的精密度往往偏大。相當(dāng)多的檢驗項目低值常無實際臨床意義，但有少數(shù)檢驗項目，其低值也有臨床價值，此時就需要評估有判斷價值的低值精密度，適用時，可進行功能靈敏度的評估。如沒有醫(yī)學(xué)決定水平，可在參考區(qū)間上限左右選一個濃度。此外，再根據(jù)檢驗項目的性質(zhì)在線性區(qū)間內(nèi)選擇另一個值。如與廠商或文獻報導(dǎo)的精密度進行比較，所選濃度應(yīng)與被比較精密度的濃度相接近。否則，有可能得出不恰當(dāng)?shù)慕Y(jié)論。20整理ppt精密度只評估批內(nèi)不精密度1試劑和校準(zhǔn)品：應(yīng)使用同一種類、同一批號的試劑和校準(zhǔn)物,如可能,只進行一次校準(zhǔn)。使用不同批號試劑和多次校準(zhǔn)都會增加檢驗結(jié)果的變異程度。2評估方法：在以上條件滿足的情況下，在一批內(nèi)對樣本進行重復(fù)測定，至少進行20次重復(fù)測定。3質(zhì)量控制：檢驗時應(yīng)同時至少測一個質(zhì)控品。當(dāng)質(zhì)控品結(jié)果超出規(guī)定的失控限，不論實驗結(jié)果是否滿意都應(yīng)棄去不用，重新進行試驗以取得20個實驗數(shù)據(jù)。要保存所有的質(zhì)控數(shù)據(jù)和失控處理記錄。4數(shù)據(jù)收集：在進行數(shù)據(jù)分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)，可用下述離群值的標(biāo)準(zhǔn)；從已收集的20數(shù)據(jù)計算出總均值和標(biāo)準(zhǔn)差，任何結(jié)果和總均值的差值超過4個標(biāo)準(zhǔn)差時，可認為是離群值。為了能收集到至少20個有效數(shù)據(jù)。除補充由于質(zhì)控失控而增加的測試外，還應(yīng)再增加由于離群值不用于精密度的計算所需增加的檢驗次數(shù)。在進行這種批內(nèi)精密度評估實驗時，一次只能有一個離群值，當(dāng)離群值超過1個時，應(yīng)懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時，應(yīng)不用此次試驗數(shù)據(jù)。檢查問題和解決問題后重新開始新的評估實驗。21整理pptTextinhere精密度同時評價批內(nèi)和批間不精密度評估方法：每天做2個批次的測試，每批測試時，對同一樣品作雙份測量，共做20天。評估結(jié)束時共有40對，即80個測試結(jié)果。從40批次測量中雙份結(jié)果的差值求出批內(nèi)精密度。從所有80個數(shù)據(jù)計算出批間精密度。在實施此項評估工作時，必須由同一個或一組操作者在同一臺儀器上進行，應(yīng)該使用相同的校準(zhǔn)品、相同種類和批號的試劑。所用時間不得少于20個工作日，這樣所測到的精密度能更好地反映出該臨床實驗室定量測量方法在一段時間內(nèi)的理想或最適的穩(wěn)定性。在每一批次測量中，必須同時測量質(zhì)控品，以保證結(jié)果是可靠的，數(shù)據(jù)能夠采用。注：①也可以一日進行一個批次測量，一個批次中對同一樣品重復(fù)測量4次，共測20個工作日，由80個數(shù)據(jù)求出批內(nèi)和批間精密度；②如果取得穩(wěn)定樣品有困難，也可改為測5日，每日2個批次，每個批次測一個樣本8次。仍有80個數(shù)據(jù)。從10個批次中每一樣品8次差異算出批內(nèi)精密度。從所有80個結(jié)果計算出批間精密度。22整理ppt同時評價批內(nèi)和批間不精密度數(shù)據(jù)的收集要收集到足夠有效數(shù)據(jù)(至少為80個數(shù)據(jù))。除補充由于質(zhì)控失控而增加的測試外，應(yīng)在進行數(shù)據(jù)分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outlier)，可用下述剔除值的標(biāo)準(zhǔn)；從實施段已收集的40對均值的數(shù)據(jù)計算出總均值和標(biāo)準(zhǔn)差，出現(xiàn)下列任何一種情況都可認為是離群值：（1）任何一對均值和總均值的差超過4倍標(biāo)準(zhǔn)差（2）任何一對中二個結(jié)果的絕對差值超過4倍標(biāo)準(zhǔn)差離群值不用于精密度的計算。