生物技術(shù)制藥

年生物技術(shù)制藥名詞解釋（10個）1.生物技術(shù)藥物（biotechnologydurg，biotechdurg）：指采用DNA重組技術(shù)或其他生物技術(shù)生產(chǎn)的用于預(yù)防、治療和診斷疾病的藥物，主要是重組蛋白和核算類藥物。2.Monoclnalantibody：單克隆抗體，是體內(nèi)或培養(yǎng)的一個識別單一抗原表位的B細(xì)胞克隆所分泌的針對一種抗原決定簇的免疫球蛋白，簡稱單抗。3.Fermentationengineer：發(fā)酵工程，將微生物、生物化學(xué)和化學(xué)工程學(xué)的基本原理有機(jī)結(jié)合，利用微生物的特定現(xiàn)狀，通過現(xiàn)代工程技術(shù)在生物反應(yīng)器中生產(chǎn)工業(yè)原料與工業(yè)產(chǎn)品并提供服務(wù)的一種技術(shù)體系，又稱微生物工程。4.感受態(tài)細(xì)胞（competentcell）：理化方法誘導(dǎo)細(xì)胞，使其處于最適攝取和容納外源DNA的生理狀態(tài)。5.全人抗體轉(zhuǎn)基因動物：指將人類抗體基因通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將人類編碼抗體的基因全部轉(zhuǎn)移至基因工程改造的抗體基因缺失動物中，使動物表達(dá)人類抗體，達(dá)到抗體全人源化的目的。6.模擬酶：根據(jù)酶的作用原理，用各種方法人為制造的具有酶性質(zhì)的催化劑。7.Abzyme：抗體酶，又稱催化抗體，是一類免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的、具有催化活性的抗體，具有抗體的高度選擇性和酶的高度催化能力。8.Affinitychromatography：親和層析，利用固定化配基與目的的蛋白之間特異的生物親和作用進(jìn)行吸附分離的技術(shù)。9.治療性疫苗：在已感染病原微生物或已患有某些疾病的機(jī)體中，通過誘導(dǎo)特異性的免疫應(yīng)答，達(dá)到治療或防止疾病惡化的疫苗。10.Adjuvant：佐劑，又稱非特異性免疫增生劑。本身不具抗原性，但同抗原一起或預(yù)先注射到機(jī)體內(nèi)能增強(qiáng)免疫原性（見抗原）或改變免疫反應(yīng)類型。11.Geneticallyengineeredantibodies：gAb，基因工程抗體，又稱重組抗體、工程抗體，指利用重組DNA及蛋白質(zhì)工程技術(shù)對編碼抗體的基因按不同需要進(jìn)行加工改造和重新裝配，經(jīng)轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞所表達(dá)的抗體分子。12.DNA連接酶：催化DNA片段中兩個相鄰的3’-OH末端和另一DNA鏈的5’-P末端生成3’，5’-磷酸二酯鍵，從而使DNA片段或單鏈斷裂形成的缺口連接起來。13.動物細(xì)胞工程制藥：14.SubunitVaccine：亞單位疫苗，利用微生物的某種表面結(jié)構(gòu)（抗原）制成能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗體的疫苗。15.噴射式反應(yīng)器（Projectionalreactor，PR）：利用高壓蒸汽的噴射作用，實現(xiàn)酶與底物的混合，進(jìn)行高溫短時催化反應(yīng)的一種反應(yīng)器。16.Pegylation：蛋白質(zhì)的PEG修飾，即PEG化，是將活化的PEG通過化學(xué)方法以共價鍵偶聯(lián)到蛋白質(zhì)的技術(shù)。17.