輸血科操作規(guī)程

目 錄1、輸血前檢測(cè)實(shí)驗(yàn)程序2、改良低離子聚凝胺法實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程3、冰箱維護(hù)程序4、ABO 血型鑒定5、Rh（D）血型鑒定6、抗體篩選和鑒定試驗(yàn)7、臨床自體輸血標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程8、冰凍血漿溶化操作規(guī)程輸血前檢測(cè)實(shí)驗(yàn)程序1、實(shí)驗(yàn)要求血清和血漿都可以用于交叉實(shí)驗(yàn)和抗體檢測(cè)，最好是血清標(biāo)本，標(biāo)本使用限制在3 天內(nèi)，含有肝素等抗凝標(biāo)本可以用凝血酶或硫酸魚精蛋白處理使其凝集析出血清。允許通過靜脈輸液口采集標(biāo)本，但必須丟棄受殘留靜輸液影響的5ml 標(biāo)本。一般不允許使用溶血標(biāo)本，對(duì)急性溶血性貧血和燒傷病人的溶血標(biāo)本，在實(shí)驗(yàn)前后必須做溶血程度的比較。標(biāo)本和輸血申請(qǐng)單上的所有資料必須填寫清楚并完全符合，否則應(yīng)重抽標(biāo)本。對(duì)所有用過的血員和受血者標(biāo)本必須在 1-6℃冰箱至少保存7 天，所有實(shí)驗(yàn)都必須保證觀察和記錄同時(shí)進(jìn)行，且記錄和資料都必須至少保存 5 年。2、血型檢測(cè)要求完成病人ABO 正反定型、R（D，獻(xiàn)血員血型ABO 正定型（要時(shí)做Rh 血型，D 陰性病人必須做Du 實(shí)驗(yàn)確定。3、交叉試驗(yàn)受血者交叉配血時(shí)所用的標(biāo)本必須是輸血前 3 天之內(nèi)的。配血時(shí)要逐項(xiàng)核對(duì)輸血申請(qǐng)單、受血者和供血者血樣，復(fù)查受血者和供血者ABO 血型（正、反定型），并常規(guī)檢查患者Rh（D）血型（急診搶患者緊急輸血時(shí)Rh（D）檢查除外正確無誤時(shí)可進(jìn)行交叉配血。凡是輸注全血、濃縮紅細(xì)胞、紅細(xì)胞懸液、洗滌紅細(xì)胞、冰凍紅細(xì)胞、采濃縮血小板、冷沉淀、新鮮血漿應(yīng)與ABO血型同型輸注。凡遇有下列情況時(shí)必須按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》要求完成凝聚胺交叉試驗(yàn)和檢測(cè)不完全抗體的交叉試驗(yàn)（酶法、聚凝胺法、抗人球蛋白法） 除緊急輸血和自身輸血外，所有輸入紅細(xì)胞的其他制品均要求做血交叉試驗(yàn)。其他試驗(yàn)另外必須開展的試驗(yàn)有抗人球蛋白試驗(yàn)，抗體篩選、抗體鑒定、新生兒溶血病的全套實(shí)驗(yàn)。改良低離子聚凝胺法實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程1、目的：減少交叉配血試驗(yàn)的假陽性。2、適用范圍：交叉配血、血型鑒定、抗體篩檢血型血清學(xué)試驗(yàn)。3、試劑來源：(臺(tái)資)珠海貝索生物技術(shù)有限公司4、采集與處理：靜脈采血3-4ml做記錄。檢查留樣試管、標(biāo)簽、標(biāo)號(hào)、姓名、血型是否齊全，如有遺漏應(yīng)拒收。將血標(biāo)本試管放37℃水浴中10分鐘，離心。5、標(biāo)準(zhǔn)操作：主（次）管加入受（供）血者血清2滴，加供（受）血者4%水懸液1滴。各管加LIM0.8ml混勻靜置1分鐘各管加PolybreneReagent1 滴混勻，3000轉(zhuǎn)/分離心15秒，倒出上清液（殘留約0.1ml，輕搖，肉眼可見明顯的凝集狀（如無凝集須重做），加假凝集清除液1滴于管底，輕搖，凝集1分鐘內(nèi)消失呈均勻混懸液，為陰性，凝集 1分鐘內(nèi)不能被消除，即為陽性。5、結(jié)論：陽性表示受（供血者血清中含供（受者紅細(xì)胞血型Ag相應(yīng)的IgM，供受血者不相容，陰性表示供受血者相容。6、注意事項(xiàng)：間、離心速度等均可影響試驗(yàn)結(jié)果。靈敏度。