貝類種質(zhì)基因組DNA保存

貝類種質(zhì)基因組DNA保存基因組DNA含有物種個(gè)體的遺傳信息，可用于構(gòu)建基因組文庫、分離所需的基因和檢測相關(guān)的分子標(biāo)記等。由于基因組DNA所含的遺傳信息量大，易獲得和保存，是目前種質(zhì)資源收集和保存的主要內(nèi)容之一。1程序圖

基因組DNA收集——→測定——→保存

2一、基因組DNA的收集利用各種方法（包括傳統(tǒng)的基因組DNA提取方法、各種商品化的基因組DNA提取試劑盒）提取貝類基因組DNA3二、測定對收集的基因組DNA進(jìn)行純度、濃度、完整性的測定4紫外分光光度法檢測DNA純度取一定量的樣品DNA，稀釋50倍，用分光光度計(jì)分別測定A250、A280的值。根據(jù)A250/A280之比值判斷DNA純度。5

基因組DNA完整性的測定瓊脂糖凝膠電泳檢測基因組DNA完整性采用0.4%瓊脂糖凝膠電泳，以標(biāo)準(zhǔn)DNA分子標(biāo)記對比,檢測基因組DNA的完整性，以堿基數(shù)（kb）表示。6基因組DNA的定量對于濃度大于0.25μg/mL的DNA溶液，采用紫外分光光度法測定：在波長260nm紫外線下，1OD值的光密度相當(dāng)于雙鏈DNA濃度為50μg/mL。7對于濃度小于0.25μg/mL的DNA溶液，也可采用熒光光度法：DNA樣品與溴化乙錠（EB）結(jié)合后，在紫外線照射下激發(fā)熒光，其熒光強(qiáng)度與核酸含量成正比。使用一系列已知的不同濃度DNA溶液作標(biāo)準(zhǔn)對照，可比較出被測DNA溶液的濃度。靈敏度可達(dá)1ng～5ng。8三、貝類基因組DNA保存標(biāo)準(zhǔn)完整性要求要求基因組DNA大于50kb。

純度要求要求1.6<A260/A280≤1.8，同時(shí)凝膠電泳檢測不到RNA污染。9濃度要求要求基因組DNA濃度大于0.25μg/mL。含量要求每個(gè)保存樣本的DNA含量應(yīng)大于50μg10保存方法及保存期限D(zhuǎn)NA溶于pH8.0的TE中，-20℃可保存2年，-60℃可保存5年。每個(gè)個(gè)體分3個(gè)保存樣本分開保存。11生物技術(shù)在貝類種質(zhì)資源保護(hù)中的應(yīng)用

對某一種質(zhì)資源進(jìn)行保護(hù)之前，需要了解有關(guān)該物種的遺傳背景和群體遺傳結(jié)構(gòu)，從而建立種質(zhì)資源的遺傳背景檔案。同工酶和蛋白質(zhì)電泳技術(shù)、以及近年迅速發(fā)展的各種DNA標(biāo)技術(shù)，使人們能夠從不同角度和不同層次，更加全面地揭示物種的遺傳信息，也為貝類種質(zhì)資源保護(hù)提供了重要的基礎(chǔ)資料。121、同工酶技術(shù)的應(yīng)用

同工酶技術(shù)是通過檢測DNA表達(dá)產(chǎn)物電泳譜帶的不同，在蛋白質(zhì)水平研究遺傳多樣性的一種方法。

喻子牛等(1998)利用同工酶技術(shù)研究了秦皇島、大連、青島和韓國釜山4個(gè)魁蚶群體的等位基因酶遺傳變異，通過比較4個(gè)群體之間的遺傳相似度和遺傳距離表明，秦皇島和大連兩個(gè)群體之問的遺傳同一性最大，這與兩個(gè)群體的地理距離較近，基因交流不存在明顯障礙有關(guān)；其次為秦皇島與青島及大連與青島群體之間，而韓國釜山和其他3個(gè)群體之間存在一定的遺傳分歧.。

132、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(randomamplifiedpolymorphismDNA，RAPD)技術(shù)的迅速發(fā)展和應(yīng)用，促進(jìn)了貝類遺傳多樣性的研究。3、線粒體DNA具有進(jìn)化速度快，母系遺傳，有效群體的大小較小，因而用較小的樣本即可反映群體結(jié)構(gòu)等特點(diǎn)，已成為研究近緣種間和種內(nèi)群體間遺傳分化的有力工具.144、微衛(wèi)星DNA是基因組中普遍存在的2～6個(gè)核苷酸的簡單串聯(lián)重復(fù)序列，微衛(wèi)星標(biāo)記具有密度大、多態(tài)性豐富、高度雜合且穩(wěn)定性好、遵循盂德爾分離定律共顯性遺傳、易于PCR擴(kuò)增等特點(diǎn)，是近年發(fā)展起來的一種新的DNA標(biāo)記技術(shù).15種質(zhì)資源的評價(jià)與保護(hù)群體的雜合度高低是衡量一個(gè)種群種質(zhì)資源質(zhì)量的重要標(biāo)準(zhǔn)，為種質(zhì)資源調(diào)查和保護(hù)以及遺傳育種提供了豐富的數(shù)據(jù)。貝類人工繁育的一個(gè)重要內(nèi)容是要明確繁育群體遺傳變異的大小，從而制定出科學(xué)的管理措施，防止人工繁殖過程中進(jìn)行遺傳背景相似品系交配所造成遺傳多樣性的丟失。非科學(xué)的人工增殖常常造成子代雜和度降低和等位基因頻率發(fā)生變化，特別是稀有等位基因的丟失。165、低溫冷凍保存貝類種質(zhì)細(xì)胞