優(yōu)選中藥淫羊藿總黃酮含量測(cè)定方法

優(yōu)選中藥淫羊藿總黃酮含量測(cè)定方法優(yōu)選中藥淫羊藿總黃酮含量測(cè)定方法

：陳永剛劉曉涵林勵(lì)區(qū)計(jì)明肖鳳霞羅穗紅

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優(yōu)選中藥淫羊藿總黃酮含量測(cè)定方法

上述方法測(cè)定其含量，結(jié)果其含量的均值為25.32g/kg，sR為0.25%，表明該方法的重復(fù)性較好。

2.1.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別在0、15、30、45、60min測(cè)定其汲取度，結(jié)果其吸光度均值為0.1328，sR為0.36%，說(shuō)明供試品溶液在60min內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.1.7加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已測(cè)含量的淫羊藿藥材(批號(hào)：080731，含量27.18g/kg)，加入淫羊藿苷進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果其平均回收率為

101.01%，sR為3.17%，結(jié)果見(jiàn)表1。表1加樣回收率試驗(yàn)(藥典法)

2.1.8總黃酮測(cè)定分別取供試品溶液和對(duì)比品溶液，以甲醇為空白，采納紫外可見(jiàn)分光光度法，在270nm波特長(zhǎng)測(cè)定吸光度，計(jì)算，結(jié)果3批藥材中總黃酮含量均值為27.21g/kg。結(jié)果見(jiàn)表4。

2.2檢驗(yàn)一法測(cè)定淫羊藿中總黃酮含量

2.2.1蘆丁對(duì)比品溶液的制備精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒質(zhì)量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100mL，配成0.15mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2.2樣品溶液的制備取本品葉片粉末(過(guò)3號(hào)篩)1.0g，加入80mL體積分?jǐn)?shù)70%乙醇溶液，按文獻(xiàn)方法制備供試品溶液，備用。

2.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL,相當(dāng)于蘆丁0、75、150、300、450、600μg,移入10mL刻度比色管中，加入體積分?jǐn)?shù)30%乙醇液至5mL，各加50g/L的亞硝酸鈉溶液0.3mL,振搖后放置5min,加入100g/L的硝酸鋁溶液0.3mL搖勻后放置6min，加1.0mol/L氫氧化鈉溶液2mL,用體積分?jǐn)?shù)30%乙醇定容至刻度，以零管為空白，在510nm處測(cè)定吸光度，以對(duì)比品溶液中蘆丁的量為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得直線回歸方程為Y=1.136X+0.0106(r=0.9991，線性范圍0.0782～0.6256mg)。

2.2.4精密度試驗(yàn)取對(duì)比品溶液(0.03128mg/mL)，連續(xù)測(cè)定5次，結(jié)果其汲取度的均值為0.3705，sR為0.11%，表明精密度良好。

2.2.5重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一供試品1.0g，平行5份，按上述方法測(cè)定其含量，結(jié)果其含量均值為9.722g/kg，sR為0.25%，表明該方法的重復(fù)性較好。

2.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別在0、15、30min測(cè)定其汲取度，結(jié)果其吸光度均值為0.6766，sR為0.50%，說(shuō)明供試品溶液在30min內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已測(cè)含量的淫羊藿藥材(批號(hào):080731，含量9.742g/kg)，加入蘆丁進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果其平均回收率為100.95%，sR為4.17%，結(jié)果見(jiàn)表2。表2加樣回收率試驗(yàn)(檢驗(yàn)一法)

2.2.8總黃酮測(cè)定取"2.2.2"項(xiàng)下樣品溶液3mL，至10mL容量瓶中，按"2.2.3"項(xiàng)下方法自"各加50g/L亞硝酸鈉溶液0.3mL,"起，依法測(cè)定吸光度，代入回歸方程，計(jì)算含量，結(jié)果3批藥材總黃酮含量均值為9.22g/kg。結(jié)果見(jiàn)表4。

