動物細胞融合和單克隆抗體課件

動物細胞融合與動物細胞融合與11、定義：指用自然或人工方法使兩個或多個不同的細胞融合成一個細胞的過程。一、動物細胞融合◆細胞雜交：不同基因型的細胞之間的融合就是細胞雜交?！綦s交細胞：融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞成為雜交細胞。1、定義：指用自然或人工方法使兩個或多個不同的細胞融合成一個2

細胞融合是正常的生命活動兩個細胞正在融合

受精作用細胞融合是正常的生命活動兩個細胞正在融合受精作用3

二.動物細胞融合二.動物細胞融合42、誘導融合的因素生物法：滅活的病毒誘導融合.(利用滅活仙臺病毒是動物細胞融合所特有的。這是由于病毒的磷脂外衣與動物細胞的膜十分相似的緣故。病毒外殼上的某些糖蛋白可能還有促進細胞融合的功能。)化學法：聚乙二醇PEG誘導融合.物理法：電激融合病毒顆粒黏附細胞表面細胞膜連接細胞膜被病毒顆粒穿通細胞融合、形成雜種細胞2、誘導融合的因素病毒顆粒黏附細胞表面細胞膜連接細胞膜被53、動物細胞融合技術(shù)的應(yīng)用細胞融合技術(shù)突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能。利用雜交瘤技術(shù)，制備單克隆抗體。3、動物細胞融合技術(shù)的應(yīng)用細胞融合技術(shù)突破了有性雜交的局限，6思考討論：為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？

因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合，不滅活的話會感染細胞，而不能誘導細胞融合。思考討論：為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎7總結(jié)：比較植物體細胞雜交和動物細胞融合比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理融合前處理誘導方法用途細胞膜的流動性、植物細胞的全能性細胞膜的流動性用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶使細胞分散物理、化學方法物理、化學、生物方法獲得部分或完整植株主要用于制備單克隆抗體總結(jié)：比較植物體細胞雜交和動物細胞融合比較項目植物體細胞雜交8人們獲得抗體的傳統(tǒng)方法是?將抗原注入動物體,然后從動物血清中提取抗體這種方法的缺點是什么?效率低，產(chǎn)量有限，純度低，動物抗體注入人體可能產(chǎn)生嚴重的過敏反應(yīng)。運用已學知識，設(shè)想怎樣獲得單一類型的抗體？能否用單個B淋巴細胞通過克隆形成的細胞群來產(chǎn)生單一類型的抗體呢？B淋巴細胞在體外不能無限增殖。二：動物細胞融合的成功應(yīng)用

——單克隆抗體的制備思考人們獲得抗體的傳統(tǒng)方法是?二：動物細胞融合的成功應(yīng)用9單克隆抗體的制備—極富創(chuàng)造性的方案將能夠產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞和具有無限增殖能力的骨髓瘤細胞融合在一起，形成雜交瘤細胞。雜交瘤細胞既能在體外快速生長，又能持續(xù)分泌成分單一的特異性抗體。這種單一類型的只針對某一特定抗原決定簇的抗體分子，就是單克隆抗體。米爾斯坦(阿根廷)和科勒(德國)因此在1984年獲諾貝爾獎。單克隆抗體的制備—極富創(chuàng)造性的方案10雜交細胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細胞B淋巴細胞經(jīng)免疫的小鼠提取雜交瘤細胞第一次篩選用特定的選擇性培養(yǎng)基第二次篩選能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無限增殖的雜交瘤細胞體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔提取單克隆抗體雜交細胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細胞B淋巴細胞經(jīng)免疫的小11動物特異性免疫分離B淋巴細胞（B）；找到骨髓瘤細胞（G）。注意B淋巴細胞是一個系列。（B1,B2,B3,---Bn）細胞融合——三種融合方式:（BB;BG;GG）第一次篩選：在“選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)”上培養(yǎng)篩選雜交瘤細胞（只有BG雜交瘤細胞存活。但BG雜交瘤細胞也是一個系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培養(yǎng)基上不能存活。）第二次篩選：在“多孔培養(yǎng)板上”培養(yǎng)雜交瘤細胞系列

，每孔只放一個雜交瘤細胞?！翱寺』囵B(yǎng)”每個雜交瘤細胞，并進行“單一抗體檢測”，“檢測陽性”的孔內(nèi)即是所需要的雜交瘤細胞。選擇所需要的雜交瘤克隆細胞群，體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖.提取單克隆抗體。1、單抗的制備過程要點：動物特異性免疫1、單抗的制備過程要點：123）、為何要進行兩次篩選？4）、如何進行第2次篩選？培養(yǎng)在多孔培養(yǎng)板上，每孔只有一個雜交瘤細胞。第1次篩選得到雜交瘤細胞（多種）。第2次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞群。問題強化：1）、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理2）、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B細胞融合？這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙親細胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體3）、為何要進行兩次篩選？4）、如何進行第2次篩選？培養(yǎng)在多131、作為診斷試劑：在臨床生化診斷、病理組織定位、體內(nèi)腫瘤的定位等,與常規(guī)抗體相比,具有準確、高效、簡易、快速特點.2、用于治療疾病和運載藥物：主要用于癌癥治療。生物導彈：抗癌細胞的單克隆抗體+放射性同位素+化學藥物或細胞毒素。（單克隆抗體：導向。準確找到癌細胞位置，原位殺死癌細胞。）2、單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，可大量制備。3、單克隆抗體的應(yīng)用1、作為診斷試劑：在臨床生化診斷、病理組織定位、體內(nèi)腫瘤的定14B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群注射到小鼠腹腔AC

下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風桿菌單克隆抗體的實驗方案2、該方案能達到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導劑，該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實驗方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細胞能夠產(chǎn)生______5、C過