試驗(yàn)操作方法如下：檢測(cè)管中加試驗(yàn)血清24%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴。加LIM0.8ml，混勻，靜置1分鐘，各管加Polybrene2 滴混勻，3000轉(zhuǎn)/分離心15秒，倒出上清液（殘留約 01ml），輕搖，肉眼可見明顯的凝集狀（如無凝集須重做），加假凝集清除液1滴于管底，輕搖，凝集分鐘內(nèi)消失呈均勻混懸液，為陰性，凝集 1分鐘內(nèi)不能被消除，即為陽性。檢測(cè)標(biāo)本應(yīng)為非抗凝血，如標(biāo)本中含抗凝成分的含量過高明顯干擾凝反應(yīng)，可適當(dāng)調(diào)加Promoter 的滴量，以中和抗凝成分的干擾。試驗(yàn)溫度以20-30℃為宜，若為寒冷凝集，375觀察，凝集消失，說明冷凝集素存在。肉眼直觀判斷的結(jié)果應(yīng)確保與顯微鏡下觀察結(jié)果一致，直觀不能明確判斷的可疑結(jié)果須鏡檢，鏡下：陰性結(jié)果應(yīng)該是單個(gè)RBC均勻分布，有RBC凝集狀散在的即為弱陽性。試驗(yàn)質(zhì)量檢驗(yàn)：取自身血清與自身紅細(xì)胞用本試劑盒試驗(yàn)方法作自身陰性對(duì)照試驗(yàn)，取IgG抗D血清與RhD（+）RBC陽性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，對(duì)照實(shí)驗(yàn)符合，試劑有效。疑難結(jié)果以抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)（AGT）作最終判斷試驗(yàn)，試驗(yàn)操作參照經(jīng)AG（AGTLIM0.8ml37℃孵育時(shí)間可縮短至分鐘。本試劑盒適宜大多數(shù)血型抗體的檢測(cè)，但對(duì) kell 血型系統(tǒng)抗體（主要存在白種群）檢測(cè)效果較差，由于我國黃種人群中 kell 血型系統(tǒng)抗體陽性者罕見，因此適合在國內(nèi)推廣?？裳a(bǔ)充抗人球蛋白試驗(yàn)，以提高對(duì) kell 血型系統(tǒng)抗體的檢出率。冰箱維護(hù)程序1、目的：對(duì)冰箱進(jìn)行適當(dāng)?shù)木S護(hù)，以確保冰箱的正常使用。2、適用范圍：本實(shí)驗(yàn)室使用的各種品牌、型號(hào)的冰箱。3、負(fù)責(zé)人：科室值班人員4、操作方法4.1儲(chǔ)血冰箱高低溫度報(bào)警裝置完好；4.2 儲(chǔ)血冰箱溫度記錄每天 3次(8:00/AM,14:00/PM,20:00/PM), 冰箱溫度持在2-6℃，溫度計(jì)應(yīng)在冰箱的上、中、下層輪流放置一天，從而測(cè)量出冰箱內(nèi)溫度的變化情況。如果溫度不在 2-6℃之間，冰箱發(fā)出報(bào)警聲，應(yīng)記錄可能的原因和采取的措施（將血液轉(zhuǎn)移到 2-6℃中的冰箱中所有備血存放在2-6℃儲(chǔ)血專用冰箱中；不同血型、品種、規(guī)格的血液分別儲(chǔ)存；不同日期的血液依次儲(chǔ)存并登記；儲(chǔ)血冰箱內(nèi)不得存放其他物品；袋密閉狀態(tài)，應(yīng)查明原因，立即處理；盡量減少冰箱箱門的開啟次數(shù)；儲(chǔ)血冰箱每周用2%戊二醛擦拭冰箱內(nèi)表面；200CFU/m3合格。應(yīng)急措施：①如遇停電，立即通知醫(yī)院電工房發(fā)電；②冰箱如溫度不在2-6℃之間，立即通知輸血科主任采取冰箱維修，將庫存血盡快使用，在未使用完畢前另存于其它冰箱（做好冰箱的消毒及溫度監(jiān)測(cè)） 。ABO血型鑒定1、測(cè)定原理根據(jù)紅細(xì)胞上有或無A抗原或／和BABAB型及O型4種?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。所謂正定型，是用已知抗—AB分型血清來測(cè)定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的A抗原或／和BA細(xì)胞和B細(xì)胞來測(cè)定血清中有無相應(yīng)的抗—AB。