一種治療奶牛乳房炎的生物免疫活性因子的研發(fā)推廣-課件

一種治療奶牛乳房炎的生物制劑的研發(fā)與推廣

主要內(nèi)容一、選題依據(jù)二、材料（略）三、方法與技術(shù)路線四、結(jié)果與分析五、討論六、結(jié)論一、選題依據(jù)奶牛乳房炎是一種危害極其嚴(yán)重的接觸性傳染病

該病主要由病原微生物感染而引起。是一種能夠?qū)е履膛I(yè)最為嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失的疾病。根據(jù)其有無(wú)臨床癥狀可以將奶牛乳房炎分為臨床乳房炎和隱性乳房炎兩類(lèi)，其發(fā)病率根據(jù)統(tǒng)計(jì)可高達(dá)70%，就連國(guó)外一些飼養(yǎng)條件和衛(wèi)生條件良好的奶牛場(chǎng)中乳區(qū)感染率高達(dá)75%。目前全世界約有2.2億頭奶牛，其中約有1/3的奶?；几鞣N類(lèi)型的乳房炎。美國(guó)每年因奶牛乳房炎造成的損失達(dá)20億美元。全球每年因乳房炎引起的損失達(dá)到350億美。現(xiàn)階段控制奶牛乳房炎困境常用抗生素療法的缺陷

目前對(duì)于奶牛乳房炎的治療主要是抗生素療法。利用抗生素控制侵入機(jī)體的病原微生物，這種方法的利用，在控制乳房炎、降低乳房炎的發(fā)病率方面,特別是在控制急性、多發(fā)性和亞急性乳房炎方面起到積極的作用。但是，由于抗生素療法療程較長(zhǎng)，抗生素被大量應(yīng)用，致使一些常見(jiàn)病原菌產(chǎn)生抗藥性，耐藥菌株大量出現(xiàn)，使得常用藥物療效下降；同時(shí)，大量使用抗生素后，乳汁中有大量抗生素的殘留，直接影響到酸奶的制備，并可能出現(xiàn)耐藥質(zhì)粒的傳遞和轉(zhuǎn)移，危害人類(lèi)的健康?？股丿煼o(wú)法對(duì)遭受到病原微生物破壞的乳腺細(xì)胞進(jìn)行有效的修復(fù)，即使治愈了乳房炎，也無(wú)法使奶牛產(chǎn)奶量得到恢復(fù)，而乳房炎引起的損失的70%來(lái)自于各種奶牛乳房炎引起的產(chǎn)奶量下降。現(xiàn)階段控制奶牛乳房炎發(fā)展方向非抗生素療法的發(fā)展為克服抗生素療法的缺點(diǎn)，發(fā)展出以下多種控制方法，包括環(huán)境控制法、營(yíng)養(yǎng)療法、物理療法、生物療法。這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，免疫因子療法由于免疫因子的固有可調(diào)節(jié)免疫的特點(diǎn)是其中非常具有發(fā)展前途的療法。

免疫因子治療乳房炎的原理1.免疫活性因子能夠促進(jìn)乳腺內(nèi)細(xì)胞MHCII類(lèi)分子表達(dá)，促進(jìn)抗原遞呈和免疫應(yīng)答

2.免疫活性因子增強(qiáng)乳腺中巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞的吞噬力和殺菌力

3.免疫活性因子促進(jìn)免疫細(xì)胞增殖分化，提高細(xì)胞毒作用，促進(jìn)乳腺免疫應(yīng)答

4.免疫活性因子對(duì)炎癥介質(zhì)進(jìn)行調(diào)控，從而控制乳房的炎癥過(guò)程

本次實(shí)驗(yàn)就是基于免疫活性因子的這些特點(diǎn)將其應(yīng)用于乳房炎的治療之中，以其達(dá)到良好的療效。研究意義本次實(shí)驗(yàn)期望通過(guò)經(jīng)濟(jì)、來(lái)源可靠的原料制備免疫活性因子，建立起檢測(cè)其生物活性的有效方法，測(cè)定生物安全性。并將之應(yīng)用于臨床，驗(yàn)證其療效、殘留和對(duì)產(chǎn)奶量的影響。最終的目的在于研制一種經(jīng)濟(jì)、有效、安全的牛乳房炎免疫治療藥物。

