磷酸甘油氧化酶法測定血清甘油三酯

實驗四磷酸甘油氧化酶法測定血清甘油三酯臨床生物化學實驗室一、實驗目的掌握：磷酸甘油氧化酶法測定血清甘油三酯的基本原理。熟悉：磷酸甘油氧化酶法測定血清甘油三酯的基本操作。了解：血清甘油三酯測定對于家族性脂類代謝紊亂等疾病診斷的臨床意義。二、實驗原理

血清中甘油三酯(TG)經(jīng)脂蛋白酶(LPL)作用，可水解為甘油和游離脂肪酸，甘油在ATP和甘油激酶的作用下生成3-磷酸甘油，再經(jīng)磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羥丙酮和H2O2，H2O2與4-APP和ESPAS在過氧化物酶作用下，生成紅色醌類化合物，其顯色程度與TG的濃度成正比。甘油三酯過氧化物酶PODATPADPLPL甘油+酯肪酸甘油激酶GK3-磷酸甘油磷酸甘油氧化酶GPO磷酸二羥丙酮+H2O24-氨基安替比林（4-AAP）對氯酚/ESPAS醌亞胺染料三、試劑1.酶試劑：GOOD′s緩沖液（pH7.2）

≥30mmol/L甘油激酶脂蛋白酯酶甘油磷酸氧化酶過氧化物酶ATP4-AAPESPAS穩(wěn)定劑2.

標準液：甘油三酯≥

1KU/L≥

3KU/L≥

2KU/L≥

2KU/L≥

0.5mmol/L≥

0.3mmol/L≥0.2mmol/L適量2.26

mmol/L混勻，37℃水浴5min后，在波長546nm處用

"B"管調(diào)零，測定各管吸光度值。加入物空白管標準管測定管（μL）（B）SU1U2血清——1515DDW15———標準液—15——工作液1500150015001500四、實驗操作五、結(jié)果計算TG(mmol/L)＝āU/āS×Cs（2.26

mmol/L）參考范圍：血清TG:0.565－1.695

mmol/L六、注意事項1.

本法使用的酶試劑在4℃避光保存，至少可穩(wěn)定

3-7天，出現(xiàn)紅色時不可再用，試劑空白的吸光度應≤0.05。2.

血清要及時測定，4℃存放不超過3天，避免TG水解釋放出甘油。3.

本法線性上限為11.3mmol/L，若所測TG超過了11.0mmol/L,

則可用生理鹽水稀釋后再測。七、方法學評價

本法是一步終止法，簡便、快速、微量且試劑較穩(wěn)定等優(yōu)點，適用于手工和自動化測定。不足：所測TG值包括了血清中游離的甘油。于4h內(nèi)立即檢測，若放置過久會使結(jié)果偏高。3.為了除去游離甘油的干擾，常用下面兩種方法：外空白法:使用不含LPL的酶試劑測定FG作空白值，但此法需要雙份測定，成本加倍。內(nèi)空白法：將酶試劑分成2部分：LPL和4-AAP組成試劑II，其余試劑為試劑I。血清先加試劑I，37℃溫育后，因無LPL存在，TG不被水解，F(xiàn)G在GK和GPO的作用下反應生成H2O2，但因不含4-AAP，不能完成顯色反應，故可除去FG的干擾；再加試劑II，即可測出TG水解生成的甘油。該法增加了操作步驟，但不增加成本。八、臨床意義TG

增高常見于動脈粥樣硬化、原發(fā)性高脂血癥(如家族性高膽固醇血癥、家族性ApoB缺陷癥、多源性高膽固醇血癥、混合性高脂蛋白血癥等)、糖尿病、腎病綜合征、總膽管阻塞、甲狀腺功能減退、肥大性骨關(guān)節(jié)炎、老年性白內(nèi)障和牛皮癬。TG