2.3檢驗(yàn)二法測(cè)定淫羊藿中總黃酮含量

2.3.1蘆丁對(duì)比品溶液的制備精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒質(zhì)量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5.0mg，加甲醇溶解并定容至100mL，即得0.050mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3.2樣品溶液的制備取藥材1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積分?jǐn)?shù)95%乙醇25mL，根據(jù)文獻(xiàn)方法制備供試品溶液，備用。

2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于10mL比色管中，加甲醇至刻度，搖勻，于波長(zhǎng)360nm處比色。以對(duì)比品溶液濃度為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得直線回歸方程為Y=0.0273X-0.0102;r=0.9990。線性范圍為0.00495～0.02475mg/mL。

2.3.4精密度試驗(yàn)取蘆丁對(duì)比品溶液(0.0198mg/mL)，連續(xù)測(cè)定5次，結(jié)果其吸光度均值為0.5440，sR為0.04%，表明精密度良好。

2.3.5重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取供試品1.0g，平行5份，制備供試品溶液，于波長(zhǎng)360nm處測(cè)定其吸光值，結(jié)果其含量均值為7.796g/kg，sR為0.53

優(yōu)選中藥淫羊藿總黃酮含量測(cè)定方法

%，表明重現(xiàn)性較好。

2.3.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別在0、15、30、45、60min時(shí)測(cè)定其汲取度，結(jié)果其吸光度均值為0.3318，sR為0.19%，說(shuō)明供試品溶液在60min內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.3.7加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已測(cè)含量的淫羊藿藥材(批號(hào):080731，含量7.742g/kg)，加入蘆丁進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果其平均回收率為102.63%，sR為5.24%，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.3.8總黃酮含量測(cè)定分別取3批淫羊藿樣品1.0g，精密稱定，按"2.3.2"項(xiàng)下制備供試品溶液，于波長(zhǎng)360nm處測(cè)定汲取值。代入回歸方程，計(jì)算試樣中總黃酮含量。結(jié)果3批樣品的平均含量為8.21g/kg,結(jié)果見(jiàn)表4。表3加樣回收率試驗(yàn)(檢驗(yàn)二法)表43種方法測(cè)定淫羊藿樣品中總黃酮含量比較

3爭(zhēng)論

3.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇對(duì)"藥典法"測(cè)定波長(zhǎng)的選擇，采納淫羊藿苷的甲醇溶液在波長(zhǎng)200～800nm之間進(jìn)行掃描，結(jié)果在270nm有最大汲取。同法確定了"檢驗(yàn)一法"測(cè)定波長(zhǎng)在510nm有最大汲取;"檢驗(yàn)二法"測(cè)定波長(zhǎng)在360nm有最大汲取，均與文獻(xiàn)報(bào)道測(cè)定波長(zhǎng)全都。

3.2"檢驗(yàn)一法"和"檢驗(yàn)二法"樣品溶液的制備均采納聚酰胺柱層析純化總黃酮類化合物，主要由于黃酮類化合物大多具有酚羥基，可被聚酰胺吸附，而與不含酚羥基的成分分別，也能排解葉綠素的干擾。因此，是否加顯色劑對(duì)其含量測(cè)定無(wú)顯著影響，兩法測(cè)定結(jié)果較接近。

3.3測(cè)定方法的選擇測(cè)定結(jié)果顯示"藥典法"測(cè)得值顯著大于"檢驗(yàn)一法"和"檢驗(yàn)二法"測(cè)

得值。主要由于"藥典法"測(cè)定時(shí)無(wú)需顯色，在270nm有汲取的化合物均可被測(cè)定,故結(jié)果偏大。"檢驗(yàn)一法"測(cè)定須經(jīng)過(guò)NaNO2Al(NO3)3NaOH顯色，只有具有鄰二酚羥基的黃酮類化合物才能被檢測(cè)出