維生素B1的測(cè)定課件

維生素B1的測(cè)定

——營(yíng)養(yǎng)0901徐燕萍張晶熒趙莎莎趙小娟維生素B1的測(cè)定

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１.結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

嘧啶亞甲基噻唑連成的季銨鹽化合物·１.結(jié)構(gòu)與性質(zhì)嘧啶亞甲基2維生素B1，又稱(chēng)硫胺。分子式C12H17ClN4OS。它是人體必需的13種維生素之一，是一種水溶性維生素，屬于維生素B族，為無(wú)色結(jié)晶體，溶于水，在酸性溶液中很穩(wěn)定，在堿性溶液中不穩(wěn)定，易被氧化和受熱破壞。維生素B1，又稱(chēng)硫胺。分子式C12H17ClN4OS。3測(cè)定意義由于人體不能自行合成維生素B1，必須從食物中攝取。因此，人體需依賴(lài)食物提供足夠的維生素B1，測(cè)定各種食品維生素B1含量多少將對(duì)食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià)十分重要。如果由于食物攝入量不足，或因食物的加工、運(yùn)輸、儲(chǔ)存、烹飪不當(dāng)，使維生素B1受到破壞或損失，都會(huì)造成維生素B1的缺乏。因此，食品中的維生素B1測(cè)定對(duì)指導(dǎo)食品加工、保存、膳食營(yíng)養(yǎng)配比等都有一定的意義。測(cè)定意義由于人體不能自行合成維生素B1，必須從食物中4維生素B1是人體能量代謝，特別是糖代謝所必需的，故人體對(duì)它的需要量通常與攝取的熱量有關(guān)。當(dāng)人體的能量主要來(lái)源于糖類(lèi)時(shí)，維生素B1的需要量最大。成人的建議每日攝取量是1．0～1．5mg。妊娠、哺乳期每天攝取1．5～1．6mg；在生病、生活緊張、接受手術(shù)時(shí)，要增加必要用量。維生素B1是人體能量代謝，特別是糖代謝5來(lái)源簡(jiǎn)介

維生素B1廣泛存在于天然食物中，含量較豐富的有：動(dòng)物內(nèi)臟(肝、心及腎)、肉類(lèi)、豆類(lèi)、花生及精細(xì)加工的谷物類(lèi)。谷物類(lèi)是我國(guó)人民的主食，也是維生素B1的主要來(lái)源。但過(guò)分去除麩皮與糠，維生素B1損失很多，烹調(diào)加堿可使維生素B1損失增高。來(lái)源簡(jiǎn)介6

維生素B1的測(cè)定方法：

分光光度法;HPLC法;熒光分光光度法等。維生素B1的測(cè)定方法：7分光光度法分光光度法是將維生素B1生成游離型后，與重氮化試劑對(duì)氨基苯乙酮反應(yīng)，生成紫紅色色素，移至二甲苯中測(cè)定其濃度。本法靈敏度差，只適用于食品中維生素B1含量高的試樣。分光光度法分光光度法是將維生素B1生成游離型后，與重氮化試劑8高效液相色譜法把維生素B1衍生化后導(dǎo)入高效液相色譜儀，經(jīng)柱分離，通熒光檢測(cè)器測(cè)定。本法適用于體系復(fù)雜的樣品，干擾嚴(yán)重時(shí)采用此法。高效液相色譜法把維生素B1衍生化后導(dǎo)入高效液相色譜儀，經(jīng)柱分9熒光法這里我們主要介紹熒光法

參考GB/T5009.84-2003食品中硫胺素(維生素B1)的測(cè)定

熒光法這里我們主要介紹熒光法10方法原理試樣在酸性溶液中加熱，提取維生素B1，經(jīng)蛋白分解酶處理，使維生素B1成為游離型。再經(jīng)層析柱純化，去除熒光淬滅物質(zhì)，同時(shí)濃縮，用堿性鐵氰化鉀溶液將其氧化成硫色素，在紫外線下，硫色素發(fā)出熒光，再給定的條件下以及沒(méi)有其他物質(zhì)干擾時(shí)，此熒光之強(qiáng)度與硫色素量成正比即與溶液中維生素B1量成正比。方法原理試樣在酸性溶液中加熱，提取維生素B1，經(jīng)蛋白分解酶處11操作步驟1.樣品處理樣品采集后用勻漿機(jī)打成勻漿于低溫冰箱中冷凍保存，用時(shí)將其解凍后使用。操作步驟1.樣品處理12

