凝固酶陰性葡萄球菌課件

人的差異在于業(yè)余時(shí)間凝固酶陰性葡萄球菌●●●●●●●0●●0●0凝固酶陰性葡萄球菌致病性分子標(biāo)志物的建立與應(yīng)用姜美娟中國(guó)人民解放軍第401醫(yī)院第一部分研究背景和意義●●●●●●0●0●0●01、立題依據(jù)凝固酶陰性葡萄球菌(CoNS)廣泛存在于人體皮膚、黏膜等組織表面,常在血液、痰液、尿液、深靜脈置管等各種標(biāo)本中檢出。文獻(xiàn)報(bào)道,1995-1996年美國(guó)48個(gè)醫(yī)學(xué)中心2596份血標(biāo)本中,CoNS的分離率達(dá)322%。盡管血液等無菌體液培養(yǎng)出CoNS臨床意義較大,但據(jù)報(bào)道單次血培養(yǎng)CoNS污染的可能性仍高達(dá)85%。研究背景和意義●0●0◆近年來由于介入性診療操作、免疫抑制劑及廣譜抗生素的廣泛使用,CoNS已成為院內(nèi)感染的重要病原菌,而且耐藥菌株比金黃色葡萄球菌更為多見。葉聯(lián)華等報(bào)道人工瓣膜術(shù)后心內(nèi)膜炎中,約有40%50%由凝固酶陰性葡萄球菌引起;2009年中國(guó)CHINET細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)結(jié)果MRCONS檢出率平均為717%,大于MRSA的527%研究背景和意義●●●●●●0●0●0●0◆CoNS作為皮膚黏膜定植菌,在越來越多的標(biāo)本中被分離出來,常常引起臨床困惑。其是否能作為感染的病原菌是臨床關(guān)心的問題。◆有鑒于此,實(shí)驗(yàn)室建立對(duì)CoNS污染菌和致病菌界定的方法十分必要,是臨床明確診斷和制定合理治療方案的重要前提。研究背景和意義●●●●●●0●0●CoNS致病物質(zhì)0●0◆在CoNS感染的發(fā)病過程中,細(xì)菌先黏附繼而形成難以清除的生物膜是其最為重要的致病機(jī)制其中CoNS產(chǎn)生的多糖胞間黏附素(polysaccharideintercellularadhesion,PIA)是細(xì)菌生物膜形成聚集階段所必需的物質(zhì),在感染過程中起重要的作用,是鑒定其致病性的物質(zhì)基礎(chǔ)?！鬑eilmann等發(fā)現(xiàn)ica操縱子對(duì)合成PIA以及在細(xì)菌形成成熟的生物膜中起到非常重要的作用。研究背景和意義●●0●0ica基因結(jié)構(gòu)◆ica基因座定位于細(xì)菌染色體,全長(zhǎng)34kb,包括icaR調(diào)節(jié)基因及串聯(lián)存在的icaA、icaD、icaB和icaC結(jié)構(gòu)基因。其中,icaadBc4個(gè)基因構(gòu)成一個(gè)操縱子,可以通過檢測(cè)icaADBC基因來反映ica操縱子的存在。icaB不直接參與胞間黏附素的合成因?yàn)橹亟MPicaDo就能使細(xì)胞積聚;icaA單獨(dú)呈現(xiàn)低的N-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶活性;icaC涉及到把不斷合成的多糖物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞表面;生物膜的形成要求icaD編碼的產(chǎn)物具有最佳活性。因此我們選擇了icaD作為本試驗(yàn)的目的基因片段。研究背景和意義●●●●●●0●0●0●02、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹臬@得CoNS特異的致病性分子標(biāo)志物◆確立敏感、準(zhǔn)確、快速的醫(yī)院感染相關(guān)性CoNS特異基因診斷方法;◆能夠準(zhǔn)確鑒定致病性與非致病性CoNS●●●研究背景和意義●●●0●0●0●03、臨床意義研究CoNS的生物標(biāo)志物對(duì)該菌在醫(yī)院獲得性感染中的臨床微生物學(xué)診斷與鑒定,追蹤傳染源,探索其在醫(yī)院感染中的確切作用和地位、傳播與感染規(guī)律,從而對(duì)控制傳播途徑、建立準(zhǔn)確有效的防治措施具有重要實(shí)際意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值第二部分材料和方法●●●●●●0●0●0●01、研究對(duì)象◆陰性對(duì)照:表皮葡萄球菌ATCC12228,購自中國(guó)藥品鑒定所,經(jīng)基因組測(cè)序證明其ica操縱子缺失;◆陽性對(duì)照:表皮葡萄球菌1-97-337,瑞金醫(yī)院倪語星教授惠贈(zèng),含有完整ica操縱子;◆待測(cè)樣本:自2006年1月至2007年9月,收集我院臨床各科室共114例疑是感染性標(biāo)本。材料和方法●●●2、主要試劑●●●0●0●0●0培養(yǎng)基:哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基、剛果紅瓊脂培養(yǎng)基、LB肉湯增菌液◆引物SodA引物(5-CCITAYICITAYGAYGCIYTIGARCC-3'K5-ARRTARTAIGCRTGYTCCCAIACRTC-3)icaD引物(5"-AGGCAATATCCAACGGTAA-3'X5-GTCACGACCTTTCTTATATT-3)l6SrDNA引物(5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'XCCGTCAATTCCATTTRAGTTT-3)41、學(xué)問是異常珍貴的東西，從任何源泉吸收都不可恥?！⒉贰と铡しɡ?/p>

42、只有在人群中間，才能認(rèn)識(shí)自己。——德國(guó)

43、重復(fù)別人所說的話，只需要教育；