食源性疾病藥敏試驗

食源性疾病藥敏試驗第1頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月抗生素的選擇選擇依據(jù)臨床與實驗室標準化協(xié)會（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,CLSI）推薦的藥敏試驗抗生素選擇原則確定耐藥監(jiān)測的抗生素名單。革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的抗生素種類不同第2頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月革蘭氏陰性菌抗生素的選擇致病菌序號抗生素名稱沙門大腸（5種）副溶志賀氏菌中文英文縮寫1頭孢西丁CefoxitinCFX2頭孢噻肟CefotaximeCTX3四環(huán)素TetracyclineTET4慶大霉素GentamicinGEN5氯霉素ChloramphenicolCHL6環(huán)丙沙星CiprofloxacinCIP7萘啶酸NalidixicacidNAL8甲氧芐啶/磺胺甲惡唑Trimethoprim/SulfamethoxazoleTMP/SMZ第3頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月革蘭氏陽性菌抗生素的選擇致病菌序號抗生素名稱中文英文縮寫1苯唑西林OxacillinOXA2萬古霉素VancomycinVAN3四環(huán)素TetracyclineTET4紅霉素ErythromyciERY5氯霉素ChloramphenicolCHL6克林霉素ClindamycinCLI7環(huán)丙沙星CiprofloxacinCIP8甲氧芐啶/磺胺甲惡唑Trimethoprim/SulfamethoxazoleTMP/SMZ第4頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月抗生素的選擇表中推薦的抗生素為必做項目監(jiān)測手冊建議各省結(jié)合實際情況增加抗生素種類本實驗室僅選擇了以上表中的抗生素，革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌各8種。第5頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測方法CLSI推薦的體外抗生素敏感性試驗方法1.稀釋法（瓊脂稀釋法或肉湯稀釋法）瓊脂稀釋法常量肉湯稀釋法

微量肉湯稀釋法2.擴散法（diskdiffusion,K-B）第6頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測方法食源性致病菌監(jiān)測和食源性疾病監(jiān)測的要求：通過方法的統(tǒng)一標準化得到具有可比性的結(jié)果手冊中要求采用微量肉湯稀釋法定量測定最低抑菌濃度（MIC）第7頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測方法-微量肉湯稀釋法實驗室購置抗生素標準品，配置儲存液，制備96孔藥敏板（操作復(fù)雜，不同抗生素儲存液的保存條件和時限不同，手工稀釋可靠性重復(fù)性相對較差）全自動藥敏試驗菌液接種判讀儀（商品化藥敏板，操作簡單，結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，一次可處理大量樣本，需購置儀器）商品化的96孔藥敏板（商品化藥敏板，操作簡單，無需配置抗生素儲存液）第8頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測方法-微量肉湯稀釋法質(zhì)控菌株的選擇革蘭氏陰性菌-ATCC25922革蘭氏陽性菌（金葡菌）-ATCC29213第9頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗流程-菌株活化前提：分純的菌落1.待測菌株和質(zhì)控菌株接種BHI肉湯，37℃過（18-24小時）培養(yǎng)。（第1天）2.從過夜培養(yǎng)的BHI肉湯管中挑取菌液，劃線接種BHA平板，37℃過夜培養(yǎng)。（第2天）3.從過夜培養(yǎng)的BHA平板上挑取單個菌落，再次劃線接種BHA平板，37℃過夜培養(yǎng)。（第3天）注意：副溶血性弧菌的BHI和BHA需要含有3%的NaCl第10頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗流程-制備菌懸液無菌棉簽挑取上述經(jīng)2次活化的菌落（待測及質(zhì)控）≥3個，用2mL無菌生理鹽水充分混勻（管壁充分研磨）調(diào)整菌懸液濃度為0.5麥氏單位（梅里埃的濁度計）吸取100μL菌懸液于10mLCAMHB肉湯中混勻，15min內(nèi)使用，超過15min重新配置注意：1.研磨不開的菌落通過渦旋震蕩處理2.至少挑取3個菌落制備菌懸液，防止耐藥質(zhì)粒的丟失

第11頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗流程-菌液接種藥敏板將與CAMHB肉湯混勻好的菌液接種到藥敏板中不同品牌的商品化藥敏板的加樣量不同，按照提供的操作說明進行操作注意：1.加樣需使用帶無菌濾芯的吸頭2.吸頭不要接觸孔內(nèi)的凍干藥粉，避免藥物的相互作用3.加樣過程盡量快，30-60秒接種完畢，保持菌液的均勻性4.從低濃度至高濃度一次加入，減少藥物的相互作用，避免藥物濃度受影響第12頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗流程-培養(yǎng)溫度：36±1℃時間：18±2h培養(yǎng)箱中放置水槽（盛水的燒杯），保持培養(yǎng)箱中的濕度，防止加樣孔中的水分蒸發(fā)。一旦蒸發(fā)無法判讀結(jié)果。藥敏板盡量不要疊放，如果培養(yǎng)箱空間不夠需要疊放，藥敏板疊放不要超過4個第13頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗流程-結(jié)果判讀黑背景自然光線下肉眼觀察1.細菌生長的小孔：彌散狀渾濁或小孔底部有圓形或網(wǎng)狀沉淀2.無細菌生長的小孔：清澈透明無細菌生長的孔內(nèi)所含最低抗菌藥物濃度即為MIC第14頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗流程-結(jié)果判讀注意事項同時滿足生長孔細菌明顯生長，空白對照孔無細菌生長，質(zhì)控菌株的MIC值在規(guī)定的質(zhì)控范圍內(nèi)，結(jié)果可接受，否則重新試驗TMP/SMZ：以細菌生長數(shù)量較生長對照孔有80%或80%以上的減少為結(jié)果終點MIC跳孔：出現(xiàn)單一跳孔，記錄抑菌生長的最高藥物濃度；出現(xiàn)多次跳孔，重復(fù)試驗商品化藥敏板使用前要觀察孔中的抗生素粉末是否有灑落，如果灑落不得使用。商品化藥敏板儲存在-20℃冰箱中，平放，標簽在上第15頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗流程-結(jié)果判讀注意事項向藥敏板生產(chǎn)方索要抗生素濃度表和質(zhì)控表結(jié)果記錄：敏感（S）中介（I）耐藥（R）第16頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月商品化藥敏板天津金章（我們使用過的產(chǎn)品）Thermo第17頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月