亞病毒感染因子

亞病毒感染因子第1頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月非細(xì)胞生物朊病毒：只含蛋白質(zhì)一種組分

prion亞病毒:Subvirus至少有核酸和蛋白質(zhì)兩種組分類病毒：只含具有單獨侵染性的RNA組分viroid衛(wèi)星病毒、衛(wèi)星RNA：天生缺陷病毒,satellitevirus包括衛(wèi)星RNA真病毒:Euvirus第2頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月瘋牛病(MadCowdisease)第3頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月一、類病毒viroid1922年發(fā)現(xiàn)，減產(chǎn)20%-70%潛伏期長，提純和電鏡觀察無病毒粒子瑞士學(xué)者T.O.Diener1971年發(fā)現(xiàn)馬鈴薯紡錘形塊莖病的病原是一種只有侵染性小分子RNA而無蛋白質(zhì)的感染因子，稱為類病毒(viroid)——PSTV。類病毒經(jīng)帶毒葉片、種子以及媒介昆蟲傳播，可引起馬鈴薯、西紅柿、蘋果、柑桔、椰子等多種經(jīng)濟(jì)植物嚴(yán)重病害Potatospindletuberdisease,PSTD第4頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月T.O.Diener幾項研究試驗

(1967-1971,用番茄研究)1、超離心：2、有機(jī)溶劑處理：3、酚處理：4、核酸酶處理：5、密度梯度離心：105000×g僅10%在沉淀中(去脂肪)沉降系數(shù)不變RNase處理，喪失活性(蛋白變性）侵染活性更高PSTV沉降系數(shù)7~10S第5頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月定義類病毒是一個裸露的閉合環(huán)狀RNA分子，它能感染寄主細(xì)胞并在其中進(jìn)行自我復(fù)制使寄主產(chǎn)生病癥。類病毒的分子量小，僅為最小RNA病毒的十分之一，約10萬Da類病毒是共價閉合的單鏈環(huán)狀RNA分子，大小為246-399個核苷酸。所有的類病毒RNA沒有mRNA活性，不編碼任何蛋白第6頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月馬鈴薯紡錘形塊莖病類病毒Potatospindletuberviroid(PSTV)提純后的PSTV在電鏡下觀察(脲展層)：長50nm的棒狀dsRNA分子，由2個互補(bǔ)的半體組成，一個含179個核苷酸，另一個含180個核苷酸，兩者間有70%的堿基以氫鍵方式結(jié)合，形成122個堿基對，整個棒狀結(jié)構(gòu)中有27個內(nèi)環(huán)，最大的螺旋含8個堿基對，最大的內(nèi)環(huán)含有12個核苷酸。第7頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月PSTV的結(jié)構(gòu)第8頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月類病毒的分類目前ICTV公布的類病毒有27種，分為2個科、7個屬：1、馬鈴薯紡錘形塊莖類病毒科5屬2、鱷梨白斑類病毒科2屬第9頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月類病毒病診斷和鑒定Koch’spostulates1、在病體中找不到細(xì)胞和體細(xì)胞的致病因子，可機(jī)械摩擦或昆蟲媒介傳染2、檢測小分子核酸5S~7S,區(qū)別于植物的RNA

PAGE濃度5%、10%、20%

(一般病毒2%）3、接種電泳帶酚抽提液接種敏感寄主4、提純第10頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月生產(chǎn)實際診斷的幾種方法1、指示植物2、凝膠電泳（應(yīng)用廣，但手續(xù)復(fù)雜）3、互補(bǔ)DNA（精確，適用）

分子雜交，有已知類病毒RNA第11頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月類病毒的提純

酚相（去掉）

樣品上清（去掉）酚相（去掉）水相沉淀離心水相離心上清

沉淀上清(去)

