幽門螺桿菌臨床檢驗方法評估及選擇課件

幽門螺桿菌臨床檢驗方法評估及選擇南京鼓樓醫(yī)院體檢中心1幽門螺桿菌的特點幽門螺桿菌臨床檢驗方法及選擇幽門螺桿菌臨床檢驗方法分類各種檢驗方法的評估及選擇2幽門螺桿菌的特點幽門螺桿菌，Helicobacterpylori，簡稱Hp。首先由巴里·馬歇爾(BarryJ.Marshall)和羅賓·沃倫(J.RobinWarren)二人發(fā)現(xiàn)，此二人因此獲得2005年的諾貝爾生理學與醫(yī)學獎。3幽門螺桿菌的特點4Hp是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的細菌。長2.5～4.0μm，寬0.5～1.0μm。革蘭染色陰性。有動力。在胃粘膜上皮細胞表面常呈典型的螺旋狀或弧形。在固體培養(yǎng)基上生長時，除典型的形態(tài)外，有時可出現(xiàn)桿狀或圓球狀。幽門螺桿菌的特點5幽門螺桿菌的特點幽門螺桿菌的尿素酶極為豐富，約含菌體蛋白的15%，活性相當于變形桿菌的400倍。尿素酶催化尿素水解形成氨云保護細菌在高酸環(huán)境下生存。幽門螺桿菌感染是慢性活動性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤和胃癌的主要致病因素。1994年世界衛(wèi)生組織/國際癌癥研究機構(gòu)將幽門螺桿菌定位1類致癌原。6幽門螺桿菌臨床檢驗方法及選擇幽門螺桿菌臨床檢驗方法的分類：一.有創(chuàng)性(侵入性)檢驗方法：快速尿素酶試驗病理染色涂片染色細菌培養(yǎng)基因測定二.無創(chuàng)性（非侵入性）檢驗方法：

尿素呼氣試驗HP抗體測定糞Hp抗原測定7一.有創(chuàng)性方法：1.快速尿素酶試驗（RUT）：檢測胃粘膜表面粘液層中的Hp產(chǎn)生的尿素酶，是我國各級醫(yī)院胃鏡室較易開展的Hp感染診斷方法。具有簡便、快捷、準確、能反應現(xiàn)癥感染和價廉等優(yōu)點。缺點是依賴胃鏡，其檢測結(jié)果受檢測試劑的pH值、取材部位、取材組織大小、取材組織中菌量、反應時間、環(huán)境溫度等因素影響。另外當患者因其他原因接受抗生素、鉍劑或PPI等治療時，Hp雖然不會被殺滅，但其活性受到抑制，尿素酶活性也隨之明顯降低，導致尿素酶依賴性試驗出現(xiàn)假陰性結(jié)果。幽門螺桿菌臨床檢驗方法及選擇8尿素酶CO(NH2)2CO2+NH3NH3使酚紅顯紅色：（＋）不變色：（－）胃粘膜組織尿素、酚紅快速尿素酶試驗92.涂片革蘭染色鏡檢：屬簡單的形態(tài)學檢測方法。將每一標本胃粘膜表面在潔凈玻片上涂抹成約5mm*10mm大?。繅K玻片可涂3~5個標本），晾干或火焰固定后行革蘭染色，觀察約20個油鏡視野，一般最快約15min出結(jié)果。優(yōu)點是價格低，一般無假陽性，缺點是可有假陰性，適合行胃鏡檢查而未開展RUT的單位進行。幽門螺桿菌臨床檢驗方法及選擇103.組織切片染色鏡檢：組織病理染色：胃活檢標本常規(guī)制備病理切片，進行染色鏡檢。常用染色方法有Warthin-starry銀染、Giemsa、甲苯胺蘭及HE染色等。免疫組化技術(shù)：應用標記抗Hp抗體免疫染色，但實際應用有限。幽門螺桿菌臨床檢驗方法及選擇114.Hp培養(yǎng)：氣體條件：微需氧固體及液體培養(yǎng)基：腦心浸液瓊脂及肉湯、布氏肉湯等；添加劑：動物（馬、羊、兔等）血或血清。