生化檢驗基礎知識課件

一、常規(guī)標本的采集、處理（一）常規(guī)標本的采集生化檢驗的標本有血液、尿液、腦脊液和腹水等，其中以血液標本最為常用。1.檢驗申請單申請單是實驗檢查的第一步。一份完整的申請單應包括：條碼號，門診號，住院號；病人的姓名，性別，出生日期；病房，床位號；臨床診斷，問題或特殊檢驗注意事項；申請檢查項目；標本類型；采樣時間，標本接收時間（年.月.日.時.分）；有關治療情況（如用藥情況）；醫(yī)生姓名等。其中有關臨床和治療信息，特別是用藥信息是檢驗師評價結果的必要條件。藥物困難在體外影響分析方法或在體內引去病理變化，因此，要特別注意在申請單上提供類信息.。2.

血液標本的采集生化檢驗用的血液標本可來自于靜脈、動脈或毛細血管。靜脈血是最常用的標本，靜脈穿刺是最常用的采血方法。毛細血管采血主要用于兒童，血氣分析多使用動脈血。（1）采血前準備為了使實驗室結果有效地用于臨床，實驗室應了解在收集標本前和收集標本時，所有會影響實驗室的非患者內在疾病因素。采取各種措施，提出對患者采集標本前以及采集時的要求，稱之為患者準備。（2）靜脈采血法采血步驟：采血前要核對病人姓名、年齡、性別、編號及檢驗項目等，按試驗項目要求，準備好相應的容器，如空白試管、抗凝管或促凝管等。病人應取坐位或臥位，采血部位通常是前臂肘窩的正中靜脈。若用普通采血法，采血后應取下針頭，將血液沿管壁緩慢注入試管內。(5)干擾離子的影響:應采用適當方法消除其影響6ul．最小試劑量120ul。2)進行W2(自動沖洗比色杯、攪拌棒、試劑探針與廢液管路)，每周交替使用酸性或堿性洗液作W2(酸性洗液濃度為lmmol／L的鹽酸，堿性洗液有效濃度為5％的次氯酸鈉；對于酶活性來說，可取一高值樣品作倍比稀釋，按分析項目的波長、樣品量與試劑量、孵育時間測定各管活性濃度，以活性濃度對稀釋度作圖，在測定線性內的最高濃度為測定線性上限，最低濃度為測定線性下限。很多生化成分受膳食影響，因此，采血前要確認病人是否空腹。適用于具有高揮發(fā)性、高粘稠度以及密度大于2.相對誤差為1%-3%可用于吸取一般性溶液；標本離心后，惰性分離膠能夠將血液中的液體成分（血清或血漿）和固體成分（紅細胞，白細胞，血小板，纖維蛋白等）徹底分開并完全積聚在試管中央而形成屏障，標本在48小時內保持穩(wěn)定。尿液檢驗最好留取新鮮標本及時檢查，否則尿液生長細菌，使尿液中的化學成分發(fā)生變化。定量生化分析多收集

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小時尿液，

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小時尿標本采集方法如下：

囑病人在早晨

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時排尿棄去，以后每次排尿均收集于一大容器內，至次日早晨

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時最后一次尿亦收集于容器內。0時，其相對誤差趨于無限大；同標值的可調加樣器的失準率比同標值的定值加樣器失準率大。微量加樣器的失準率與加樣器的使用次數(shù)成正相關關系；一份完整的申請單應包括：條碼號，門診號，住院號；尿液、腦脊液和胸腹水等標本常需離心，取上清液進行分析當使用120ml試劑瓶時，取出試劑瓶之間的擋板，在試劑冰箱內設置120ml試劑瓶時要求兩個60ml試劑瓶的寬度。數(shù)據(jù)分散檢查錯誤(紅色)：數(shù)據(jù)比較檢查錯誤(蘭色)1)，濃度測量相對誤差較小；①．血標本必須隔絕空氣。其他特殊標本的采集需專科醫(yī)生操作注意事項：a.很多生化成分受膳食影響，因此，采血前要確認病人是否空腹。b.避免充血和血液濃縮：采血時應動作迅速，盡可能縮短止血帶使用時間。用止血帶壓迫時間最好不超過半分鐘，否則將使生化結果升高或下降。c.若病人正在進行靜脈輸液，不宜在輸液同側手臂采血；若女性病人做了乳腺切除術，應在手術對側手臂采血。d.采血的體位：體位改變可引起一系列的生理變化，使血液中的許多指標發(fā)生改變。一般采取直立位采血，其標本的測定值比臥位高5％～15％。因此，采血時要注意保持正確的體位（坐位或臥位），以及體位的一致性。e.采血時只能向外抽，決不能向靜脈內推，以免注入空氣，形成氣栓而造成嚴重后果。f.防止溶血：造成溶血的因素有注射器和容器不干燥、不清潔；穿刺不順利，組織損傷過多；淤血時間過長；抽血速度太快；血液注入容器時未取下針頭或注入速度過快產(chǎn)生大量泡沫；震蕩過于劇烈等。若用普通注射器采血后，未取針頭直接將血注入真空管內，也易造成溶血。體內溶血屬合格標本，但應在報告單上注明。g.如需全血、血漿，可將血液如上法注入盛有抗凝劑的試管內，立即輕輕搖動，使血液和抗凝劑混勻，以防血液凝固。如需作二氧化碳結合力測定時，抽取血液后，應立即注入有石蠟油的抗凝試管中，注入時針頭應插入石蠟油面以下，以隔絕空氣，立即送驗。否則血液中二氧化碳逸出，使檢驗結果降低，影響準確性。h.采血完畢，連同檢驗單及時送驗，清理用物，歸還原處。一次性注射器使用后應經(jīng)消毒液浸泡集中處理。常用全血標本采血量與要求（不需空腹）