2、標(biāo)本種類及收集要求受檢者血清；枸緣酸鈉抗凝血或未稍取血，受檢者血液制成 5％紅細(xì)胞鹽水懸液用，制備方法見本節(jié)附注。標(biāo)本出現(xiàn)中度溶血者，為不合格標(biāo)本，不能用于檢測(cè)。3、儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、培養(yǎng)基、以及其他所需物品 抗A、抗血型定型試劑（單克隆抗體）：上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，產(chǎn)品注冊(cè)號(hào)：國藥準(zhǔn)字S10980059，包裝:抗A、抗B各1支/盒，塑料瓶，規(guī)格：10ml/支，儲(chǔ)存要求：2℃～8℃避光保存，主要成分：分泌抗人 A型和抗人B型血型原單抗的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液并補(bǔ)加一定量小鼠腹水抗體。0.9/%的生理鹽水：石家莊四藥有限公司。離心機(jī)，顯微鏡。4、操作步驟、試管法取潔凈小試管(內(nèi)徑10mm×60mm)3 支，分別標(biāo)明抗—A、抗—B抗—A十用滴管分別加抗—A抗—B和抗—A十B分型血清各l（約50ul）于試管底部，再以滴管分別加入受檢者 5％紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混和。(內(nèi)徑10mm×60mm)3支，分別標(biāo)明AB和O胞。用滴管分別加入受檢者血清l滴于試管底部，再分別以滴管加入ABO5％試劑紅細(xì)胞懸液l滴，混和。立即以1000r／min離心3min。將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以內(nèi)眼觀察有無凝集(或溶血)現(xiàn)象。如內(nèi)眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。觀察結(jié)果時(shí)既要看有無凝集，更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于 AB型、類B或cisAB 的發(fā)現(xiàn)。凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)4+ 紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。3+ 紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。2+ 紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細(xì)胞。1+ 肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞?！犁R下可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。MF混合凝集外觀(mixed field)是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集而極大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。- 表示陰性，鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。玻片法取清潔玻片1張(或白瓷板1塊-A-B和抗-A十B，分別用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清l滴于標(biāo)明的方格內(nèi)，再各加受檢者2％紅細(xì)胞懸液1滴，混和。(或白瓷板1塊AB細(xì)胞和O細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管滴加ABO型試劑紅細(xì)胞懸液1滴。