沉淀(類病毒)(RNA)乙醇(各種RNA)DNaseSDS酚LiCl大分子RNAbuffer酚、SDS冷乙醇破壞寄主DNA去酶蛋白第12頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月類病毒致病性機(jī)理類病毒RNA分子直接干擾寄主細(xì)胞的核酸代謝類病毒也能結(jié)合到前mRNA的識別位點上，干擾mRNA的加工類病毒的+RNA和-RNA還能作為寄主基因組DNA模板的競爭者，與依賴于DNA的RNA聚合酶Ⅱ結(jié)合，使之指導(dǎo)類病毒的復(fù)制，破壞了mRNA的合成。第13頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月類病毒復(fù)制類病毒的遺傳信息不足以編碼任何復(fù)制酶健康植物中含兩種類型的RNA合成系統(tǒng)：1、依賴于DNA的RNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ2、依賴于RNA的RNA聚合酶類病毒RNA在分子內(nèi)的高度堿基配對和G:C含量，使其非常象DNA分子，寄主的依賴于DNA的RNA聚合酶可能以其作模板合成類病毒的RNA第14頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月類病毒復(fù)制的滾環(huán)理論：+RNA-RNA寡聚物+RNA寡聚物裂解成+RNA單位長度的線狀分子共價閉合環(huán)狀分子類病毒前體末端修飾第15頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月第16頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月環(huán)狀類病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后：首先以(+)鏈類病毒為模板轉(zhuǎn)錄生成多個單位長度的(-)鏈復(fù)制中間體，其(-)鏈復(fù)制中間體有兩種可能的命運(yùn)：先被切割，再環(huán)化：(-)鏈復(fù)制中間體先被切割生成單位長度的線狀(-)鏈分子，再自我環(huán)化，然后以環(huán)化(-)鏈為模板轉(zhuǎn)錄出多個單位長度的(+)鏈復(fù)制中間體，再進(jìn)一步修飾和連接，形成具有感染性的單體環(huán)化的類病毒分子；先轉(zhuǎn)錄，再被切割修飾：多個單位長度的(-)鏈復(fù)制中間體直接轉(zhuǎn)錄生成(+)鏈復(fù)制中間體的模板，然后剪接修飾。鱷梨白斑類病毒ASBVd(+)鏈和(-)鏈復(fù)制中間體中均發(fā)現(xiàn)有錘頭樣核酶結(jié)構(gòu)，因此推測ASBVd可能是采取第一種復(fù)制途徑，而PSTVd可能是利用第二種復(fù)制途徑。類病毒復(fù)制的滾環(huán)理論第17頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月類病毒的起源推測、設(shè)想：1、原始生命形態(tài)非生命—類病毒—病毒—原始細(xì)胞……2、起源于寄主核酸存在于細(xì)胞核，與寄主核酸同源性高3、起源于病毒核酸缺失編碼外殼蛋白的基因，RNA噬菌體核酸復(fù)制第18頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月類病毒病的防治1、綜合防治