在剔除后應(yīng)再增加檢驗次數(shù)，以保證至少有40批次，80個數(shù)據(jù)進行計算。注：任何一次實驗的剔除值不能超過總測量數(shù)的2.5%。當(dāng)超過時，應(yīng)懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時應(yīng)不用此次試驗數(shù)據(jù)，重新開始新的試驗。精密度23整理ppt精密度精密度的報告形式精密度的結(jié)果受眾多因素影響，在報告測量精密度時，應(yīng)同時說明下列各點：批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差及其95%置信區(qū)間；批內(nèi)變異系數(shù);批間標(biāo)準(zhǔn)差及其95%置信區(qū)間;批間變異系數(shù);實驗進行的工作日數(shù);檢驗批次數(shù);每個批次重復(fù)檢驗數(shù)和總檢驗數(shù);試劑的種類和批號;校準(zhǔn)品種類、批號和校準(zhǔn)次數(shù);如適用，使用儀器的種類和型號。24整理ppt干擾實驗干擾實驗評估的基本原則（一）干擾物質(zhì)來源：干擾物質(zhì)可能來自內(nèi)源或外源物質(zhì)?？梢筛蓴_物質(zhì)的來源通常有：1.常見的異常標(biāo)本，例如溶血、黃疸及脂血；2.普通的處方藥及非處方藥；3.患者群體中異常的生化代謝物；4.患者群體中常見的治療藥物；5.干擾測量程序的藥物（包括代謝物）；6.已報道干擾相似測量程序的物質(zhì)；7.標(biāo)本處理過程中的添加物，例如抗凝劑、防腐劑；8.采集及處理過程中接觸標(biāo)本的物質(zhì)，例如血清分離設(shè)備、導(dǎo)管、標(biāo)本收集容器及塞子；9.影響某些實驗的膳食物質(zhì)，例如咖啡因，β-胡蘿卜素，罌粟籽。（二）在實施評價實驗前，必須決定臨床可接受的標(biāo)準(zhǔn)。（三）在實施評價實驗前，操作者必須熟悉儀器設(shè)備及測量程序并對精密度及準(zhǔn)確度進行評價，在進行實驗設(shè)計時要避免遺留效應(yīng)影響分析結(jié)果，確保分析系統(tǒng)保持穩(wěn)定。25整理ppt干擾實驗干擾實驗的評估及數(shù)據(jù)處理方法干擾物質(zhì)對實驗結(jié)果的影響，一般是通過測定對照或基礎(chǔ)樣本池中待測物的濃度計算得出的。在某些情況下，對照樣本池中可能含有一定量的內(nèi)源性干擾物質(zhì)，如膽紅素、血紅蛋白、蛋白質(zhì)和脂類。在一些測量程序中，采用標(biāo)本前處理、樣本空白、血清基質(zhì)校正物和因子校正等手段以減少這些干擾物質(zhì)在平均濃度下的影響，只有當(dāng)患者樣本中干擾物質(zhì)濃度高于或低于平均水平時，由于干擾物質(zhì)引起的誤差才會顯現(xiàn)出來?；诖耍袃煞N評估干擾物質(zhì)的基本方法，每一種方法都有它的優(yōu)點及內(nèi)在局限性，當(dāng)兩種方法同時使用時，可提供相互補充的信息。一種方法是將可疑干擾物質(zhì)加入樣本以評價干擾效果，另一種方法是測量個別有代表性病人標(biāo)本，相對于高特異性可比較的測量程序評價被分析測量程序產(chǎn)生的偏倚。26整理ppt干擾實驗實驗材料和基本要求（1）基礎(chǔ)樣本池：從一些未服用藥物的健康個體獲得新鮮標(biāo)本，以此反應(yīng)標(biāo)本基質(zhì)。若不能獲得新鮮標(biāo)本，可使用冷凍或凍干的標(biāo)本代替，但應(yīng)保證實驗材料充分接近新鮮臨床標(biāo)本。使用適當(dāng)純度的分析物將樣本池中分析物的濃度調(diào)整到醫(yī)學(xué)決定水平，但要避免引入其它的干擾物質(zhì)。（2）儲存溶液：準(zhǔn)備一種適當(dāng)純度或者最接近循環(huán)形式的可疑干擾物質(zhì)。