將玻片(或白瓷板)不斷輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使血清與細(xì)胞充分混勻，連續(xù)約 min，先以肉眼觀察有無凝集(或溶血)反應(yīng)；再在低倍鏡下觀察結(jié)果。5、結(jié)果判定ABO血型正反定型結(jié)果分型血清+受檢者紅細(xì)胞 受檢者血型 受檢者血清+試劑紅細(xì)胞抗-A+抗-B-抗-A十B+AA細(xì)胞-B細(xì)胞O+細(xì)胞--++B+-----O++-+++AB---+-6、注意事項(xiàng)：分型血清必須為批批檢試劑，且在有效期內(nèi)使用；質(zhì)量性能符合要求。細(xì)菌污染。試劑開封后有效期為一周。試劑紅細(xì)胞以3個(gè)健康者同型新鮮紅細(xì)胞混和，用生理鹽水洗滌 1次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原?；蚴褂煤细竦纳唐吩\斷紅細(xì)胞。試劑紅細(xì)胞有效期：自制的為15天，商品的為試劑有效期。試劑開封試劑開封后有效期為一周。生理鹽水啟用后，有效期為二周。換新的試劑進(jìn)行檢測(cè)工作。試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。核實(shí)是否漏加血清。按理IgM抗-A和抗-B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以 4℃為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫(20—24℃)37反應(yīng)減弱。結(jié)果。別。判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對(duì)、記錄，避免筆誤。檢驗(yàn)不完全抗原的存在。對(duì)于可疑結(jié)果，必須更換所用的試劑，重新檢測(cè)。5%紅細(xì)胞懸液的配制：用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞 3次根據(jù)下表進(jìn)行紅細(xì)胞懸液的配制懸液濃度（%）壓積紅細(xì)胞（滴） 鹽水（滴）2 1 2ml(40)5 1 0.8ml(16)7、操作性能概要正反定型結(jié)果不一致的原因：原因：有技術(shù)性問題或紅細(xì)胞和血清本身的問題，常見者有以下幾種：A血清效價(jià)不高，可將A型誤定為OAB型誤定為B型。判為陰性反應(yīng)。受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過少(如亞型)或抗原性減弱(見于白血病惡性腫瘤：以及類B或cisAB 等。受檢者血清中蛋白紊亂()紅細(xì)胞呈緡錢狀排列。受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗-AB癥。血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體.原因。血清中有意外抗體，如自身抗—I，常引起干擾。老年人血清中抗體水平大幅度下降正反定型結(jié)果不一致的解決辦法如發(fā)現(xiàn)ABO正反定型結(jié)果不一致，先要重復(fù)作試驗(yàn)1次。嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察和解釋試驗(yàn)結(jié)果，就可解決明顯的問題，對(duì)一些疑難問題必須進(jìn)一步研究。檢查步驟：另從受檢者采取l份新鮮血液標(biāo)本這樣可以糾正因污染或搞錯(cuò)樣本造成的不符合。5A、抗—BAlABH做試驗(yàn)可以得到其它有用的信息。被抗體致敏。用A1A2BOI，用O型(或ABO相合的)臍血紅細(xì)胞檢查。如果試驗(yàn)結(jié)果未見凝集，應(yīng)將細(xì)胞及血清試驗(yàn)至少在室溫和 4℃置30min，用顯微鏡檢查核實(shí)。如疑為A抗原或B抗原減弱，則可將受檢紅細(xì)胞與抗—A或抗B血清作吸收及放散試驗(yàn)以及受檢者唾液作 A、B、H血型物質(zhì)測(cè)定。后者只對(duì)80％HAB分泌型的人有用。