常用全血標本采血量與要求（空腹）常用血清標本采血量與要求（3）動脈采血法肱動脈、股動脈、橈動脈以及其它任何部位的動脈都可以作為采血點，但多選擇肱動脈和橈動脈。操作方法用2ml注射器，連接7號針頭，吸1：500肝素生理鹽水溶液1ml，將活塞來回抽動，使內壁沾勻肝素，再推掉全部肝素溶液，將活塞推至空筒頂端后不再回拉，以保持注射器內無空氣。選擇動脈（橈動脈采血比較方便），常規(guī)消毒病人的皮膚及操作者的左手食、中指后，以左手繃緊皮膚，右手持注射器，用左手食指觸摸動脈搏動處，以45度角進針，見血液自動加入空筒內至2ml后拔出針頭，囑病人按壓局部5分鐘，應立即用橡皮泥或橡皮塞封閉針頭（針頭斜面埋入橡皮中即可），以隔絕空氣，在手中搓動注射器，使血與肝素混合，立即送驗。注意事項①．血標本必須隔絕空氣。因為血氣分析是指當天大氣壓條件下，用隔絕空氣的血標本與一定濃度的氣體相結合，而后測定人體內PH值、氧分壓等，作為監(jiān)測及追蹤觀察病人的血氣情況。血標本中若進入空氣將產(chǎn)生誤差。因此采血的注射器使用前應檢查有無漏氣，針頭必須連接緊密，標本采集后立即封閉針頭斜面。②．及時送驗。標本采集后應立即送驗，如要等待測定，應將標本置于0到4度冰箱內保存不得超過1小時，以免影響檢驗結果。（4）真空采血法雙向針一端插入真空試管內，另一端在持針器的幫助下刺入靜脈，血液在負壓作用下自動流入試管內。由于在完全封閉狀態(tài)下采血，避免了血液外溢引起的污染，并有利于標本的轉運和保存。標準真空采血管采用國際通用的頭蓋和標簽顏色顯示采血管內添加劑種類和試驗用途。①普通血清管紅色頭蓋，采血管人不含添加劑，用于常規(guī)血清生化，血庫和血清學相關檢驗。②快速血清管橘紅色頭蓋，采血管內有促凝劑，可激活纖維蛋白酶，使可溶性纖維蛋白變?yōu)椴豢扇艿睦w維蛋白多聚體，進而形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊。快速血清管可在5分鐘內使采集的血液凝固，適用于急診血清系列化試驗。③惰性分離膠促凝管金黃頭蓋，采血管內添加有惰性分離膠和促凝劑。標本離心后，惰性分離膠能夠將血液中的液體成分（血清或血漿）和固體成分（紅細胞，白細胞，血小板，纖維蛋白等）徹底分開并完全積聚在試管中央而形成屏障，標本在48小時內保持穩(wěn)定。促凝劑可快速激活凝血機制，加速凝血過程，適用于急診血清生化試驗。④肝素抗凝管綠色頭蓋，采血管內添加有肝素。肝素直接具有抗凝血酶的作用，可延長標本凝血時間。適用于紅細胞脆性試驗，血氣分析，紅細胞壓積試驗，血沉及普能生化測定，不適于做血凝試驗。過量的肝素會引起白細胞的聚集，不能用于白細胞計數(shù)。因其可使血片染色后背景呈淡藍色，故也不適于白細胞分類。⑤血漿分離管淺綠色頭蓋，在惰性分離膠管內加入肝素鋰抗凝劑，可達到快速分離血漿的目的，是電解質檢測的最佳選擇，也可用于常規(guī)血漿生化測定和ICU等急診血漿生化檢測。血漿標本可直接上機并在冷藏狀態(tài)下保持48小時穩(wěn)定。⑥.EDTA抗凝管紫色頭蓋，乙二胺四乙酸（EDTA，分子量292）及其鹽是一種氨基多羧基酸，可以有效地螯合血液標本中鈣離子，螯合鈣或將鈣反應位點移去將阻滯和終止內源性或外源性凝過程，從而防止血液標本凝固。適用于一般血液學檢驗，不適用于凝血試驗及血小板功能檢查，亦不適用于鈣離子，鉀離子，鈉離子，鐵離子，堿性磷酸酶，肌酸激酶和亮氨酸氨基肽酶的測定及PCR試驗。⑦.枸櫞酸鈉凝血試驗管淺藍頭蓋，枸櫞酸鈉主要通過與血樣中鈣離子螯合而起抗凝作用。適用于凝血實驗，國家臨訂實驗室標準化委員會（nationalcommitteeforclinicallaboratorystandards,NCCLS)推薦的抗凝劑濃度是3.2%或3.8%（相當于0.109mol/L或0.129mol/L),抗凝劑與血液的比例為1：9。尿液檢驗最好留取新鮮標本及時檢查，否則尿液生長細菌，使尿液中的化學成分發(fā)生變化。7讀數(shù)范圍內時，測量的準確度較高。標值容量小的失準率較容量大的失準率大。影響顯色反應的主要因素

(1)顯色劑用量:通過實驗來確定最適用量;

(2)反應液的酸堿度(pH)溶液酸堿度直接影響金屬離子與顯色劑存在形式以及有色化合物組成的穩(wěn)定性.采取各種措施，提出對患者采集標本前以及采集時的要求，稱之為患者準備。2影響微量加樣器準確的幾種常見因素及對策適用于凝血實驗，國家臨訂實驗室標準化委員會（nationalcommitteeforclinicallaboratorystandards,NCCLS)推薦的抗凝劑濃度是3.用蒸餾水洗滌套筒內壁。免疫濁度測定法按照儀器設計的不同可以分為兩種，即比濁儀測定（turbidimetermeasure）和散射比濁儀測定（nephelomitermeasure）。適用于紅細胞脆性試驗，血氣分析，紅細胞壓積試驗，血沉及普能生化測定，不適于做血凝試驗。6～20ul，沖洗分配量0或10ul：2時，百分透光率約為20-60%，測量誤差約為1%。用于免疫測定，基本原理是：抗原抗體在特殊緩沖液中快速形成抗原抗體復合物，使反應液出現(xiàn)濁度。影響顯色反應的主要因素