選擇一種實驗物質(zhì)能充分被溶解的溶劑，例如試劑純水、稀釋的HCl或NaOH、甲醇或乙醇、丙酮、二甲亞砜（DMSO）及其他有機溶劑。制備至少20倍干擾物實驗濃度的儲存溶液。（3）每個標(biāo)本所需要的重復(fù)測量次數(shù)：雙側(cè)檢驗的實驗重復(fù)次數(shù)為：，單側(cè)檢驗用Z1-α代替Z1-α/2。其中，Z1-α/2是雙側(cè)檢驗的可信度為100(1-α)%時標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布相對應(yīng)的百分位數(shù)；Z1-α是單側(cè)檢驗的可信度為100(1-α)%時標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布相對應(yīng)的百分位數(shù)；Z1-β是把握度為100(1-β)%時標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布相對應(yīng)的的百分位數(shù)；dmax是檢測分析物濃度時最大允許的干擾（interference）；s是測量程序的重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差。由于實驗次數(shù)必須為整數(shù)，所以將計算結(jié)果四舍五入為整數(shù)。（4）干擾物實驗濃度：干擾物質(zhì)濃度應(yīng)達到病理標(biāo)本的最高濃度值。（5）分析物實驗濃度：分析物實驗濃度應(yīng)選擇兩個濃度水平。在大多數(shù)情況下，可選擇醫(yī)學(xué)決定水平、參考范圍的上、下限或病理濃度。27整理ppt干擾實驗實驗過程（1）選擇適當(dāng)?shù)姆治鑫餄舛?；?）建立一個臨床上顯著性差別（dmax）的標(biāo)準(zhǔn)；（3）決定每個樣本的重復(fù)次數(shù)；（4）制備一個基礎(chǔ)樣本池；（5）制備一個儲存溶液；（6）制備實驗樣本，將儲存溶液加至容量瓶體積的1/20，再用基礎(chǔ)樣本加至刻度，混勻；（7）制備對照樣本，將溶劑加至另一容量瓶體積的1/20，再用基礎(chǔ)樣本加至刻度，混勻；（8）在同一批測定中，交替分析實驗（T）及對照樣品（C），例如C1T1C2T2C3T3....CnTn；（9）記錄分析結(jié)果。28整理ppt穩(wěn)定性穩(wěn)定性評估的基本原則1.實驗操作人員能熟練應(yīng)用操作系統(tǒng)。能定期（包括：每日、每周、每月、每季度……）對所用儀器進行維護保養(yǎng)，按儀器說明書所要求定期更換易損零配件，每年請國家計量院對儀器濾光片進行校驗，使儀器處在正常的工作狀態(tài)，確保儀器有較好的測定精密度及減少樣本、試劑攜帶污染等。2.要采用與評價試劑配套的校準(zhǔn)品，校準(zhǔn)品的使用（儲存、復(fù)溶）應(yīng)嚴格按照產(chǎn)品說明，校準(zhǔn)步驟與間隔應(yīng)按照本室的標(biāo)準(zhǔn)操作程序進行。3.要做好室內(nèi)質(zhì)控，質(zhì)控物應(yīng)有可靠的來源，穩(wěn)定性應(yīng)在一年以上，應(yīng)盡可能采用人血清基質(zhì)，可選用定值或非定值質(zhì)控品，質(zhì)控物的使用（儲存、復(fù)溶）應(yīng)嚴格按照產(chǎn)品說明，質(zhì)控物的定值與靶值的確定應(yīng)按照本室的標(biāo)準(zhǔn)操作程序進行。4.進行穩(wěn)定性評價時應(yīng)注意試劑有效期及批號，不可采用過期試劑或不同批號的試劑，最好用同批混合試劑，這樣可避免瓶間差。試劑應(yīng)存放在說明書規(guī)定的條件下。工作液配制應(yīng)嚴格按照產(chǎn)品說明進行，試劑瓶上要標(biāo)注打開的日期及開瓶后的失效日期并簽上名或縮寫，要注意配制好的工作液是否需要避光保存。5.實驗室應(yīng)對用來保存試劑的冰箱有溫度監(jiān)控記錄，如果發(fā)現(xiàn)冰箱溫度可能存在問題，應(yīng)該及時調(diào)整冰箱溫度，以符合試劑保存的要求，如果不能調(diào)整，應(yīng)該及時轉(zhuǎn)移冰箱內(nèi)的試劑。