如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞呈緡錢狀排列，加等滲鹽水 l滴，混和，往往使緡錢現(xiàn)象消失。應(yīng)注意不應(yīng)先加鹽水 l滴于受檢者血清中而后和紅細(xì)胞作試驗(yàn)，以免使血清中抗體被稀釋。如受檢者為A型血而疑為有類BABAB的反應(yīng)強(qiáng)。這種區(qū)別用玻片法作試驗(yàn)更為明顯。用受檢者紅細(xì)胞與自身血清作試驗(yàn)，血清中的抗— B不凝集自紅細(xì)胞上的類B抗原。檢查唾液中是否有A、B物質(zhì)，如果是分泌型，可檢出 A物而無B物質(zhì)。核對(duì)患者的診斷，類B桿菌感染有關(guān)。如發(fā)現(xiàn)多凝集現(xiàn)象，應(yīng)考慮由遺傳產(chǎn)生的Cad抗原活性；被細(xì)菌酶TTK受體；或產(chǎn)生機(jī)制不太明了的Tn胞具有以下特點(diǎn)：能被人和許多家兔的血清凝集。能與大多數(shù)成年人的血清凝集，不管有無相應(yīng)的同種抗體。不被臍帶血清凝集。通常不與自身的血清凝集。8、臨床意義用于檢驗(yàn)人的ABO 血型歸屬。9、參考文獻(xiàn)全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第 3版）Rh（D）血型鑒定1、實(shí)驗(yàn)原理紅細(xì)胞與抗D抗體發(fā)生凝集反應(yīng)表明該細(xì)胞有 D抗原，反之，無集現(xiàn)象表明試驗(yàn)的紅細(xì)胞缺少正常強(qiáng)度的 D抗原。2、標(biāo)本收集和制備無菌操作收集血液標(biāo)本,收集后盡可能立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如果不能立即實(shí)驗(yàn),應(yīng)將樣品貯存于2-8℃。收集在ACD、CPD、CPD－2A本,不超過21天仍可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但是加EDTA、肝素和凝集的血液標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)應(yīng)在2天內(nèi)進(jìn)行。3、儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、培養(yǎng)基、以及其他所需物品：RhD(IgM)血型定型試劑（單克隆抗體）：上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，產(chǎn)品注冊(cè)號(hào)：國藥準(zhǔn)字S20060018,包裝、規(guī)格：每盒內(nèi)裝有1支試劑，10ml/支，儲(chǔ)存要求：存放2—8℃，有效期內(nèi)使用。4、操作步驟玻片法：干凈玻片上加1滴抗D。14%-5%也可以是懸浮于自身血漿或血清中的紅細(xì)胞。在圓形的玻片區(qū)域中混勻，前后緩慢搖晃玻片。 2分鐘左右肉眼判結(jié)果。不要將試劑的干燥與凝集相混淆。如果是陰性，需要試管法重做一遍實(shí)驗(yàn)。鹽水試管法加一滴抗D試劑于預(yù)先標(biāo)記好的試管中再加1滴約3%—5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液于試管中?；靹?。離心，速度和時(shí)間可選擇以下二種之一：轉(zhuǎn)速1000rpm，時(shí)間1分鐘或3400rpm，時(shí)間15秒。檢查是否溶血（溶血可能是陽性結(jié)果，或者是細(xì)菌污染） ，然后輕搖晃，使細(xì)胞再懸浮起來。觀察凝集狀況，并立即記錄結(jié)果。必要時(shí)可借助顯微鏡。若是陰性結(jié)果，需在37℃孵育15分鐘-30果。結(jié)果若呈陰性需進(jìn)一步確認(rèn)是否是弱 D。微量板法（U型板）加一滴抗D試劑于U型底的微孔中。再在微孔中加一滴約 3-5%的被檢紅細(xì)胞懸液，細(xì)胞懸液需事先制于生理鹽水中。用機(jī)械的方法將U型板混勻。用板式離心機(jī)離心：2000rpm,時(shí)間30秒。