(1)顯色劑用量:通過實驗來確定最適用量;

(2)反應液的酸堿度(pH)溶液酸堿度直接影響金屬離子與顯色劑存在形式以及有色化合物組成的穩(wěn)定性.微量加樣器的失準率與加樣器的使用次數(shù)成正相關關系；4)Reaction(反應方向)：+、-，END與FIXED法不起作用，但RATE法一定要輸入正確。有關治療情況（如用藥情況）；6～20ul，沖洗分配量0或10ul：4)分析綠色樣品架后，檢查質控數(shù)據(jù)有無錯誤。血液標本采集后應及時分離血清或血漿，否則可發(fā)生紅細胞與血清之間成分的相互轉移，或細胞中的某些酶分解待測物等，而影響檢驗結果。在留取24小時或12小時尿液時，尿液標本應置冰箱保存或加入防腐劑（anti－septic），常用的防腐劑有：⑧.枸櫞酸鈉血沉試驗管黑色頭蓋，血沉試驗要求的枸櫞酸鈉濃度是3.2%(相當于0.109mol/L)抗凝劑與血液的比例為1：4⑨.草酸鉀/氟化鈉灰色頭蓋，氟化鈉是一種弱效抗凝劑，一般常同草酸鉀或乙碘酸鈉合并使用，其比例為氟化鈉1份，草酸鉀3份。此混合物4mg可使1ml血液在23天內不凝固和抑制糖分解，它是血糖測定的估良保存劑，不能用于尿素酶法測定尿素，也不有用于堿性磷酸酶和淀粉酶的測定，推薦用于血糖檢測。3.尿液標本的采集尿液標本的采集

（1）

采集方法

尿液標本有隨機新鮮尿、定時尿及

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小時尿，根據(jù)檢查項目選擇標本的采集類型。定量生化分析多收集

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小時尿液，

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小時尿標本采集方法如下：

囑病人在早晨

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時排尿棄去，以后每次排尿均收集于一大容器內，至次日早晨

8

時最后一次尿亦收集于容器內。測量并記錄

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小時尿液總量，然后混勻尿液，取適量尿液送檢。

（2）

注意事項

收集尿液標本的容器必須清潔干燥，

最好是一次性使用的容器。若容器反復使用，則須用洗滌液和自來水清洗，

再用蒸餾水沖洗。尿標本要防止混入月經(jīng)血、陰道分泌物、精液、前列腺液、糞便等異物。尿標本收集后應

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時內送檢，以免細菌作用和化學成分分解。若不能及時檢驗（如收集

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小時尿液），將標本置冰箱保存，若加入防腐劑，保存效果更佳。

4.其他特殊標本的采集需專科醫(yī)生操作二、標本的處理標本處理不當將可能引起比分析更大的誤差。因此，應根據(jù)分析目的選擇合適的抗凝劑、防腐劑和處理方法1、抗凝劑應用物理或化學方法除去或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，稱為抗凝。阻止血液凝固的化學試劑稱為抗凝劑（anticoagulant）。對抗凝劑的一般要求是用量少、溶解度大、不影響測定。生化檢驗常用的抗凝劑有以下幾種：