避病、防侵染、培育無病種苗、防治傳播介體2、抗病品種3、藥劑：微量元素ZnSO4、H3BO3、CuSO4等4、弱毒株保護(hù)第19頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月二、朊病毒prion美國動物病毒學(xué)家Prusiner1982年研究羊的瘙癢病(Scrapie)病原（核酸酶、蛋白酶、紫外線和其它化學(xué)因子處理）時發(fā)現(xiàn)的一種對人有侵染性的蛋白質(zhì)顆粒，稱為“Prion”(Proteininfection的縮寫)或“Virion”，譯為“朊病毒”，或“毒朊”。Prusiner1997年因此獲諾貝爾生理和醫(yī)學(xué)獎2004年P(guān)rusiner證明,將提純的朊病毒注射到基因工程小鼠的腦中時，可以引起腦病，該項研究發(fā)表于2004年7月30日Science。第20頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月二、朊病毒prion人和哺乳動物朊病毒病的潛伏期特別長．一般為數(shù)月乃至數(shù)10年時間，病程進(jìn)行緩慢，由朊病毒感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)所產(chǎn)生的病理學(xué)特點為：①神經(jīng)原、神經(jīng)軸索、星狀細(xì)胞、樹枝細(xì)胞呈進(jìn)行性空泡化②神經(jīng)膠質(zhì)增生；③細(xì)胞外淀粉樣變性蛋白沉積，形成光鏡下可見的病理學(xué)特征如羊搔癢病呈現(xiàn)羊搔癢病相關(guān)纖絲(scrapic-associatedfibril，SAF)CJD則表現(xiàn)為淀粉樣蛋白斑(amyloidplaque)，其實質(zhì)均為傳染性朊病毒蛋白的團(tuán)塊。第21頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月第22頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月朊病毒在電鏡下呈桿狀顆粒，直徑25nm，長100-200nm(一般為125-150nm)，桿狀顆粒不單獨存在，總是呈叢狀排列，其大小和形狀不一，有的叢含有多達(dá)100個桿狀顆粒。朊病毒蛋白(PrP)是由一種分子量為33-35kD的正常細(xì)胞蛋白prpc發(fā)生構(gòu)型轉(zhuǎn)變形成的，由于它類似于羊搔癢因子，故又稱為prpsc。朊病毒蛋白(prionprotein,PrP)第23頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月prpsc是prpc的異構(gòu)體，2者的一級結(jié)構(gòu)和分子量大小完全相同。prpsc在蛋白酶解作用下切去N端序列，可生成prpsc27-30kD。prpsc

27-30kD是一種蛋白酶抗性蛋白(proteinase-resistantprotein)，該蛋白能夠聚合成電鏡下可見的棒狀淀粉樣蛋白。正常的prpc與prpsc之間在構(gòu)型上的差異主要表現(xiàn)為α螺旋含量減少，β折疊的含量增加。朊病毒蛋白(Prionprotein,PrP)第24頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月朊病毒蛋白(Prionprotein,PrP)第25頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月侵染性的朊病毒的單體含有3個或少于3個prp分子，而桿叢聚合體可能含多到105個prp分子，其半感染劑量(ID50)介于10-100個桿狀體。朊病毒的分子量為27-30kDa。提純的朊病毒用剛果紅染色，在光學(xué)顯微鏡下可看到許多無定形結(jié)構(gòu)，大小為1-20μm。Prp具兩種形式prpc

和prpsc。來源于同一個基因，宿主染色體基因編碼，人的prp基因定位于20號染色體的短臂上。朊病毒蛋白(Prionprotein,PrP)第26頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月

prpc是一種細(xì)胞膜結(jié)合的糖蛋白，但通過膜內(nèi)陷可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，通常位于細(xì)胞內(nèi)的prpc是可溶性蛋白。在神經(jīng)系統(tǒng)中的可能作用：

參與神經(jīng)系統(tǒng)功能的維持

通過抗氧化途徑而保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞免受氧化損傷，PrPc通過與銅原子形成復(fù)合物而發(fā)揮抗氧化活性參與淋巴細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

參與核酸代謝

PrPC可能具有調(diào)整程序細(xì)胞死亡的功能PrPc的生理功能

第27頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月PrP27~30是羊搔癢癥致病因子證據(jù)1、核酸酶、蛋白酶、紫外線和其它化學(xué)因子處理2、用生化方法與搔癢因子共純化，其濃度與傳染力在正相關(guān)3、PrP27~30的分解動力學(xué)與傳染性相同4、親和層析純化的PrP27~30具有傳染性5、用中和抗體中和PrP27~30其傳染性消失第28頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月-+溶于非變性洗滌劑+-與特異的抗體反應(yīng)不釋放可從膜釋放依賴GPI（糖基磷酸肌醇）附著細(xì)胞膜-(部分耐受)+蛋白酶消化prpscprpc性狀Prp構(gòu)型變化導(dǎo)致蛋白質(zhì)性質(zhì)變化prp功能：學(xué)習(xí)和長期記憶的保持所必須CJD、GSS癡呆——這些功能的喪失第29頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月朊病毒蛋白的傳染過程少量PrPSc與細(xì)胞PrPc結(jié)合后，以PrPSc為模板，使PrPc發(fā)生明顯的構(gòu)象改變而轉(zhuǎn)變?yōu)镻rPSc；PrPSc傳染擴(kuò)增，最后使PrPc全部轉(zhuǎn)變成不溶性的PrPSc；腦組織形成淀粉樣斑塊直至死亡；PrPc轉(zhuǎn)變成PrPSc后造成PrPc缺失，使得：神經(jīng)細(xì)胞SOD酶活性下降，從而對超氧化物等所造成的氧化損傷的敏感性增加神經(jīng)細(xì)胞對高谷氨酸和高銅毒性的敏感性增加，綜合導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞死亡變性