不同的離心機(jī)，不同的微板產(chǎn)生清晰的細(xì)胞扣及透亮的上清液。檢測(cè)溶血情況（溶血可能是陽性結(jié)果，或者是細(xì)菌污染）。結(jié)果判斷：用機(jī)械震蕩U凝集。陽性反應(yīng)，出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，而陰性反應(yīng)在微孔中會(huì)出現(xiàn)均勻細(xì)胞懸液?？捎萌庋酆妥詣?dòng)化判讀結(jié)果。如果呈陰性，需要試管法重做一遍實(shí)驗(yàn)。5、參考值范圍陽性反應(yīng)：出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，為 RhD陽性。陰性反應(yīng)：紅細(xì)胞不出現(xiàn)凝集，為 RhD 陰性6、產(chǎn)品性能指標(biāo)抗D（IgM）效價(jià)大于等于1：64（ccDeeO 型）7、方法的局限性本實(shí)驗(yàn)不能凝集CategoryDVI細(xì)胞，對(duì)于陰性和弱陽性結(jié)果，按有關(guān)安全輸血規(guī)范進(jìn)行確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，必要時(shí)送血型參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。8、注意事項(xiàng)試劑含有0.1%W/V 疊氮鈉，如果攝入會(huì)中毒。試劑如出現(xiàn)混濁則不能使用，若開瓶使用時(shí)間較長后，最好用已知RhD陰性、RhD 陽性紅細(xì)胞檢查結(jié)果是否符合，以防制品污染、變質(zhì)失效，造成錯(cuò)誤。及時(shí)貼上開封時(shí)間標(biāo)簽，在效期內(nèi)使用。由于人紅細(xì)胞的D免錯(cuò)判結(jié)果，特別是陰性結(jié)果時(shí)。Rh血型鑒定應(yīng)嚴(yán)格控制溫度與時(shí)間，因 Rh抗原、抗體及反應(yīng)凝塊較脆弱，觀察反應(yīng)結(jié)果時(shí)，應(yīng)輕輕側(cè)動(dòng)試管，不可用力振搖。對(duì)于結(jié)果可疑的，必須洗滌紅細(xì)胞后重新檢驗(yàn)。9、操作性能概要假陽性反應(yīng)原因分析：試劑中存在具有其他特異性的抗體（指不完全抗 D 抗體因此，疑難抗原定型時(shí)，建議用不同來源的抗血清同時(shí)做兩份實(shí)驗(yàn)。因?yàn)槭褂脙煞萏禺愋韵嗤目寡宓玫讲灰恢碌慕Y(jié)果時(shí)，就會(huì)使檢驗(yàn)人員意識(shí)到有進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的必要。多凝集紅細(xì)胞與任何人血清會(huì)發(fā)生凝集。引起假陽性結(jié)果。9.14 試劑瓶可能被細(xì)菌、外來物質(zhì)或其他抗血清所污染。假陰性反應(yīng)原因分析：搞錯(cuò)抗血清 每次試驗(yàn)時(shí)應(yīng)細(xì)心核對(duì)抗血清瓶子上的標(biāo)簽。試管中漏加抗血清 在加入細(xì)胞懸液之前，必須檢查試管中有無抗清。某種特定的抗血清不能和其他相應(yīng)抗原的變異型起反應(yīng)。如某種抗血清含有主要對(duì)抗 Rh 復(fù)合抗原的抗體，則可能與獨(dú)立的基因產(chǎn)物的個(gè)別抗原不發(fā)生反應(yīng)。這在抗C 血清最為常見，因?yàn)楹芏嗫笴 清含有反應(yīng)性更強(qiáng)的抗Ce 成分。溫度和時(shí)間不正確?？寡灞４娌煌?，試劑中的免疫球蛋白變質(zhì)。10、參考文獻(xiàn)：全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第 3 版）抗體篩選和鑒定試驗(yàn)1、原理紅細(xì)胞血型抗體分子的物理特性與血清學(xué)的反應(yīng)性之間有著直接的關(guān)系?？煞譃镮gM和IgG球蛋白抗體IgM為天然抗體，在鹽水介質(zhì)中能直接凝集相應(yīng)的紅細(xì)胞，使之發(fā)生肉眼可見的凝集反應(yīng)。