（1）肝素是一種含有硫酸基團的粘多糖，其抗凝機理主要是對抗凝血活酶和凝血酶的形成和活性，阻止血小板聚集。肝素抗凝血常用于血氣分析和部分生化項目的測定，使用1.0g／L的肝素溶液0.5ml可抗凝5ml血液。（2）草酸鉀－氟化鈉草酸鉀可與血中鈣離子生成草酸鈣沉淀，從而阻止血液凝固。草酸鉀溶解度大，抗凝作用強。氟離子能結合鈣而抗凝，但抗凝效果較弱。氟離子可抑制糖酵解中的烯醇化酶，防止糖酵解，若未加氟化鈉，血標本中葡萄糖含量將以每小時6％的速度下降。而在氟化鈉的存在下，血糖濃度在25℃可穩(wěn)定24小時，4℃可穩(wěn)定48小時。因此，草酸鉀－氟化鈉是血糖測定標本常使用的抗凝劑。2.防腐劑尿液檢驗最好留取新鮮標本及時檢查，否則尿液生長細菌，使尿液中的化學成分發(fā)生變化。在留取24小時或12小時尿液時，尿液標本應置冰箱保存或加入防腐劑（anti－septic），常用的防腐劑有：（1）濃鹽酸鹽酸使尿液保持酸性，阻止細菌繁殖，同時防止一些化學物質因尿液堿化而分解，通常用量為0．5～1．0ml濃鹽酸／100ml尿液，適用于24小時尿兒茶酚胺、秀草扁桃酸（VMA）、17－羥皮質類固醇和17－酮類固醇等定量測定。（2）甲苯甲苯可在尿液表面形成薄膜，防止細菌繁殖，用量1．0～2．0ml甲苯／100ml尿液，適用于尿肌酐、尿糖、蛋白質、丙酮等生化項目的測定。（3）冰醋酸用量5～10ml冰醋酸／24小時尿液，適用于24小時尿醛固酮測定。（4）麝香草酚可抑制細菌生長，用量為0．lg麝香草酚／100ml尿液。用10％的麝香草酚異丙醇溶液可增加麝香草酚的溶解量，達到抑菌及保護代謝物的作用，適用于尿鉀、鈉、鈣、氨基酸、糖、尿膽原、膽紅素等測定。標本離心后，惰性分離膠能夠將血液中的液體成分（血清或血漿）和固體成分（紅細胞，白細胞，血小板，纖維蛋白等）徹底分開并完全積聚在試管中央而形成屏障，標本在48小時內保持穩(wěn)定。采血完畢，連同檢驗單及時送驗，清理用物，歸還原處。標本的分離儲存和轉運A什反映了入射光與透射光的比率（A＝2－log10T，T代表濁度百分比）。雙向針一端插入真空試管內，另一端在持針器的幫助下刺入靜脈，血液在負壓作用下自動流入試管內。1)檢查樣本和試劑分配器是否有滲漏；有關治療情況（如用藥情況）；0時，其相對誤差趨于無限大；標本采集后應立即送驗，如要等待測定，應將標本置于0到4度冰箱內保存不得超過1小時，以免影響檢驗結果。6ul．最小試劑量120ul。A什反映了入射光與透射光的比率（A＝2－log10T，T代表濁度百分比）。4)分析綠色樣品架后，檢查質控數(shù)據(jù)有無錯誤。適用于具有高揮發(fā)性、高粘稠度以及密度大于2.病人的姓名，性別，出生日期；若用普通注射器采血后，未取針頭直接將血注入真空管內，也易造成溶血。采血前要核對病人姓名、年齡、性別、編號及檢驗項目等，按試驗項目要求，準備好相應的容器，如空白試管、抗凝管或促凝管等。微量加樣器的失準率與加樣器的使用次數(shù)成正相關關系；在實踐中，我們一般常用光電比色法進行校準。7讀數(shù)范圍內時，測量的準確度較高。肝素直接具有抗凝血酶的作用，可延長標本凝血時間。速率法是測最大反應的速度，即反應達到頂峰時的峰值。6目測吸入的液體體積是否合理。鉀在血清和紅細胞中之比為1:20；一、常規(guī)標本的采集、處理4預洗吸頭當裝上一個新吸頭時（或改變吸取的容量值）應預洗吸頭，先輕輕吸打幾次液樣,可消除產(chǎn)生吸液誤差。藥物困難在體外影響分析方法或在體內引去病理變化，因此，要特別注意在申請單上提供類信息.5)實驗室整潔，空間足夠，室內無化學腐蝕性試劑，無煙霧和水蒸氣若用普通注射器采血后，未取針頭直接將血注入真空管內，也易造成溶血。速率法的靈敏度和特異性都比終點法好。雙向針一端插入真空試管內，另一端在持針器的幫助下刺入靜脈，血液在負壓作用下自動流入試管內。肝素直接具有抗凝血酶的作用，可延長標本凝血時間。在實踐中，我們一般常用光電比色法進行校準。標值容量小的失準率較容量大的失準率大。①．血標本必須隔絕空氣。2)清洗比色杯與比色杯輪盤；氟離子能結合鈣而抗凝，但抗凝效果較弱。采血前要核對病人姓名、年齡、性別、編號及檢驗項目等，按試驗項目要求，準備好相應的容器，如空白試管、抗凝管或促凝管等。1)檢查樣本和試劑分配器是否有滲漏；常見的報警信息及處理方法分析7讀數(shù)范圍內時，測量的準確度較高。常用血清標本采血量與要求因此，血清鈉、鉀、鈣測定時，需注意及時分離標本，若不能立刻分離血清或血漿，應將標本放置于室溫或37℃水浴箱內，不能將血液標本直接放入4℃冰箱，以免發(fā)生溶血。3.標本的分離儲存和轉運血液標本采集后應及時分離血清或血漿，否則可發(fā)生紅細胞與血清之間成分的相互轉移，或細胞中的某些酶分解待測物等，而影響檢驗結果。例如，血清無機磷可由于紅細胞內有機磷酸酯被磷酸酯酶的水解而增加；血清中葡萄糖可因紅細胞內糖酵解酶的分解作用而降低此外，鈉存在于紅細胞與血清中之比為1:2；鉀在血清和紅細胞中之比為1:20；鈣在紅細胞中極少，幾乎全部在血清中。因此，血清鈉、鉀、鈣測定時，需注意及時分離標本，若不能立刻分離血清或血漿，應將標本放置于室溫或37℃水浴箱內，不能將血液標本直接放入4℃冰箱，以免發(fā)生溶血。對不是因操作不當引起的溶血、脂血或膽紅素血，應在檢驗報告上注明，供醫(yī)生參考。尿液、腦脊液和胸腹水等標本常需離心，取上清液進行分析分離后的標本若不能及時檢測或需保留以備復查時，一般應放于4℃冰箱，某些檢測項目的標本存放于-20℃冰箱更穩(wěn)定。標本存放時需加塞，以免水分揮發(fā)而使標本濃縮。需注意的是，某些檢測指標如乳酸脫氫酶的標本應存放于室溫，置4℃反而不穩(wěn)定。標本采集后應盡快送實驗室分析，標本管道傳遞系統(tǒng)可加快標本傳遞速度和避免標本的錯誤傳遞。若標本不能及時轉運到實驗室或欲將標本送到上級部門或檢測中心進行分析時，應將標本裝入試管密封，再裝入乙烯塑料袋，置冰瓶或冷藏箱內運輸，運送過程中應避免劇烈震蕩。要視所有標本為傳染品，對“高?！睒吮?，如乙肝病人標本、艾滋病病人標本等，要注明標識；急癥或危重病人標本要特別注明。嚴禁標本直接用口吸取、接觸皮膚或污染器皿的外部和實驗臺。標本用后均要做消毒處理，盛標本的器皿要消毒處理或毀型、焚燒。二、比色分析的要點及注意事項

生化檢驗的定量分析主要是基于分光光度技術的比色分析，包括：紫外、可見及濁度分析1.