二、材料（略）三、技術(shù)路線1.免疫活性因子的制備及其安全性和活性檢驗(yàn)（實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行）2.免疫活性因子對(duì)奶牛乳房炎的臨床治療試驗(yàn)（臨床試驗(yàn)推廣）免疫活性因子的制備和檢驗(yàn)透析法制備免疫活性因子理化性質(zhì)檢驗(yàn)安全性檢驗(yàn)：毒性檢驗(yàn)、熱源檢驗(yàn)免疫活性因子對(duì)外周血白細(xì)胞數(shù)量、吞噬功能及免疫器官重量的影響免疫活性因子對(duì)奶牛乳房炎的臨床治療試驗(yàn)

1.用藥種類(lèi)及給藥方法分類(lèi)2.效果分析免疫活性因子制備流程原材料挑選清洗處理剪碎勻漿反復(fù)凍融調(diào)整Ph值過(guò)濾超濾無(wú)菌檢驗(yàn)灌裝動(dòng)物實(shí)驗(yàn)透析用藥種類(lèi)及給藥方法分類(lèi)表1**奶牛廠用藥種類(lèi)及給藥方法組別數(shù)量患病乳區(qū)數(shù)用藥種類(lèi)及給藥方法A11248抗生素★A21247抗生素☆A(yù)31243抗生素★+活性肽★A41245抗生素★+活性肽☆A(yù)51247抗生素☆+活性肽★A61247活性肽☆A(yù)71246活性肽★表2****奶牛場(chǎng)用藥種類(lèi)及給藥方法表中“★”為肌肉注射、“☆”為乳房灌注；用藥劑量為抗生素每個(gè)患病乳區(qū)200mg，肌肉注射量為四個(gè)乳區(qū)用藥劑量之和，患病乳區(qū)不足四個(gè)的，按照四個(gè)乳區(qū)用藥量給藥。組別數(shù)量患病乳區(qū)數(shù)用藥種類(lèi)及給藥方法B11243抗生素★B21247抗生素☆B31245抗生素★+活性肽★B41245抗生素★+活性肽☆B51248抗生素☆+活性肽★B61247活性肽☆B71244活性肽★治療效果評(píng)價(jià)通過(guò)CMT試劑檢測(cè)，通過(guò)治療前后數(shù)值結(jié)果變化判斷乳房炎治愈率。檢測(cè)藥物殘留，鑒定生物安全性測(cè)定產(chǎn)奶量變化，評(píng)價(jià)其經(jīng)濟(jì)性四、結(jié)果與分析1.免疫活性因子制備和檢測(cè)結(jié)果、生物安全性2.臨床療效、藥物殘留、產(chǎn)奶量變化制備產(chǎn)品的的照片1.免疫因子的制備和檢測(cè)物理性狀得到比重為1.021的淡黃色，有特殊腥味的透明液體。理化性質(zhì)

PH為7.0，符合制劑要求；經(jīng)紫外光譜分析，該制劑在250nm-260nm處有吸收高峰，A260nm/A280nm=2.28；用二羥基甲苯法測(cè)得核糖含量為33ug/ml；用雙縮尿法測(cè)的多肽含量為315ug/ml；無(wú)菌檢驗(yàn)、蛋白質(zhì)檢驗(yàn)、抗原檢驗(yàn)及過(guò)敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陰性。毒性檢驗(yàn)結(jié)果

表3毒性檢驗(yàn)結(jié)果

從表結(jié)果可以看出，制得的免疫活性因子分別在原液；濃縮2倍、5倍、10倍；稀釋2倍、5倍、10倍的情況下，給小鼠腹腔注射，均無(wú)毒性反應(yīng)。結(jié)論：用3.1.2.1方法制得的免疫活性因子對(duì)小鼠無(wú)毒性反應(yīng)。1234567濃度原液濃縮