第30頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月PrPc分子（圓圈左側(cè)）與PrPSc分子（圓圈右側(cè)）相互作用，并轉(zhuǎn)化為后者的循環(huán)過程。PrPSc分子通過形成長纖維（右）的方式破壞正常的腦組織（左）。2005/4/22《cell》傳染過程PrPcPrPsc第31頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月朊病毒蛋白質(zhì)的構(gòu)象轉(zhuǎn)變假說1、“種子”模型

2、重折疊模式

1、“種子”模型

prpsc充當(dāng)“種子”,prpc單體構(gòu)象比prpsc更穩(wěn)定在沒有“種子”存在時，固有的PrPC和極少量PrPsc單體之間發(fā)生快速的可逆性構(gòu)象變化。當(dāng)條件適宜時，PrPsc分子之間可互補(bǔ)締合而變得穩(wěn)定。從而使平衡式向PrPsc方向反應(yīng)，直至形成一穩(wěn)定的“種子”。這個“種子”可通過互相粘著而繼續(xù)生長，最后碎裂成小的感染單位。此模式能解釋經(jīng)腦內(nèi)潛育后才發(fā)病的朊病毒疾病。已有科學(xué)實驗支持。2、重折疊模式模板介導(dǎo)的轉(zhuǎn)換過程依靠催化PrPc或一個不穩(wěn)定的中間體的重排來提高轉(zhuǎn)換，以形成更穩(wěn)定的PrPsc構(gòu)象。能解釋由于點突變而引起的遺傳性朊病毒病。點突變的發(fā)生增加了不穩(wěn)定的中間分子的數(shù)量，同時加快它轉(zhuǎn)換成PrPsc的速率。但此模型還無科學(xué)實驗支持。第32頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月朊病毒研究進(jìn)展科學(xué)家首次觀察到朊病毒入侵腦細(xì)胞的活動

將標(biāo)記后的prpsc加入到培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞中觀察并用共焦顯微鏡照相——利用激光來掃描熒光樣品，并獲得清晰的三維圖像。繪制1000多張不同的圖像并將獲得的照片作成錄像，顯示出了prpsc進(jìn)入細(xì)胞、沿著窄小的神經(jīng)突前進(jìn)并最終進(jìn)入最接近的鄰居細(xì)胞的過程

2005/5/25JournalofNeuroscience

朊病毒傳染性與蛋白分子大小有關(guān)：

prpc以單分子狀態(tài)存在，對機(jī)體沒有任何危害。但變異prpsc會多個分子聚集在一起（14至28個蛋白分子），然后扭曲變形。變異的朊病毒顆粒，會吸引單分子狀態(tài)存在的prpc并將其“同化”，最終使動物腦組織海綿化，產(chǎn)生許多孔洞。（2005/9/8Nature）第33頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月朊病毒研究進(jìn)展

淋巴結(jié)是傳播朊病毒的關(guān)鍵淋巴結(jié)是傳播少量朊病毒到神經(jīng)系統(tǒng)的關(guān)鍵所在；不能排除：淋巴結(jié)和朊病毒在身體內(nèi)向其它非神經(jīng)組織傳播有關(guān)。2007/9/25BMCVeterinaryResearch致死型朊病毒傳播中的關(guān)鍵蛋白被發(fā)現(xiàn)