2.樣品提取2.樣品提取133.凈化a.脫脂棉鋪于鹽基交換管的交換柱底部，再加約1g活性人造浮石使之達(dá)到交換柱的1/3高度。b.用移液管加入提取液20~60ml。c.加入約10ml熱蒸餾水沖洗交換柱，棄去洗液，重復(fù)三次。d.加入20ml50g/L酸性Kcl,收集此液于25ml刻度試管內(nèi)。涼至室溫，用250g/L酸性Kcl定容至25ml，即為凈化液。3.凈化a.脫脂棉鋪于鹽基交換管的交換柱底部，再加約1g活性14

做空白試驗(yàn)重復(fù)上述操作，將20ml維生素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液加入鹽基交換管以代替試樣提取液，即得到標(biāo)準(zhǔn)凈化液。

154.氧化

將5ml試樣凈化液分別加入A、B兩個(gè)反應(yīng)瓶；同時(shí)將5ml標(biāo)準(zhǔn)凈化液分別加入A1、B1兩個(gè)反應(yīng)瓶中。Maizel-Gerson反應(yīng)瓶4.氧化將5ml試樣凈化液分別加入A、B兩個(gè)反應(yīng)瓶；M16氧化流程反應(yīng)瓶要同時(shí)振搖，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)90s.氧化流程反應(yīng)瓶要同時(shí)振搖，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)90s.175、測(cè)定熒光測(cè)定條件：

激發(fā)波長(zhǎng)365nm；發(fā)射波長(zhǎng)435nm；激發(fā)波狹縫5nm；發(fā)射波狹縫5nm。

依次測(cè)定下列熒光強(qiáng)度：

a.樣品空白熒光強(qiáng)度（樣品反應(yīng)瓶A）；

b.標(biāo)準(zhǔn)空白熒光強(qiáng)度（標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)瓶A1）；

c.樣品熒光強(qiáng)度（樣品反應(yīng)瓶B）；

d.標(biāo)準(zhǔn)熒光強(qiáng)度（標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)瓶B1）；

5、測(cè)定熒光測(cè)定條件：

激發(fā)波長(zhǎng)365nm；發(fā)射波186.計(jì)算式中：X──樣品中硫胺素含量，mg/100g；

U──樣品熒光強(qiáng)度；

Ub──樣品空白熒光強(qiáng)度；

S──標(biāo)準(zhǔn)熒光強(qiáng)度；

Sb──標(biāo)準(zhǔn)空白熒光強(qiáng)度；

c──硫胺素標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度，μg/ml；

V──用于凈化的硫胺素標(biāo)準(zhǔn)工作液體積，ml；

V1──樣品水解后定容之體積，ml；

V2──樣品用于凈化的提取液體積，ml；

m──樣品質(zhì)量，g；6.計(jì)算19試劑作用1、蛋白分解酶：用于試樣的蛋白分解。2、鹽酸：水解樣品。3、氯化鉀：該熱溶液可從鹽基交換管中的浮石里解析出維生素B1。4、鐵氰化鉀堿性溶液：氧化游離的維生素B1，生成硫色素。5、正丁醇：溶解紫外熒光物質(zhì)——硫色素試劑。試劑作用1、蛋白分解酶：用于試樣的蛋白分解。20注意事項(xiàng)

1、加熱酸性Kcl時(shí)不能使其沸騰，熱Kcl濾速較快，而不沸則是使其不至因過(guò)飽和而在洗滌中結(jié)晶析出阻塞交換柱。2、紫外線會(huì)分解破壞維生素B1，所以維生素B1形成后要快速測(cè)定。