10倍原液濃縮

5倍原液濃縮

2倍原液濃度原液稀釋

5倍原液濃縮10倍生理鹽水對(duì)照注射方式腹腔注射腹腔注射腹腔注射腹腔注射腹腔注射腹腔注射腹腔注射注射劑量0.5ml/10g0.5ml/10g0.5ml/10g0.5ml/10g0.5ml/10g0.5ml/10g0.5ml/10g毒性反應(yīng)————-———熱源檢查結(jié)果

表4熱源檢查結(jié)果結(jié)論：制得的免疫活性因子不含熱源物質(zhì)。組別注射前15min注射后1h注射后2h注射后3139.8±0.239.8±0.339.7±0.139.6±0.3238.9±0.339.3±0.337.8±0.238.4±0.2339.7±0.139.5±0.239.6±0.239.7±0.3439.8±0.239.9±0.239.6±0.139.8±0.3免疫活性因子對(duì)小鼠血液白細(xì)胞數(shù)量的影響

表5免疫活性因子對(duì)小鼠血液白細(xì)胞數(shù)量的影響分析：一次給予機(jī)體較大量的免疫活性因子，可以迅速提高機(jī)體內(nèi)免疫細(xì)胞的數(shù)目，但是長(zhǎng)時(shí)間使用，不會(huì)使血液內(nèi)淋巴細(xì)胞的數(shù)量無(wú)限制的增高。上實(shí)驗(yàn)表明結(jié)果表明，給與小鼠復(fù)方免疫因子以后，血液中的免疫細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)含量增多的現(xiàn)象，但升至230左右，會(huì)出現(xiàn)停頓現(xiàn)象，在5天內(nèi)未見(jiàn)其繼續(xù)升高。分組1d2d3d4d5d6dA123±1.2142±0.9185±2.1201±3.0217±2.1225±2.4B125±1.3165±2.0193±2.2203±2.5215±1.1231±2.3C124±2.1170±1.1195±1.2215±1.3237±2.0234±3.1D126±1.2165±1.4163±1.3153±1.2165±1.2158±2.2免疫活性因子對(duì)小鼠外周血吞噬性白細(xì)胞吞噬功能及免疫器官重量的影響

表6免疫活性因子對(duì)小鼠外周血吞噬性白細(xì)胞吞噬功能及免疫器官重量的影響

分析：連續(xù)以不同劑量復(fù)方免疫活性因子刺激小鼠5天后，小鼠外周血白細(xì)胞吞噬率明顯提高，但機(jī)體免疫器官重量無(wú)明顯變化。分組吞噬率(%)免疫器官(mg)/體重(g)脾臟重量胸腺重量A65.87.92±0.232.35±0.32B57.27.37±0.342.55±0.26C63.57.65±0.132.55±0.37D43.77.82±0.282.32±0.422.免疫活性因子對(duì)奶牛乳房炎的臨床治療試驗(yàn)

組別數(shù)量患病乳區(qū)數(shù)治療有效頭數(shù)痊愈乳區(qū)數(shù)有效乳區(qū)數(shù)治愈率（%）有效率（%）A11248882416.766.7A2124710102221.367.6A3124512252255.697.8A4124512221848.995.6A512471240785.1100A6124712172836.295.7A7124612281660.894.6療效試驗(yàn)

表7****奶牛廠治療結(jié)果表8********奶牛場(chǎng)治療效果表7，8顯示，抗生素乳房灌注+復(fù)方免疫活性因子肌肉注射組治愈率明顯高于其他各組，有效率達(dá)到97.8%以上，也明顯高于其他治療組。組別數(shù)量患病乳區(qū)數(shù)治療有效頭數(shù)痊愈乳區(qū)數(shù)有效乳區(qū)數(shù)治愈率（%）有效率（%）B112481082018.865.3B2124710122225.572.3B3124512281662.297.7B4124812232051.195.5B5124812381979.297.8B612481223224993.7B7124812271756.389.5藥物殘留

表9**牛場(chǎng)愈后牛乳中抗生素殘留統(tǒng)計(jì)