分光光度計測量誤差：由朗伯-比爾定律可知，只有在一定的濃度范圍內，即一定的吸光度范圍同內，由分光光度計測量所引起的測定結果的相對誤差才是較小的；當透光率接近0或1.0時，其相對誤差趨于無限大；一般在百分透光率在10~80%的范圍內(即吸光度在1~0.1)，濃度測量相對誤差較??；對于精密度高的儀器。當吸度A=0.7-0.2時，百分透光率約為20-60%，測量誤差約為1%。減少分光光度計的測量誤差的條件有

選擇適宜波長的入射光：由于有色物質對光有選擇性吸收，為了使測定結果有較高的靈敏度，必須選擇溶液最大吸收波長的入射光。

控制吸光度A的準確的讀數(shù)范圍：由朗伯-比耳定律可知，吸光度只有控制在0.2~0.7讀數(shù)范圍內時，測量的準確度較高。

選擇參比溶液：參比溶液是用來調節(jié)儀器工作零點的。若樣品溶液，試劑，顯色劑無無色可用蒸餾水作參比溶液；反之應采用不加顯色劑的樣品液作參比溶液2.顯色反應及其影響因素顯色反應一般要求

(1)選擇性好:顯色劑最好只與一種被測組分起顯色反應;

(2)靈敏度高:靈敏度高有助微量組分的測定;

(3)有色化合物性質穩(wěn)定:確保前后測定準確.

(4)顯色劑與有色物顏色反差大:兩者最大吸收波長之差應大于60nm;

(5)顯色反應要易于控制:結果的確保實驗再現(xiàn)性.影響顯色反應的主要因素

(1)顯色劑用量:通過實驗來確定最適用量;

(2)反應液的酸堿度(pH)溶液酸堿度直接影響金屬離子與顯色劑存在形式以及有色化合物組成的穩(wěn)定性.

(3)反應溫度:不同的顯色反應需要不同的反應溫度,一般顯色反應可在室溫下完成.

(4)顯色反應時間:顯色反應的速度有快有慢.

(5)干擾離子的影響:應采用適當方法消除其影響3.722型分光光度計使用操作和注意事項注意事項：①.每臺儀器所配套的比色皿不能與其它儀器上的比色皿單個調換。②.如果大幅度改變測試波長時，需等數(shù)分鐘后才能正常工作。（因波長由長波向短波或短波向長波移動時，光能量變化急劇，光電管受光后響應較慢，需一段光響應平衡時間。③.如果顯示數(shù)值有異常很可能為鎢燈已壞，請盡早更換。4.用于免疫測定，基本原理是：抗原抗體在特殊緩沖液中快速形成抗原抗體復合物，使反應液出現(xiàn)濁度。當反應液中保持抗體過量時，形成的復合物隨抗原量增加而增加，反應液的濁度亦隨之增加，與一系列的標準品對照，即可計算出受檢物的含量。免疫濁度測定法按照儀器設計的不同可以分為兩種，即比濁儀測定（turbidimetermeasure）和散射比濁儀測定（nephelomitermeasure）。比濁儀測定是測量由于反射、吸收或散射引起的入射光衰減，其讀數(shù)以吸光度A表示。A什反映了入射光與透射光的比率（A＝2－log10T，T代表濁度百分比）。散射比濁儀測定是測量入射光遇到質點（復合物）后呈一定角度散射的光量，該散射光經(jīng)放大后以散射值表示。標本采集后應立即送驗，如要等待測定，應將標本置于0到4度冰箱內保存不得超過1小時，以免影響檢驗結果。其他特殊標本的采集需?？漆t(yī)生操作臨床診斷，問題或特殊檢驗注意事項；雙向針一端插入真空試管內，另一端在持針器的幫助下刺入靜脈，血液在負壓作用下自動流入試管內。申請單是實驗檢查的第一步。影響顯色反應的主要因素

(1)顯色劑用量:通過實驗來確定最適用量;