IgG為免疫抗體，常經(jīng)妊娠或輸血等免疫產(chǎn)生。在鹽水介質(zhì)中不能凝集而只能致敏抗原的紅細(xì)胞，且必須通過特定的方法使致敏紅細(xì)胞發(fā)生凝集。如牛血清白蛋白、酶、抗球蛋白、凝聚胺、凝膠（或玻璃）等方法。2、方法待檢血清需要使用多種方法進(jìn)行鑒定。一般使用鹽水法、酶方法、抗蛋白法、凝聚胺法或凝膠卡法檢測(cè)抗體。在檢測(cè)到弱抗體時(shí)，可以利用適當(dāng)增加血清的細(xì)胞比例、適當(dāng)增加孵育時(shí)間、加入低離子強(qiáng)度溶液增效劑或PEG 聚氧乙烯乙二醇等方法增加反應(yīng)的敏感性。不同的抗體在不同的方法和條件下可以有不同的表現(xiàn)。這些特性為判定抗體特異性提供了參考信息。3、試劑、紅細(xì)胞：選取三個(gè)以上的O型紅細(xì)胞組成一組篩選細(xì)胞（已知抗原。、譜細(xì)胞：選取八個(gè)以上的 O型紅細(xì)胞組成一組譜細(xì)胞（已知抗原）。4、操作、不規(guī)則抗體的篩選：用篩選細(xì)胞（1、2、3號(hào)），同患者血清在三種介質(zhì)中（鹽水、凝聚胺、抗球蛋白）反應(yīng)，需做自身細(xì)胞對(duì)照。、不規(guī)則抗體的鑒定：對(duì)篩選陽性的患者應(yīng)檢查其抗體的特異性。用一組譜細(xì)胞（1-11）同患者血清在三種介質(zhì)中（鹽水、凝聚胺、抗球蛋白） 進(jìn)行抗體的篩選，需做自身細(xì)胞對(duì)照。5、結(jié)果判斷陽性反應(yīng)：出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集。表示紅細(xì)胞上有相應(yīng)抗體存在。陰性反應(yīng)：出現(xiàn)紅細(xì)胞不凝集。表示紅細(xì)胞上沒有相應(yīng)抗體存在。結(jié)合譜細(xì)胞反應(yīng)格局，確定抗體特異性。6、臨床意義、定血型；、測(cè)效價(jià)、可能幾率：正確的抗體鑒定，必須有充分的譜細(xì)胞支持。7、標(biāo)本要求、按照一般的血液樣本采集步驟采集血液標(biāo)本。該標(biāo)本可于 4℃或0℃以下冷凍保存三周或數(shù)年。一般不需特殊處理。、應(yīng)用EDTA抗凝標(biāo)本，可反應(yīng)體內(nèi)紅細(xì)胞被補(bǔ)體致敏的真實(shí)情況。、需要一管新鮮收集的凝固的血液標(biāo)本用作血清研究。若懷疑冷抗體引起的直接抗球蛋白試驗(yàn)陽性，其血液標(biāo)本凝固應(yīng)保持在 37℃，直到血清分離出來為止。8、注意事項(xiàng)、僅用于體外診斷、試劑貯藏溫度2-8℃；、試劑有效期兩個(gè)月。臨床自體輸血標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1、原理或目的：自體輸血是手術(shù)前或手術(shù)中收集自己的血液，需要時(shí)輸回到自己的身體。這樣既可以保留輸血的優(yōu)點(diǎn)，又可以避免感染和溶血反應(yīng)的危險(xiǎn)，癌癥患者可減少腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的機(jī)率。2、自身血液采集有幾種形式、擇期手術(shù)病人自身儲(chǔ)血：臨床經(jīng)管醫(yī)生根據(jù)擇期手術(shù)患者的身體基本情況(Hb＞120g/LHct＞34%，心功能Ⅱ級(jí)以上)，預(yù)計(jì)手術(shù)中出血和需輸血量，與輸血科一起制定患者術(shù)前采血計(jì)劃，動(dòng)員患者采集血液儲(chǔ)存，以備手術(shù)中、后輸用。、急性稀釋性自身輸血：是在手術(shù)患者麻醉后采出一定量的血液，同時(shí)輸注晶體及膠體溶液，使患者血液稀釋， 而維持正常的血容量，患者在血液稀釋的生理狀態(tài)下進(jìn)行手術(shù)，術(shù)中所流失的是稀釋血液， 手術(shù)中、后回輸自己的血液。、回收式自身輸血：回收式自身輸血是以機(jī)械吸引裝置將患者手術(shù)中流失的血液(如肝脾破裂、宮外孕大出血、各種大手術(shù)的創(chuàng)面出血等 )收集濾，分離清洗、凈化后再回輸給患者。