組別第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天A1++++++++±±-A2++++++±---A3+++++++++±-A4+++++++++--A5++++++±---A6-------A7-------表10********奶牛場(chǎng)愈后牛乳中抗生素殘留統(tǒng)計(jì)表9、10顯示，使用乳房灌注給藥的方式用抗生素治療奶牛乳房炎，第三天時(shí)抗生素殘留幾乎不可見(jiàn)，而使用抗生素肌肉注射地方法給藥，乳汁中的抗生素殘留在乳房炎治愈后的第四天才能消失，復(fù)方免疫活性因子和抗生素的聯(lián)合應(yīng)用，對(duì)抗生素的代謝沒(méi)有明顯的影響。組別第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天B1++++++±±--B2++++±----B3++++++±-

-B4++++++±-

-B5+++++±----B6-------B7-------產(chǎn)奶量統(tǒng)計(jì)表11******牛場(chǎng)治療過(guò)程中及愈后奶牛日平均產(chǎn)奶量統(tǒng)計(jì)組別第1天第2天第4天第6天第8天A121.43±3.5221.45±4.3621.55±4.3321.88±2.8521.93±6.03A220.53±3.3220.32±4.3421.30±4.3321.48±2.3521.58±2.03A322.72±3.4522.86±3.4323.78±3.4823.20±3.8323.38±2.33A420.31±3.3821.33±3.0921.75±7.3821.75±7.3821.83±4.38A521.62±7.8223.30±7.8723.54±1.3023.02±3.6323.98±3.02A620.33±3.5721.33±3.2921.75±7.0821.75±7.6821.73±4.58A720.70±3.5420.86±3.6221.78±3.4822.02±3.0622.38±3.32表12**奶牛場(chǎng)奶牛治療過(guò)程中及愈后日平均產(chǎn)奶量統(tǒng)計(jì)表11、12表明，在使用抗生素和復(fù)方免疫活性因子治療奶牛乳房炎的過(guò)程中，患病奶牛的產(chǎn)乳量軍有一定的回升，但使用復(fù)方免疫活性因子治療的奶牛產(chǎn)奶量回升明顯，這可能與復(fù)方免疫活性因子能夠參與受損奶牛乳腺細(xì)胞有關(guān)。組別第1天第2天第4天第6天第8天B123.97±3.3224.12±6.0324.32±3.6524.50±3.4524.89±6.83B224.73±3.6924.32±3.5624.62±7.5624.88±3.5724.84±2.74B326.22±3.4226.65±3.8927.59±4.5127.38±6.6527.33±2.58B423.67±3.3825.49±3.7824.76±4.1825.26±5.3625.12±3.63B524.53±7.7227.47±7.0827.69±3.3227.80±7.3827.34±3.47B623.17±2.2425.06±7.8425.18±4.7225.09±2.6625.37±2.37B723.89±3.6525.43±1.9425.98±1.3526.57±2.7326.56±3.48五、討論1.試驗(yàn)結(jié)果顯示使用免疫因子和抗生素聯(lián)合治療方法進(jìn)行治療效果良好，治愈率最高達(dá)到85.1%，有效率最高達(dá)到100%，療效好于單獨(dú)使用免疫活性因子或單獨(dú)使用抗生素，單獨(dú)使用免疫活性因子的療效優(yōu)于單獨(dú)使用抗生素組。其中對(duì)免疫因子進(jìn)行肌肉注射，抗生素進(jìn)行乳房灌注聯(lián)合治療組療效最佳。其中治療效果為免疫因子進(jìn)行肌肉注射，抗生素進(jìn)行乳房灌注聯(lián)合治療組優(yōu)于免疫活性因子和抗生素均肌肉注射組，免疫活性因子和抗生素均肌肉注射組優(yōu)于單獨(dú)免疫因子肌肉注射組，單獨(dú)免疫因子肌肉注射組優(yōu)于免疫活性因子和抗生素均乳房灌注組，免疫活性因子和抗生素均乳房灌注組療效優(yōu)于免疫活性因子和抗生素單獨(dú)乳房灌注組，抗生素肌肉注射組療效最差。這種結(jié)果的出現(xiàn)可能和免疫活性因子經(jīng)肌肉注射后能夠直接進(jìn)入血液對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)節(jié)，而抗生素進(jìn)行進(jìn)行乳房灌注可以使抗生素以