(2)反應液的酸堿度(pH)溶液酸堿度直接影響金屬離子與顯色劑存在形式以及有色化合物組成的穩(wěn)定性.密封良好的環(huán)口、薄壁和嘴口尖細；反應溫度37℃，可選擇波長13種，340～800nm。一般情況下，樣品體積占反應總體積的10％。RATE法對于一種物質的測定，由于選擇試劑和分析方法不同，其測定時間也隨之變化，因而對于特定的試劑和分析方法，應先做出反應進程曲線，從曲線上選擇最佳的測定時間。尿液檢驗最好留取新鮮標本及時檢查，否則尿液生長細菌，使尿液中的化學成分發(fā)生變化。換個吸頭重新吸取樣本。2)系統(tǒng)使用四種規(guī)格的試劑瓶：5)實驗室整潔，空間足夠，室內無化學腐蝕性試劑，無煙霧和水蒸氣1)環(huán)境溫度：18℃～32℃，工作中波動小于4±2℃、熱量11000KJ／U、濕度：40—80％RH，并無冷凝；RATE法對于一種物質的測定，由于選擇試劑和分析方法不同，其測定時間也隨之變化，因而對于特定的試劑和分析方法，應先做出反應進程曲線，從曲線上選擇最佳的測定時間。比濁儀測定是測量由于反射、吸收或散射引起的入射光衰減，其讀數(shù)以吸光度A表示?？乖贵w結合反應在幾十秒內得出結果，峰值的高低與抗原的量成正比，峰值出現(xiàn)的時間和抗體濃度、抗原抗體的親和力直接相關。嚴禁標本直接用口吸取、接觸皮膚或污染器皿的外部和實驗臺。用吸紙抹去吸嘴外面可能黏附的液滴。肝素抗凝血常用于血氣分析和部分生化項目的測定，使用1.草酸鉀可與血中鈣離子生成草酸鈣沉淀，從而阻止血液凝固。測定方法有終點法和速率法兩種。終點法是在抗原-抗體反應達到平衡時，即復合物形成后作用一定時間，通常是30-60min，復合物濁度不再受時間的影響，但又必須在聚合產(chǎn)生絮狀沉淀之前進行濁度測定。速率法是在抗原抗體結合反應的過程中，在單位時間內兩者結合的速度。速率法是測最大反應的速度，即反應達到頂峰時的峰值。抗原抗體結合反應在幾十秒內得出結果，峰值的高低與抗原的量成正比，峰值出現(xiàn)的時間和抗體濃度、抗原抗體的親和力直接相關。速率法的靈敏度和特異性都比終點法好。免疫透射濁度法，其反應曲線不規(guī)則，試驗前進行五點定標，按曲線回歸計算。全自動生化分析儀一、良好工作環(huán)境文章1)環(huán)境溫度：18℃～32℃，工作中波動小于4±2℃、熱量11000KJ／U、濕度：40—80％RH，并無冷凝；若室溫不穩(wěn)定，應安裝空調，安裝在通風好，分析儀不應暴露在流動空氣中。2)避免陽光直射、遠離高頻電磁波等。3)給水及排水：分析儀使用去離子水，去離子水器安裝在距水龍頭10M內，去離子水電阻率大于0.5Mn，用0.5ram的過濾網(wǎng)過濾細菌，去離子水及排水孔安裝在儀器10M內，廢液管連到醫(yī)院的傳染病處理裝置處。4)接有效的穩(wěn)壓、不間斷電源(UPS)，以防停電造成分析儀損壞或數(shù)據(jù)丟失，有保護性接地線，以防電擊和分析儀故障發(fā)生。5)實驗室整潔，空間足夠，室內無化學腐蝕性試劑，無煙霧和水蒸氣二、技術性能評價1)基本性能：測試速度3200～5000測試／小時，ISE900測試／小時；反應溫度37℃，可選擇波長13種，340～800nm。2)樣品系統(tǒng)：試劑位192個，樣品位300個，全反應過程監(jiān)測，前后自動稀釋，最小樣本量1.6ul．最小試劑量120ul。3)分析系統(tǒng)：反應杯為特殊硬質玻璃，反應時間8分20秒，反應總量150～550ul，自動記錄質控，自動沖洗，耗水量平均125升／小時。生化試劑選擇和特點1)試劑有國家標準的生產(chǎn)、銷售經(jīng)營許可證，使用方法符合中華醫(yī)學會檢驗分會或美國FDA推薦方法，試劑配方是中華醫(yī)學檢驗學會或國際上推薦的配方。2)系統(tǒng)使用四種規(guī)格的試劑瓶：

120ml試劑瓶、60ml試劑瓶、30ml試劑瓶、15ml試劑瓶，當使用15ml或30ml試劑瓶時，必須使用相應的擋板固定試劑瓶；當使用120ml試劑瓶時，取出試劑瓶之間的擋板，在試劑冰箱內設置120ml試劑瓶時要求兩個60ml試劑瓶的寬度。參數(shù)設置1)SamlevolumeandDilution(樣品量和沖洗量)，樣品分配量范圍1.6～25ul或稀釋量1.6～20ul，沖洗分配量0或10ul：ReagentR1volandDilution(第1試劑量和稀釋量)試劑范圍15～250ul或稀釋水量0或235ul；ReagentR2v0landDilution(第2試劑量和稀釋量)試劑范圍15—250ul或稀釋水量0或235ul。若R2為0，此項不能設置。一般按商品試劑說明書上的推薦量，結合分析儀中規(guī)定的樣品和試劑的最小加樣量、加樣范圍和最小反應總體積按比例進行縮減。足夠精密度的情況下．盡可能減少樣品的用量．以減少樣品中的成分對測定的影響。一般情況下，樣品體積占反應總體積的10％。