貼壁細(xì)胞（adherentcells）;這類細(xì)胞的生長必須有可以貼附的支持物表面，細(xì)胞依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該表面上生長，繁殖。18.Genetherapy:基因治療，將外源正常的或者有治療有治療作用的基因?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療目的的治療方法。19.表達(dá)載體(Expressionvectors)：表達(dá)載體含強(qiáng)啟動子，外源基因在啟動子控制下轉(zhuǎn)錄，并表達(dá)外源蛋白。20.酶的固定化（enzymeimmobilization）：采用各種方法將酶與水不溶性的載體結(jié)合，制備固定化酶的過程。問答題（7個）1.基因工程制藥過程中，獲取目的基因常用的方法有哪些？①化學(xué)合成法：需要知道目的基因的核苷酸序列或其編碼產(chǎn)物的氨基酸殘基序列②PCR法：可在體外特異性的擴(kuò)增目的基因的片段，引入合適的酶切位點(diǎn)和標(biāo)簽結(jié)構(gòu)等，但PCR體外擴(kuò)增常容易帶入突變，在實現(xiàn)克隆后需要進(jìn)行測序分析。。③cDNA文庫法：包含著特定組織和細(xì)胞全部mRNA信息的cDNA克隆集，便于克隆和大量擴(kuò)增，可以從中篩選到所需目的基因，并用于表達(dá)，但不能研究基因組的結(jié)構(gòu)。④基因組DNA文庫法：某一特定生物體全部基因組DNA序列的隨機(jī)克隆群體的集合，以DNA片段的形式貯存了所有基因組DNA信息，可以用于研究基因組結(jié)構(gòu)功能。2.動物細(xì)胞生物反應(yīng)器的主要操作模式有哪些？①分批式操作；②補(bǔ)料-分批操作；③半連續(xù)式操作；④灌流式操作；⑤連續(xù)式操作3.干擾素在使用過程中出現(xiàn)的問題提及選擇PEG修飾劑要考慮的因素。存在問題：①半衰期較短，需要隔日注射的問題，給患者用藥帶來了不便；②副反應(yīng)：發(fā)熱、流感樣癥狀、骨髓抑制、精神神經(jīng)系統(tǒng)；③長期使用易產(chǎn)生耐藥性。選擇PEG修飾劑要考慮的因素①PEG修飾劑的相對分子質(zhì)量（Mr）大小，不同的分子大小引起的藥物分布不同。②與干擾素發(fā)生偶合反應(yīng)的活性和選擇性，以及修飾后形成的化學(xué)鍵的穩(wěn)定性。③修飾位點(diǎn)的選擇和工藝優(yōu)化4.物理吸附法和共價結(jié)合的概念，試比較兩種酶固定方法的優(yōu)缺點(diǎn)。①物理吸附法定義：利用酶和載體間的非特異性物理吸附作用將酶固定在載體表面，這些作用包括范德華力、氫鍵、疏水作用、靜電作用等。優(yōu)點(diǎn)：條件溫和，工藝簡便、載體選擇性范圍大，對酶催化活性影響小缺點(diǎn)：酶與載體之間結(jié)合力弱，不適合的PH、溫度、離子強(qiáng)度等條件都易使酶從載體脫弱并污染催化反應(yīng)物。②共價結(jié)合法定義:酶以共價結(jié)合于載體表面的固定方法，即將酶分子上非活性部分功能團(tuán)與載體表面反應(yīng)基團(tuán)進(jìn)行共價結(jié)合的方法。優(yōu)點(diǎn)：結(jié)合比較牢固，有良好的穩(wěn)定性及重復(fù)使用性。缺點(diǎn)：反應(yīng)劇烈，固化酶活性損失較嚴(yán)重。5.微生物發(fā)酵生產(chǎn)藥物種類有哪些？①抗生素類：青霉素②氨基酸類：單個氨基酸制劑、復(fù)方氨基酸制劑③核苷酸類：AMP、ATP、輔酶A④維生素：Vc、VB2和VB12、VD2⑤甾體類激素：⑥多糖類：透明質(zhì)酸、右旋糖酐⑦治療酶及酶抑制劑：蛋白酶、脂肪酶6.簡述減毒疫苗、滅活疫苗和基因工程亞單位疫苗的異同點(diǎn)。