鑒定：菌落形態(tài)、生化反應、涂片革蘭氏染色鏡檢優(yōu)點：特異性100%；可獲取細菌作基礎(chǔ)研究，方便體外藥敏試驗；用于自制血清學方法所需抗原；可作半定量分析；診斷金標準之一。缺點：敏感性低（70-80%），培養(yǎng)條件要求高，操作復雜，在臨床特別是基層醫(yī)院不易推廣。幽門螺桿菌臨床檢驗方法及選擇125.基因檢測方法：探針雜交：僅用于科研目的。該方法的優(yōu)點是可對Hp基因進行分析，也可進行Hp培養(yǎng)；缺點是對實驗室要求高，操作復雜，難推廣。易出現(xiàn)污染而致假陽性。幽門螺桿菌臨床檢驗方法及選擇13二.無創(chuàng)性檢測方法：1.核素標記的尿素呼氣試驗：包括13C或14C尿素呼氣試驗：通過口服13C或14C尿素，經(jīng)胃粘膜Hp尿素酶分解，產(chǎn)生NH4+和HCO3-，經(jīng)腸道吸收入血后由呼吸道以CO2的形式呼出，檢測呼出氣體中含13C或14C的CO2.13C無放射性，但費用較高，14C由一定的放射性，仍屬安全范圍，但應避免用于兒童和孕婦。呼氣試驗的優(yōu)勢是操作簡便、快捷、準確、無創(chuàng)，檢測陽性可確認現(xiàn)癥感染，可用于判斷治療后的Hp根除效果，敏感性與特異性均高于95%。其缺點是對于近期接受過質(zhì)子泵抑制劑（PPI），鉍劑及抗生素治療的患者，可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。幽門螺桿菌臨床檢驗方法及選擇142.糞便Hp抗原檢測：采用Hp特異抗原的抗體檢測糞便中的Hp抗原，目前用于Hp檢測顯示有較好的敏感性和特異性只有在胃粘膜表面有Hp定植時，糞便中才可檢測到Hp抗原，其結(jié)果也與胃內(nèi)Hp的菌量密切相關(guān)。目前對近日使用抗生素、長期使用抑酸劑及鉍劑者Hp抗原檢測的可靠性無報道優(yōu)點：是一種檢測現(xiàn)癥感染的無創(chuàng)方法，可用來評估根除治療的療效，敏感性和特異性均高于93%。缺點：是由于試劑來源受限的原因需等病人，在我國的開展并不普遍。幽門螺桿菌臨床檢驗方法及選擇153.血清Hp抗體檢測：Hp感染后需經(jīng)過一定時間（約1-3個月）才能產(chǎn)生抗體，而Hp根除后其抗體并不立即消失，也需要經(jīng)過一定時間才逐漸消失。故Hp抗體檢測一般作為非現(xiàn)癥感染檢測方法，可反映一段時間內(nèi)Hp的感染情況，不受近期用藥的影響，一般也不能完全反映Hp的現(xiàn)癥感染情況。幽門螺桿菌臨床檢驗方法及選擇163.血清Hp抗體檢測：由于Hp感染一般都不能自行消失，如未經(jīng)抗Hp治療，Hp抗體陽性即提示有現(xiàn)癥感染。一般Hp根除后3個月至半年后抗體滴度明顯下降。抗體滴度持續(xù)不降常提示體內(nèi)的Hp殘留。血清學方法的優(yōu)點是不受抗生素、鉍劑及PPI類藥物應用的影響，創(chuàng)傷小，病人的順應性好，檢測標本量大，可供大規(guī)模篩查用。缺點是總體準確性不滿意，因血清中的抗體并不隨著Hp的根除而馬上消失，不易反映現(xiàn)癥感染，不適合評估根除治療效果。幽門螺桿菌臨床檢驗方法及選擇17總結(jié)1.快速尿素酶試驗：首選。操作簡便快速，費用低，同時可確定胃十二指腸疾