有一種蛋白可能是朊病毒中關(guān)鍵蛋白，裂解感染性蛋白生成“種子”片段，然后侵襲腦組織致宿主迅速死亡。傳播過程中還存在另一關(guān)鍵步驟——朊病毒復(fù)合物的裂解片段的存在。朊病毒復(fù)制需要有熱休克蛋白(Hsp104)參與，可能具有這種蛋白“粉碎機(jī)”的功能。（2007PLoSBiology）第34頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月朊病毒研究進(jìn)展找到瘋牛病致病新病毒

《歐洲分子生物學(xué)組織雜志》2007，10除了已知的被稱為PrP的朊病毒蛋白外，新發(fā)現(xiàn)了另一種被稱為‘沙杜’（Shadoo）的朊病毒蛋白。

“像瘋牛病這樣的朊病毒疾病，我們在許多方面都尚未搞清。比如正常的朊病毒蛋白有哪些功能，朊病毒如何在動物之間進(jìn)行傳播，以及如何導(dǎo)致腦細(xì)胞死亡等。希望新的沙杜朊病毒的發(fā)現(xiàn)，會在這些重要問題上給我們新的啟迪。”第35頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月朊病毒研究展望已經(jīng)從結(jié)構(gòu)水平上認(rèn)識朊病毒：PrPC的結(jié)構(gòu)、折疊動力學(xué)和可能轉(zhuǎn)變成PrPsc的折疊途徑。蛋白酶消化敏感性實驗和腦組織雜交分析證明PrPsc可采取不同的構(gòu)象。已經(jīng)知道朊病毒有不同的株型且相互雜交。朊病毒傳播和致病的必需區(qū)域已被限定為兩個不同片段，共同區(qū)域只包含106個殘基。隨著X-射線衍射技術(shù)、核磁共振光譜等技術(shù)應(yīng)用，朊病毒結(jié)構(gòu)的研究即將取得成功，其功能學(xué)的研究已成為科研的工作重點。第36頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月瘋牛病(Madcowdisease)第37頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月瘋牛病(Madcowdisease)牛海綿狀腦病BSE(BovineSpongiformEncephalopathy)一、來源與分布1985年英國農(nóng)場牛群比利時、法國、德國、意大利、加拿大、日本等二、易感動物：小白鼠、羊、豬、貓、羚羊、金絲猴、獼猴等，但不感染倉鼠三、傳播途徑：垂直傳播、被污染的飼料經(jīng)口腔傳染。常見的傳染源：骨、肌肉、肉骨粉、臟器、淋巴結(jié)、唾液、血液等第38頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月四、病原1986分離到“癢病相關(guān)原纖維”(Scrapie-associatedFibrils,SAF)，經(jīng)氨基酸分析確認(rèn)與“鋸形蛋白Prp-Scrapie,PrPsc”有98%同源性1987，用BSE患牛腦組織勻漿接種小白鼠，癥狀相似分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，其次存在于脾、淋巴結(jié)，腸、唾液腺中濃度高，肌肉和血液中較低，糞便、尿液中很少對高強(qiáng)度理化滅活處理有很強(qiáng)抵抗力，經(jīng)核輻射仍可存活，普通烹調(diào)溫度、消毒、冷凍和干燥均無滅活作用，對強(qiáng)酸強(qiáng)堿抵抗力強(qiáng)，對福爾馬林、紫外線不敏感，121℃耐30min，用2-5%次氯酸鈉處理24h才滅活瘋牛病(MadCowDisease)第39頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月瘋牛病(Madcowdisease)五、臨床癥狀1、行為變化：恐懼、神經(jīng)質(zhì)、狂暴、具攻擊性2、姿勢和運(yùn)動異常：后軀運(yùn)動失調(diào)、站立困難、頭部和肩部肌肉震顫抽搐、倒地不起3、感覺變化：對聲音、氣味和觸摸過敏離群、不安、體溫偏高、體質(zhì)下降、產(chǎn)奶量減少、呼吸頻率高、震顫、倒地不起、死亡發(fā)病幾個星期——12個月潛伏期2—8年（4-5）牛：22個月——17歲（3-5年）第40頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月瘋牛病(Madcowdisease)六、病理變化1、腦灰質(zhì)呈空泡變性2、神經(jīng)元消失3、原膠質(zhì)細(xì)胞肥大七、英國瘋牛病風(fēng)波1985年首次發(fā)現(xiàn)，1996/3/20（新型克-雅氏病）直接經(jīng)濟(jì)損失450億美元，補(bǔ)償農(nóng)民120-180億，社會問題（牛只存欄數(shù)1180萬頭，從業(yè)20萬人，總產(chǎn)值60億美元）、對英國政治、外交等影響大八、我國檢疫政策牛只存欄數(shù)1.5億頭，年產(chǎn)牛肉600多萬噸，牛奶700多萬噸如……撲殺——1500億元直接損失第41頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月朊病毒消毒方法和朊病毒病的防治病原因子136℃高壓蒸汽消毒1h1~2mol/LNaOH處理1h以上5mol/L以上的NaClO溶液消毒2h960ml/L的乙酸溶液浸泡1h以上（固定組織的甲醛100ml/L對病料消毒不徹底）焚燒病畜及產(chǎn)品培養(yǎng)抗病家畜