還應(yīng)做好實驗室內(nèi)溫度記錄，對實驗用水進行電阻率的測定（不能低于1兆歐姆.厘米）。29整理ppt穩(wěn)定性實驗項目：1.1測定新配制的試劑工作液和穩(wěn)定期末試劑工作液兩組平均值之間的一致性。1.2測定穩(wěn)定期末試劑工作液的空白吸光度值。1.3測定穩(wěn)定期末試劑工作液的空白值實驗樣本：2.1兩組平均值之間的一致性實驗的樣本要求（1）臨床樣本（人血清）：可避免基質(zhì)效應(yīng)對結(jié)果的影響，力求新鮮，但不可選用含有對測定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣本，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣本。最理想的濃度為醫(yī)學(xué)決定水平（一般有兩個水平）。（2）質(zhì)控品：選擇易得到的、有可靠來源，穩(wěn)定性好的定值或非定值質(zhì)控物、此質(zhì)控物至少要有兩個濃度水平。2.2試劑空白吸光度值、試劑空白值實驗的樣本要求生理鹽水（開瓶時間在三個月內(nèi)）應(yīng)該透明清澈如出現(xiàn)沉淀或者混濁應(yīng)及時更換。實驗方法每個濃度水平樣本重復(fù)測定至少6次，計算平均值。新配制及穩(wěn)定期末工作液應(yīng)在同次運行中測定，可將儀器帶來的不精密度減到最小。30整理pptDescriptionofthecontentsDescriptionofthecontentsDescriptionofthecontents參考值（參考區(qū)間）定義1.參考個體：根據(jù)設(shè)計標(biāo)準(zhǔn)篩選出進行實驗的個體（確定一個人的健康狀況通常是非常重要的）。2.參考人群：由參考個體組成的群體。（參考人群的數(shù)量通常是未知的，因此它是一個假定的實體。參考人群也可以由一個人組成，例如為自身或其他人做參考。主題特異性參考個體在本指導(dǎo)文件中不包含在內(nèi)。）3.參考樣品組：選出適當(dāng)數(shù)量的個體以代表參考人群。4.參考值：經(jīng)過對一定數(shù)量參考個體的測量和觀查，所獲得的檢測結(jié)果。（對參考個體的實驗結(jié)果，參考值源于參考樣品組）5.參考值分布：一組參考值的分布。6.參考樣本組的參考值分布：通過測定，并用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計方法進行處理。7.參考人群的參考值分布：評估參考樣本組的參考值分布，并用統(tǒng)計方法進行處理。8.參考限：源自參考值的分布，用于描述部分參考值的位置（小于或等于、大于或等于、下限/上限。9.參考區(qū)間：參考值低限和高限之間。如：GLU：3.6～6.1mmol/L。有時只有參考值高限（X）有意義，其參考區(qū)間為：0～X)。10.觀測值：病人樣本的實驗室檢驗結(jié)果，與參考值、參考值分布、參考限、參考區(qū)間作比較。31整理ppt參考值（參考區(qū)間）選擇參考個體1.1概要健康是一個缺乏統(tǒng)一定義的概念，因此，確定排除非健康的標(biāo)準(zhǔn)是選擇參考個體的第一步。每一項研究均有不同的健康標(biāo)準(zhǔn)。一個準(zhǔn)參考個體的健康狀態(tài)需經(jīng)過一系列檢查才能確定，這些檢查包括病歷檢查或現(xiàn)狀態(tài)生理指標(biāo)的臨床實驗檢查。用于參考值研究的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)具有詳細的描述和證明，實驗操作者根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)來判定參考樣品組的健康狀態(tài)，調(diào)查問卷可用于評價每個參考個體的健康狀態(tài)。1.2排除和分組排除標(biāo)準(zhǔn)詳細規(guī)定了準(zhǔn)參考個體的非健康狀態(tài)，用于排除非健康參考樣本。表-1列出了基本的排除標(biāo)準(zhǔn)，此表并沒有囊括所有的排除標(biāo)準(zhǔn)，每個項目應(yīng)根據(jù)實際情況細化排除標(biāo)準(zhǔn)。