減毒疫苗：是用減毒或無毒力的活病原微生物制成，除誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫外，還可產(chǎn)生細(xì)胞免疫。接種次數(shù)少、反應(yīng)小、成本低、免疫效果好。但其穩(wěn)定性差，有毒力返祖現(xiàn)象，污染環(huán)境，免疫缺陷者不適用，滅活疫苗：又稱死疫苗，是選用免疫原性強(qiáng)的病原體，經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，有理化方法滅活制成的。死疫苗主要誘導(dǎo)特異抗體的產(chǎn)生，即基本上只會產(chǎn)生體液免疫。常需多次接種，接種計量大，免疫效果有一定局限性，維持時間短。有較強(qiáng)的免疫原性和安全性，穩(wěn)定性好?；蚬こ虂唵挝灰呙纾簩⑼庠葱圆≡w特異抗原編碼基因轉(zhuǎn)入非致病性微生物內(nèi)表達(dá)的基因產(chǎn)物。效果好、成本低、易于保存、穩(wěn)定性好、可操作性強(qiáng)，但有毒力返祖現(xiàn)象，污染環(huán)境，免疫缺陷者不適用7.簡述ChimericAntigenReceptorT（CAR-T）細(xì)胞免疫療法的基本原理。CAR-T：嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法，利用病人自身的免疫細(xì)胞來清除癌細(xì)胞的一種治療方法。即，從病人外周血中分離淋巴細(xì)胞T細(xì)胞,通過基因載體將腫瘤抗原特異性CAR基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入T細(xì)胞,生成CAR-T細(xì)胞,篩選能夠特異性識別腫瘤細(xì)胞的T細(xì)胞，并在體外進(jìn)行增殖培養(yǎng)。當(dāng)T細(xì)胞數(shù)量達(dá)到一定數(shù)值后，回輸?shù)交颊叩捏w內(nèi)，讓其發(fā)揮特異的抗癌治癌功能。8.簡述基因工程制藥的基本流程①目的基因的獲得；②表達(dá)載體的選擇；③目的基因與載體的連接；④重組DNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞；⑤重組子的篩選與鑒定；⑥工程菌株發(fā)酵表達(dá)重組蛋白；⑦重組蛋白產(chǎn)品的純化；⑧重組蛋白制劑的生產(chǎn)。9.簡述原核細(xì)胞表達(dá)體系的特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：①宿主菌遺傳背景清楚，商品化菌種齊全，方便購買；②原核細(xì)胞操作簡便、繁殖快和周期短；③大規(guī)模生產(chǎn)成本低，產(chǎn)量較高；④下游純化工藝簡單，易于控制，生產(chǎn)效率高。缺點(diǎn)：不能糖基化，無修飾。10.培養(yǎng)動物細(xì)胞時需要關(guān)注哪些培養(yǎng)條件？①培養(yǎng)溫度：37℃±0.5，過高細(xì)胞退變甚至死亡，過低降低代謝和生產(chǎn)能力。②PH：7.2-7.4，過高或過低對細(xì)胞生長不利，甚至?xí)鸺?xì)胞死亡。③通氧量：不同的細(xì)胞對氧和CO2的比例要求不完全一樣。④防止污染：防止化學(xué)物質(zhì)、微生物、生物活性物質(zhì)污染，對細(xì)胞產(chǎn)生損傷。⑤基本營養(yǎng)物質(zhì)：無機(jī)鹽、微量元素、碳源、氮源、維生素、小牛血清或胎牛血清。⑥滲透壓：小鼠細(xì)胞：320mOsm/L，大多數(shù)細(xì)胞：290-320mOsm/L。11.簡述蛋白質(zhì)藥物化學(xué)修飾的概念、意義、修飾后蛋白質(zhì)性能改善的原因。概念：凡是通過基因引入或去除而使蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的過程意義：蛋白質(zhì)藥物化學(xué)修飾能賦予蛋白質(zhì)藥物多種優(yōu)良性能，擴(kuò)大應(yīng)用范圍。