蛋白質(zhì)構(gòu)象變化的機(jī)理第42頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月人的朊病毒病可分為傳染型、遺傳型和散發(fā)型三種形式傳染型——朊病毒在人群中水平傳播Kuru病:主要局限于巴布亞新幾內(nèi)亞的Fore族人群，傳播途徑與食人肉習(xí)俗有關(guān),癥狀與羊搔癢病相似醫(yī)原性CJD:通過接受CJD患者捐獻(xiàn)的器官或靜脈注射污染有朊病毒的人生長激素傳播遺傳型——家族性CJD、FFI和GSS，由生殖細(xì)胞突變形成散發(fā)型——大多數(shù)CJD和部分GSS，其致病機(jī)制可能與體細(xì)胞突變或PrP的自發(fā)性構(gòu)型改變有關(guān)除此之外，在英國和法國還發(fā)現(xiàn)一種變異型CJD，可能是由牛朊病毒傳染給人所引起的人類朊病毒病第43頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月人類朊病毒病1、庫魯?。╧uru)/震顫病2、克雅氏?。–JD)3、格斯綜合癥（GSS)4、新型克雅氏?。╲CJD)5、傳染性病毒癡呆病（早老性癡呆?。?PresenileDementia)6、致死性家族失眠病(FatalFamilialInsomnia,FFI)第44頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月庫魯?。╧uru)亞急性傳染性海綿狀腦病小腦共濟(jì)失調(diào)、震顫——喪失運(yùn)動能力，伴有構(gòu)音障礙，患者100%死亡。潛伏期4~30年新幾內(nèi)亞東高原Fore人陋習(xí)——吃尸腦流行區(qū)有3萬多人/1000英里2發(fā)病成年女:男5:1男:女2~3:1高原溫度（水沸點）<95℃第45頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月克雅氏病（CJD)全球分布，我國有發(fā)生(潛伏期可長達(dá)30年)感冒樣癥狀——精神異常，癡呆、小腦共濟(jì)失調(diào)、昏迷伴有肺部感染死亡病程：數(shù)月~1年（平均5個月）散發(fā)型90%、遺傳型10%醫(yī)源型少：污染的醫(yī)療器械、組織移植、注射腦垂體源激素（生長素、促性腺素等）100%死亡第46頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月新型克雅氏?。╲CJD)207例CJD中10人有明顯不同臨床：憂慮、抑郁、進(jìn)行性神經(jīng)異?！∧X綜合癥，健忘、癡呆肌陣攣或舞蹈病無CJD腦電圖異常