分組標(biāo)準(zhǔn)詳細規(guī)定了組別特征。最常用的分組標(biāo)準(zhǔn)是年齡和性別。表-2還列出了其它的分組標(biāo)準(zhǔn)。各個項目可根據(jù)實際情況進行調(diào)整。排除和分組的最佳方法是調(diào)查問卷的方式。調(diào)查問卷常只需要回答“是”或“否”即可確定，也可與體檢同時進行。1.3選擇參考個體：健康參考值的參考個體不要求是健康年青人，他們應(yīng)與疾病人群相似。許多情況下，年齡相關(guān)的參考區(qū)間更適用于臨床診斷。但有些情況下，與年齡相關(guān)的實驗室指標(biāo)改變可能不代表健康狀況的變化，如老年人的總膽固醇或生長激素水平改變。除非特別需要（嬰兒、老年人），參考個體通常不應(yīng)是臨床病人。1.4抽樣調(diào)查問卷：為了保護參考個體的權(quán)益，應(yīng)確保問卷信息和檢測結(jié)果的保密性。32整理ppt參考值（參考區(qū)間）項目準(zhǔn)備：對所有的分析前條件，包括項目準(zhǔn)備、樣品收集和處理、分析方法、儀器，應(yīng)進行嚴格限定，限定條件應(yīng)可同時應(yīng)用于參考個體和患者人群。一般情況下，分析前應(yīng)考慮兩個因素，即生物學(xué)因素和方法學(xué)因素。生物學(xué)因素包括代謝和血液動力學(xué)，方法學(xué)因素包括樣品收集和處置等。樣本的種類、收集、處置和貯存實驗室應(yīng)有樣品收集、處置和貯存的標(biāo)準(zhǔn)操作手冊。選擇適宜的采血管，采血管不能引入外源性干擾。確定樣本是否可在厭氧條件下貯存。不應(yīng)使用溶血、脂血、黃疸的血清或血漿樣本。血樣如果選擇的樣本為血樣，應(yīng)確定需要的是動脈血、靜脈血還是毛細血管血。樣本需要抗凝時，應(yīng)選擇抗凝劑，應(yīng)明確樣本的采集方法。其它體液樣本其它的體液樣本包括尿液、腦脊液、胸膜積液、腹腔積液、心包積液、關(guān)節(jié)內(nèi)滑液、羊水和唾液等。應(yīng)注意體液收集的時間段。溫度應(yīng)明確樣本收集和貯存的溫度。通常情況下，樣本在采集后，應(yīng)盡快進行處置和檢測，盡量減少放置時間。33整理ppt參考值（參考區(qū)間）分析方法特征實驗室應(yīng)對所用檢測方法進行細致的描述和規(guī)定，應(yīng)建立不精密度、不準(zhǔn)確性、最小檢測限、線性、回收率、干擾特征的評價準(zhǔn)則。34整理ppt參考值（參考區(qū)間）考值（參考區(qū)間）評估的方法和結(jié)果報告1.新的分析物質(zhì)或分析方法1.1方法描述此方法適用于新分析物、新分析方法及以前的分析物參考值的建立。健康人群某分析物質(zhì)參考值的產(chǎn)生和參考區(qū)間的估計，應(yīng)根據(jù)一個詳細限定條件的方法進行，這些條件限定包括以下幾點。（1）根據(jù)醫(yī)學(xué)科技文獻，建立適宜的生物變異和分析干擾的項目列表。（2）建立選擇、排除及分組標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)計適宜的調(diào)查問卷，以揭示潛在參考個體的標(biāo)準(zhǔn)。（3）參加參考區(qū)間實驗的參考個體應(yīng)簽署書面同意協(xié)議，并完成調(diào)查問卷。（4）按照問卷結(jié)果及其它適宜的健康分析結(jié)果，對潛在的參考個體進行分類。（5）根據(jù)排除標(biāo)準(zhǔn)或體檢結(jié)果，從參考樣品組排除不符合要求的參考個體。（6）根據(jù)所需要的參考限，決定適宜的參考個體的數(shù)目。（7）用被分析物檢測的常規(guī)方法，對被選擇的參考個體進行采樣。（8）按照常規(guī)方法對樣本進行收集和處理。（9）按照被評價方法分析樣品，收集數(shù)據(jù)。整個過程與常規(guī)的操作保持一致。（10）檢測數(shù)據(jù)，設(shè)計圖表，以評價數(shù)據(jù)分布。（11）識別可能的數(shù)據(jù)錯誤。（12）選擇估計方法、估計參考限和參考區(qū)間，對參考區(qū)間進行分析。（13）對以上的步驟進行證明。35整理ppt參考值（參考區(qū)間）1.2結(jié)果分析