目前國內(nèi)外有血液回收機(jī)生產(chǎn)銷售，血液回收后在封閉的管道系統(tǒng)中分離清洗，安全可靠。3、操作步驟、采血程序?qū)o誤后方可采血?；瑒?dòng)的靜脈進(jìn)行穿刺。3.1.3、在肘窩上5cm處系好壓脈帶，使靜脈充盈可觸及。3.1.4、選擇皮膚無損傷、炎癥、皮疹及新針眼的區(qū)域?yàn)榇┐滩课?，以穿刺點(diǎn)為中心由內(nèi)向外螺旋式旋轉(zhuǎn)擦拭，用 2%的碘酒消毒皮膚待干，用 酒精脫碘，消毒面積不得小于 10X10cm，遵守?zé)o接觸采血原則，執(zhí)行采用無菌操作技術(shù)進(jìn)行靜脈穿刺。3.1.5、去掉護(hù)針帽，采血者右手拇指、示指、中指持采血針柄，針頭斜面向上或稍側(cè)斜，減少皮膚阻力，針與皮膚呈 30°-50°角刺入皮膚。當(dāng)針刺入皮膚后改變角度呈10°左右，沿靜脈走行方向平穩(wěn)刺入靜脈，進(jìn)入靜脈后，阻力明顯減少時(shí)再推1cm左右，可見血液流出，此時(shí)保持針頭位置穩(wěn)定，視血流通暢，即可固定針頭位置，用消毒棉球覆蓋針眼，并用膠布固定。3.1.6、將血袋搖動(dòng)后放于血袋搖擺器上，囑患者不停的做松握拳動(dòng)作。3.1.7、采集過程中，密切觀察血流情況，血液采集過程中必須將血液與抗凝劑保存液充分均勻混合，遇有血流不暢時(shí)，應(yīng)及時(shí)處理校正針頭位置，以防中斷采血，當(dāng)不易觀察血流時(shí)，則注意觀察穿刺部位有無異常，以及血袋重量是否遞增。3.1.8、在采集過程中，采血者在血型標(biāo)簽、體檢表和獻(xiàn)血證上加蓋采血者工號(hào)章、血液采集量章，在每個(gè)血袋上按要求貼上帶編號(hào)的血型標(biāo)簽，并分別將血型標(biāo)簽貼在標(biāo)本管和保存血清標(biāo)本管上。順利采血 200ml 一般在3分鐘內(nèi)完成，400ml 在6 分鐘內(nèi)完成。3. 1.9、采血到達(dá)采集量時(shí)，采血者囑患者松拳，用止血鉗在針尾部 處夾住血流導(dǎo)管，松開止血帶，用無菌棉球覆蓋穿刺針眼，拔出針頭，再囑患者用三個(gè)手指壓住棉球約 5 分鐘以上，采血完畢。3. 1.10、以無菌方法留取標(biāo)本液（注：防止空氣進(jìn)入血袋），并使抗凝劑與標(biāo)本管內(nèi)的血液充分混勻，保證標(biāo)本應(yīng)來源于相對(duì)應(yīng)的血液。3.1.11、采血結(jié)束后，再次檢查獻(xiàn)血者身份、血袋、血液標(biāo)本和相關(guān)記錄，確保準(zhǔn)確無誤。3.1.12、對(duì)采不足量的血液，在采血袋、獻(xiàn)血證和體檢表上分別標(biāo)明實(shí)采血量，并通知獻(xiàn)血者。3. 1.13、如需第二次穿刺時(shí)應(yīng)征求獻(xiàn)血者同意,并更換采血袋和獻(xiàn)血者手臂,方可采血。3.1.14、采血結(jié)束后，再次檢查獻(xiàn)血者身份、血袋、血液標(biāo)本和相關(guān)記錄。3.1.15、應(yīng)采用惟一的條碼標(biāo)簽標(biāo)識(shí)獻(xiàn)血記錄、血袋（含主袋和轉(zhuǎn)移袋） 標(biāo)本管。應(yīng)對(duì)貼標(biāo)簽過程控制，確保同一獻(xiàn)血者的血袋、標(biāo)本管、獻(xiàn)血記錄一一對(duì)應(yīng)，貼簽無誤。3.1.16、建立血液標(biāo)本留取程序，并嚴(yán)格執(zhí)行。、血液熱合操作規(guī)程血袋和季節(jié)的不同調(diào)節(jié)熱合時(shí)間至合適位置。、檢查血袋原始編碼、血型、血量、管段是否符合標(biāo)準(zhǔn)。、按照血站質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行熱合（以質(zhì)量控制科文件為準(zhǔn)）。、血液采集后，熱合封口，并按要求熱合數(shù)段，供復(fù)檢血型、交叉配血（靠近血袋一端熱合漏血，將此血標(biāo)識(shí)并隔離放置，回站后由包裝科交質(zhì)檢科檢測(cè)