病理：海綿狀腦與BSE的關(guān)系：第47頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月用于診斷朊病毒病的技術(shù)第48頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月CJD-humanKuru-humanBSE-(cow)Scrapie-(sheep)第49頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月三、衛(wèi)星病毒satellites在植物病毒中，有些病毒含有兩種相關(guān)的病毒顆粒:一種是較大的病毒顆粒，另一種是較小的病毒顆粒

這兩種病毒顆粒之間的抗原性完全不同;它們的RNA核苷酸序列也無同源性;小病毒顆粒RNA的侵染與復(fù)制必需依賴于大病毒顆粒將這種小病毒顆粒稱為衛(wèi)星病毒，大病毒顆粒稱為輔助病毒helpervirus。SatelliteTobacconecrosisvirus(STNV)16.8nm/28nm第50頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月三、衛(wèi)星病毒satellites丁型肝炎病毒HDV——HBV比較不同衛(wèi)星病毒，發(fā)現(xiàn)它們都有下列性質(zhì)：單獨沒有侵染性，必需依賴輔助病毒才能侵染和復(fù)制（基因組有缺陷）非輔助病毒復(fù)制所必需，可抑制輔助病毒的復(fù)制衛(wèi)星病毒的RNA能夠編碼自身的外殼蛋白，其外殼蛋白與輔助病毒沒有血清學(xué)關(guān)系衛(wèi)星病毒RNA與輔助病毒基因組RNA核苷酸序列無同源性第51頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月四、衛(wèi)星核酸1976年美Kaper等在CMV中首先發(fā)現(xiàn):衛(wèi)星RNA是伴隨病毒復(fù)制的低分子量（300~400b)線狀小RNA，不能獨立復(fù)制,完全依賴于特定輔助病毒,它與病毒RNA無序列同源性。CMV的衛(wèi)星RNA：335個核苷酸組成，復(fù)制依賴于輔助病毒，但又干擾輔助病毒RNA的復(fù)制，降低病毒的致病能力，并改變寄主植物的癥狀表現(xiàn)。既是侵染病毒的RNA，又是亞病毒之一。衛(wèi)星RNA能作為黃瓜花葉病毒病的生防因子第52頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月ICTV已將衛(wèi)星核酸分為：單鏈衛(wèi)星DNA：番茄卷葉病毒衛(wèi)星DNA雙鏈衛(wèi)星RNA：啤酒酵母M病毒衛(wèi)星RNA單鏈衛(wèi)星RNA：CMV衛(wèi)星RNA等第53頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月我國衛(wèi)星核酸的研究：中科院微生物所田波研究員，1981年從應(yīng)用角度，將其作為生防因子，研究中發(fā)現(xiàn)衛(wèi)星RNA完全符合Koch’s法則，侵染特異的寄主（病毒），且能維持自身的遺傳特性。提出衛(wèi)星RNA屬于亞病毒第54頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月病毒衛(wèi)星RNA致弱病毒機(jī)理一、抑制病毒及其基因組復(fù)制CMV為三分體RNA基因組病毒，含：RNA-1（3900b）RNA-2（3400b）侵染性所必須RNA-3（2193b）另含有亞基因組RNA-4(1027b)，其衛(wèi)星RNA稱RNA-5（335b）研究單獨衛(wèi)星RNA對病毒復(fù)制的影響（1）去除衛(wèi)星RNA的CMV（電泳洗脫,多次單斑分離，純化）（2）表達(dá)衛(wèi)星RNA的轉(zhuǎn)基因植株第55頁，課件共62頁，創(chuàng)作于2023年2月衛(wèi)星RNA弱CMV強(qiáng)CMVA492(單抗ELISA檢測)

+++0.24~0.27(31.5%)

-++0.38~0.42(49.4%)--+0.77~0.85轉(zhuǎn)衛(wèi)星基因和未轉(zhuǎn)化（對照）的煙草和番茄幼苗接種不含衛(wèi)星RNA的CMV后(用病汁液定量接種藜)：表達(dá)