參考區(qū)間包括兩個值，即參考上限和參考下限。對于大多數(shù)分析物，以2.5%為低限，以97.5%為高限，通常確定范圍在2.5%～97.5%的測定值為參考值。有時，只有參考上限具臨床意義。對于單側(cè)指標(biāo)，可以確定第5百分位數(shù)或第95百分位數(shù)為參考值。1.2.1所需最少的參考個體數(shù)：120個觀測值可以滿足90%的置信限，153個觀測值可以滿足95%的置信限，198個觀測值可以滿足99%的置信限。作為通行標(biāo)準(zhǔn)，推薦一個分析項目至少需要120個參考個體數(shù)。如果實驗分組，每一組至少需要120個參考個體數(shù)。如果這120個參考值中，有不符合健康條件的值，將其排除后，應(yīng)補測符合標(biāo)準(zhǔn)的值，最終總體參考值不少于120個。1.2.2離群值的處理：設(shè)定比值D/R，其中D=最大值-次大值，或D=最小值-次小值，R為所有觀測值的極差。如果D≥1/3R，則極值應(yīng)被刪除。當(dāng)兩三個離群值處在數(shù)據(jù)分布的一側(cè)時，D≥1/3R規(guī)律常常不能識別出極值是否是具有顯著水平的異常值。這種情況下，1/3規(guī)律應(yīng)將最小的極值認定為離群值。1.2.3參考值分組：對不同性別、不同年齡之間參考區(qū)間的差異應(yīng)進行驗證，每一組至少應(yīng)選擇120個參考個體。一般情況下，如果兩組數(shù)據(jù)具有顯著性差異，則參考區(qū)間應(yīng)分別報告。兩組之間平均值差異應(yīng)用z檢驗進行驗證。第一步，每組先檢測60個個體。每一組平均值的顯著性差別應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)檢驗。36整理ppt參考值（參考區(qū)間）已有的分析物質(zhì)或分析方法1方法描述此方法適用于將已知的有效參考值（參考區(qū)間）從供給實驗室轉(zhuǎn)移到接收實驗室。在適宜的情況下，如果檢測主體、方法學(xué)、取樣方法均具有兼容性，參考值（參考區(qū)間）的轉(zhuǎn)移是可行的。測量系統(tǒng)之間的可比性可以通過相應(yīng)的方法進行驗證。37整理ppt參考值（參考區(qū)間）已有的分析物質(zhì)或分析方法2參考值（參考區(qū)間）的轉(zhuǎn)移參考值（參考區(qū)間）的轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的過程，為了使參考值具有可接收性，需要滿足一定的條件?？山邮盏霓D(zhuǎn)移條件應(yīng)視具體情況而定：2.1使用相同的分析系統(tǒng)（方法和儀器）：（1）在相同的實驗室里；（2）從一個實驗室到另一個實驗室；①檢測主體來自相同的地區(qū)或相同的人口統(tǒng)計學(xué)總體；②檢測主體來自不同的地區(qū)或不同的人口統(tǒng)計學(xué)總體；2.2使用不同的分析系統(tǒng)（不同的方法和不同的儀器）：（1）在相同的實驗室里；（2）從一個實驗室到另一個實驗室；①檢測主體來自相同的地區(qū)或相同的人口統(tǒng)計學(xué)總體；②檢測主體來自不同的地區(qū)或不同的人口統(tǒng)計學(xué)總體；如果首次參考值（參考區(qū)間）的測定已經(jīng)完成，則不同參考值（參考區(qū)間）的轉(zhuǎn)移應(yīng)著重注意兩個事項：即分析系統(tǒng)的結(jié)果可比性和樣本總體的可比性。整個的分析前過程及分析過程，均應(yīng)與首次參考值（參考區(qū)間）確立過程保持一致。38整理ppt參考值（參考區(qū)間）已有的分析物質(zhì)或分析方法3參考值（參考區(qū)間）確認：有三種方法可用于參考值（參考區(qū)間）轉(zhuǎn)移可接收性的評價。3.1參考值（參考區(qū)間）轉(zhuǎn)移可接收性可以通過對首次適宜參考值研究的相關(guān)要素的檢查來進行評估，包括參考總體的地區(qū)和人口統(tǒng)計學(xué)同質(zhì)性，分析