2)WavelengthPri(主波長)Sec(副波長)。實際應用中選擇輔助波長主要用于消除脂血、溶血、黃疸的干擾。通常選最大吸收峰為主波長，雙波長的設定．最好向該試劑廠家索取最為安全，因為不同的雙波長測定抗干擾不同。3)Method(方法學)可設置END終點法、RATE速率法、FIXED兩點法、END1、RATE1、FIXED1，前三種是以試劑為空白，后三種是以比色杯為空白的；END終點分析法檢測的是反應達到平衡時的吸光度值：RATE速率法適用于呈零極反應的酶催化活性濃度的測定，其基本原理是：基于恒定期(零級反應期)酶促反應速率和酶催化活性濃度呈正比；FIXED固定時間法：是動態(tài)反應期的吸光度變化累加各讀點問隔吸光度差值，取吸光度差值的累加值計算結果。4)Reaction(反應方向)：+、-，END與FIXED法不起作用，但RATE法一定要輸入正確。5)PointlFstLst(測量l，輸入光電檢測起始點和結束點)和Point2FstLst(測量2，輸入光電檢測起始點和結束點)，Pointl為主測定，Point2為輔助測定終點分析法：測定時間的選擇應允分考慮到干擾的問題，讀點提前、反應達不到平衡、讀點緩后、非檢測物質反應、干擾物質生成、影響測定值，如：溴甲酚綠法檢測白蛋白，BCG試劑在PH4.2時，不但能與白蛋白起反應，而且還與血清中多種球蛋白起反應，但白蛋白與BCG的反應是在60秒以內完成的，而其他球蛋白與之反應要在30分鐘后才能完成，因此，為使測定結果趨于準確，讀數(shù)不應超過10分鐘測定RATE法對于一種物質的測定，由于選擇試劑和分析方法不同，其測定時間也隨之變化，因而對于特定的試劑和分析方法，應先做出反應進程曲線，從曲線上選擇最佳的測定時間。6)Linearity(線性范圍)不同試劑公司的試劑質量不同，基測定的線性范圍也不同。對于酶活性來說，可取一高值樣品作倍比稀釋，按分析項目的波長、樣品量與試劑量、孵育時間測定各管活性濃度，以活性濃度對稀釋度作圖，在測定線性內的最高濃度為測定線性上限，最低濃度為測定線性下限。對于帶標準的其他生化項目的測定，可配置系列濃度的標準液，測定各濃度的吸光度變化繪制標準曲線，同樣可以求得測定線性。做好室內質控：在每天的操作中，質控樣品的測定數(shù)據(jù)被貯存下來，進行質控數(shù)據(jù)的變異檢查。1)進行質控分析申請操作2)在系統(tǒng)內放置設有質控樣品的綠色樣品架。3)進行了質控分析申請后．開始分析，分析操作開始。4)分析綠色樣品架后，檢查質控數(shù)據(jù)有無錯誤。常規(guī)性維護：1、每日維護1)檢查樣本和試劑分配器是否有滲漏；2)目視檢查洗劑原液DetergentB桶內液面是否足夠；3)檢查／清洗樣本針、試劑針和攪拌棒；4)檢查ISE試劑分配器是否滲漏，自動沖樣品池和電極通路；2、每周維護1)手工清洗樣本針、試劑針和攪拌棒；2)進行W2(自動沖洗比色杯、攪拌棒、試劑探針與廢液管路)，每周交替使用酸性或堿性洗液作W2(酸性洗液濃度為lmmol／L的鹽酸，堿性洗液有效濃度為5％的次氯酸鈉；3)進行Photoca1(光電校正)，平均值：Men．CheckRange：0.030，吸光度差值：Abs．Checkrange：0.1，常見杯錯誤有：擦傷檢查錯誤(綠色)；數(shù)據(jù)分散檢查錯誤(紅色)：數(shù)據(jù)比較檢查錯誤(蘭色)4)清洗樣品預稀釋瓶；5)檢查ISE電極選擇性。3、每月維護1)清洗樣本探針、試劑探針和攪拌棒沖洗池；2)清洗空氣過濾網(wǎng)；3)清洗去離子水和樣品針過濾片；4)每兩個月ISE電極維護，如果電極已經(jīng)失效，不會得到恰當?shù)姆治鼋Y果；每兩個月或每20000個測試量要更換一次最先壞的電極。4、每三個月維護1)清洗沖洗管嘴；2)清洗離子水桶；。3)更換水機棉芯、活性碳；4)ISE每三個月維護更換混合物和廢液滾動泵管；5、每六個月維護1)更換光源燈泡；光電數(shù)據(jù)任意波長100％的吸光度超過1.7354或低于0.01時應更換光源燈泡：出現(xiàn)“l(fā)ampdark”或者項目出現(xiàn)大量“報警標志“，反應曲線呈波浪樣改變并排除沖洗頭堵塞時應更換光源燈泡，更換光源燈泡后，一定要進行光電校正(Photoea1)。2)清洗比色杯與比色杯輪盤；清洗比色杯與比色杯輪盤后，一定要進行光電校正6、非經(jīng)常性維護1)檢查比色杯、樣品針與試劑針、攪拌棒、沖洗頭管、樣品和試劑分配器、清洗液蠕動泵、離子水過濾器、樣品針過濾器，如果有出現(xiàn)故障及時更換。2)ISE非常規(guī)性維護，必要時應更換參比電極；添加參比液；更換相應試劑。常見的報警信息及處理方法分析1.分析儀故障原因：異常關機，啟動UPS儲備電源，電力檢測失敗。分析儀故障處理：開主機電源EM／STOP(黃色鍵)，再按復位開關RESET(~色鍵)，再分電電源POWER-ON(綠色鍵)，直到光電校正燈穩(wěn)定才能開始分析，大約20分鐘。2.分析儀故障原因：試劑冰箱蓋未完全關閉或試劑盤未被固定釘子定位。分析儀故障處理：水平放置試劑盤．對準固定銷，按下固定釘，關閉蓋子，重新檢測試劑選擇參比溶液：參比溶液是用來調節(jié)儀器工作零點的。血清中葡萄糖可因紅細胞內糖酵解酶的分解作用而降低4)分析綠色樣品架后，檢查質控數(shù)據(jù)有無錯誤。3)清洗去離子水和樣品針過濾片；一、常規(guī)標本的采集、處理3)給水及排水：分析儀使用去離子水，去離子水器安裝在距水龍頭10M內，去離子水電阻率大于0.雙向針一端插入真空試管內，另一端在持針器的幫助下刺入靜脈，血液在負壓作用下自動流入試管內。病人的姓名，性別，出生日期；RATE法對于一種物質的測定，由于選擇試劑和分析方法不同，其測定時間也隨之變化，因而對于特定的試劑和分析方法，應先做出反應進程曲線，從曲線上選擇最佳的測定時間。藥物困難在體外影響分析方法或在體內引去病理變化，因此，要特別注意在申請單上提供類信息.0g/cm3的液體或聚合酶鏈反應(PCR)。3)更換水機棉芯、活性碳；標本用后均要做消毒處理，盛標本的器皿要消毒處理或毀型、焚燒。因此采血的注射器使用前應檢查有無漏氣，針頭必須連接緊密，標本采集后立即封閉針頭斜面。若不能及時檢驗（如收集

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小時尿液），將標本置冰箱保存，若加入防腐劑，保存效果更佳。0g／L的肝素溶液0.適用于具有高揮發(fā)性、高粘稠度以及密度大于2.反之應采用不加顯色劑的樣品液作參比溶液A什反映了入射光與透射光的比率（A＝2－log10T，T代表濁度百分比）。顯色反應一般要求