如：①循環(huán)半衰期延長；②免疫原性降低或消失，毒副作用減少；③物理、化學(xué)和生物穩(wěn)定性增強(qiáng)。原因：①相對分子量↑，腎小球濾過作用↓，降解速度↓，半衰期↑；②修飾劑屏蔽作用，不易受各種蛋白酶攻擊，降解速度↓，穩(wěn)定性↑，半衰期↑；③修飾劑能掩蓋蛋白質(zhì)表面的抗原決定簇，使蛋白質(zhì)不能與各種細(xì)胞表面受體，不被機(jī)體的免疫系統(tǒng)識別，避免了相應(yīng)抗體的產(chǎn)生，降低蛋白質(zhì)的免疫原性；④修飾劑與蛋白質(zhì)偶聯(lián)后能賦予其優(yōu)良的理化性質(zhì)，因而改善蛋白質(zhì)的生物分布和溶解性能。12.試述單克隆抗體技術(shù)的基本原理及基本過程。原理：基于動物細(xì)胞融合技術(shù)，實現(xiàn)骨髓瘤細(xì)胞和B細(xì)胞的融合，形成的雜交瘤細(xì)胞既有骨髓瘤細(xì)胞的無線增值特性，又具有免疫B細(xì)胞的合成和分泌特異性抗體的能力?；具^程：制備抗原、免疫動物、B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞、篩選雜交瘤細(xì)胞、篩選產(chǎn)生目標(biāo)單抗的雜交瘤細(xì)胞（陽性細(xì)胞）、陽性細(xì)胞的克隆化、單抗的純化及鑒定、體外大規(guī)模培養(yǎng)或動物腹腔培養(yǎng)陽性細(xì)胞株產(chǎn)生單抗。13.雞卵黏蛋白的相對分子量大約為28kD,pI在3.9-4.5之間，在50%丙酮和10%三氯乙酸溶液中均勻不發(fā)生沉淀，在80℃條件下理化性質(zhì)保持穩(wěn)定。在10%、PH3.5的三氯乙酸中雞卵黏蛋白保持良好的溶解度，而與其共存的主要雜志雞卵清蛋白質(zhì)絕大部分被沉淀出來。根據(jù)以上信息，設(shè)計出從雞蛋清中分離純化雞卵黏蛋白質(zhì)的工藝線路（純度大于90%）。試劑等未知信息可自行假設(shè)，要求工藝大致合理，重點(diǎn)說明每一步設(shè)計的原理和目的。①將雞蛋清攪拌均勻，過濾，去除臍帶和蛋殼②加10%三氯乙酸，用NaOH和HCL調(diào)節(jié)PH=3.5，離心，取上清液。（雞卵黏蛋白在10%、PH3.5的三氯乙酸中雞卵黏蛋白保持良好的溶解度，而與其共存的主要雜志雞卵清蛋白質(zhì)絕大部分被沉淀出來。）③過濾，去除上清液中脂類物質(zhì)及其他不溶物；④加3倍體積的50%丙酮，萃取靜止，取上清液。（雞卵黏蛋白在50%丙酮和10%三氯乙酸溶液中均勻不發(fā)生沉淀，在80℃條件下理化性質(zhì)保持穩(wěn)定，應(yīng)用萃取的原理將雞卵黏蛋白轉(zhuǎn)移到丙酮中，進(jìn)一步提純）⑤使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，蒸干除去丙酮，收集雞卵黏蛋白。（丙酮沸點(diǎn)低，易揮發(fā)，雞卵黏蛋白在80℃條件下理化性質(zhì)保持穩(wěn)定）14.現(xiàn)代酶工程的研究內(nèi)容①酶的生產(chǎn)：選育優(yōu)良菌株、構(gòu)建基因工程菌株、優(yōu)化發(fā)酵條件提高酶的產(chǎn)量。②酶的分離純化：是當(dāng)前生物技術(shù)“后處理工藝”的核心③酶和細(xì)胞的固定化：全面提高酶的工業(yè)價值④酶的修飾及分子改造：提高酶的應(yīng)用價值⑤非水相催化：提高催化活性⑥酶傳感器：又稱酶電極，由感受器（固定化酶）和換能器（離子選擇性電極）做組成的一種分析裝置，可用于測定濃度。⑦酶反應(yīng)器：⑧抗體酶、人工酶和模擬酶：結(jié)合抗體的高度專一性和酶的高效催化能力⑨酶技術(shù)的應(yīng)用