(1)選擇性好:顯色劑最好只與一種被測組分起顯色反應;

(2)靈敏度高:靈敏度高有助微量組分的測定;

(3)有色化合物性質穩(wěn)定:確保前后測定準確.2時，不但能與白蛋白起反應，而且還與血清中多種球蛋白起反應，但白蛋白與BCG的反應是在60秒以內完成的，而其他球蛋白與之反應要在30分鐘后才能完成，因此，為使測定結果趨于準確，讀數(shù)不應超過10分鐘測定3.分析儀故障原因：試劑被放錯位置。分析儀故障處理：設置合適的試劑瓶。4.分析儀故障原因：試劑少了／試劑空了。分析儀故障處理：認真檢查，補足試劑用量。5.分析儀故障原因：去離子水少了／去離子水空了，純水輸出管道堵塞或者純水機故障。分析儀故障處理：檢查純水機或輸出管道工作狀態(tài)是否正常，必要時找醫(yī)院維修組。6.分析儀故障原因：樣品探針被堵塞．樣品包含有較多的纖維和蛋白。分析儀故障處理：棄去纖維或做必要的處理和過濾，檢查是否有其他物質混入，用鋼絲插入樣品探針除去阻塞。微量加樣器的使用、維護和校準

1基本原理、分類及適用范圍1.1空氣墊加樣器活塞沖程（空氣墊）加樣器中的空氣墊的作用是將吸于塑料吸頭內的液體樣本與活塞分隔開，空氣墊通過加樣器活塞的彈簧樣運動而移動，進而帶動吸頭中的樣本移動。加樣體積一般在1μl至10ml之間。適合于血清、血漿等普通樣本的加樣，在臨床上最常使用。1.2活塞正移動加樣器活塞正移動加樣器的吸頭與空氣墊加樣器吸頭有所不同，其內含一個可與加樣器耦合的活塞，這種吸頭一般由生產(chǎn)廠家配套生產(chǎn)，不能使用普通的吸頭或不同廠家的吸頭。適用于具有高揮發(fā)性、高粘稠度以及密度大于2.0g/cm3的液體或聚合酶鏈反應(PCR)。2影響微量加樣器準確的幾種常見因素及對策2.1影響微量加樣器的物理因素流體靜壓加樣時，加樣器吸頭只能以垂直方式浸入2-3mm，因為傾斜的方式將減少液體柱的高度，導致吸取液體過多。吸頭潤濕當吸頭排空時，仍會有一些殘留的液體以

薄膜的形式吸附在吸頭里面，所以，在加樣時先吸打液體數(shù)次，充分潤濕吸頭管腔,以保證加樣的一致性。流體動力學為確保樣本的穩(wěn)定釋放，加樣器吸頭應靠在試管壁上，液體順著管壁流出，避免出現(xiàn)液滴，液滴的形成可由于其表面張力的作用而阻止樣本的釋放。2.2加樣器本身的質量因素微量加樣器的失準率與加樣器的使用次數(shù)成正相關關系；同標值的可調加樣器的失準率比同標值的定值加樣器失準率大。標值容量小的失準率較容量大的失準率大。所以，有必要根據(jù)工作實際選用合適的加樣器，并需要定期校準。2.3吸頭的質量因素加樣器吸頭是整個移液系統(tǒng)的有機組成部分，對其基本要求是：必須有高機械、熱力學和化學穩(wěn)定性好；純度高；密封良好的環(huán)口、薄壁和嘴口尖細；管壁有彈性；嘴口無毛刺，表面光潔平滑；應與加樣器上吸頭套筒密封完好。3微量加樣器的正確使用方法3.1選擇一支量程合適的加樣器加樣器只能在特定量程范圍內準確移取液體,如超出最低或最大量程,會損壞加樣器并導致計量不準。3.2設定容量值有些加樣器通過旋轉按鈕設置容量，有些則通過刻度顯示。3.3選擇合適的吸頭裝在加樣器套筒上，稍加扭轉壓緊，使吸頭套緊。否則，移取的液體將少于設定的體積，或者液體會往下滴。3.4預洗吸頭當裝上一個新吸頭時（或改變吸取的容量值）應預洗吸頭，先輕輕吸打幾次液樣,可消除產(chǎn)生吸液誤差。3.5吸液手握移液器，大拇指按下按鈕至第一停點，將加樣器垂直浸入液面2-3mm，然后緩慢平穩(wěn)地松開拇指，慢慢吸入液體。停留1s，然后將吸頭提離液面。用吸紙抹去吸嘴外面可能黏附的液滴。小心勿觸及吸頭口。3.6目測吸入的液體體積是否合理。3.7放液將吸頭口貼到容器內壁并保持10°-40°傾斜，平穩(wěn)地把按鈕壓到第一停點，停1-2s后，繼續(xù)按壓到第二停點，排出殘余液體。松開按鈕，同時提起加樣器。3.8按吸頭彈射器除去吸頭（改用不同樣本液體時必須更換吸頭）。4加樣器的維護4.1套筒螺帽松動用手擰緊螺帽。4.2活塞或密封圈受化學腐蝕更換活塞和密封圈。用蒸餾水洗滌套筒內壁。4.3發(fā)現(xiàn)套筒內有液體，可依下法清潔：卸下彈射器，擰下螺帽并用蒸餾水洗滌套筒、活塞、密封圈及O型環(huán)，干燥后重新組裝。

4.4發(fā)現(xiàn)吸液時有氣泡將液體排回原容器；檢查吸頭浸入液體是否太深；換個吸頭重新吸取樣本。5微量加樣器的校準常用的方法有高鐵氰化鉀法、雙蒸水稱重法、水銀稱重法等，但此三種方法都存在缺陷。在實踐中，我們一般常用光電比色法進行校準。具體方法是：取三只試管分別加入蒸餾水