培養(yǎng)基的制備和高壓蒸汽滅菌

培養(yǎng)基的制備和高壓蒸汽滅菌第1頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月目的與要求1、了解培養(yǎng)基的配制原理，掌握制備培養(yǎng)基的過程。2、學(xué)習(xí)高壓蒸汽滅菌操作技術(shù)。3、初步掌握劃線和涂布平板的技術(shù)。4、了解抗生素對(duì)細(xì)菌的抑制作用。第2頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月配培養(yǎng)基滅菌、倒平板劃線、涂布平板抑菌圈實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)流程第3頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月任何培養(yǎng)基一旦配成，必須立即進(jìn)行滅菌處理培養(yǎng)基培養(yǎng)基（medium)：由人工配制的適合微生物生長(zhǎng)、繁殖或適合積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。

在微生物學(xué)研究和生長(zhǎng)實(shí)踐中，配置合適的培養(yǎng)基是一項(xiàng)最基本的要求。第4頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)基按化學(xué)成分來分類按物理狀態(tài)來分類按功能進(jìn)行分類天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基脫水培養(yǎng)基基礎(chǔ)（本）培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)（加富）培養(yǎng)基完全培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基第5頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)基的配制過程計(jì)算用量:200ml固體培養(yǎng)基稱量：托盤天平溶解：自來水調(diào)pH：自然pH滅菌：一般培養(yǎng)基，1210C,15-30min：20min；含糖培養(yǎng)基：1120C,15-30min；易產(chǎn)生沉淀的物質(zhì)：分別滅菌后再混合倒平板3g/L牛肉膏10g/L蛋白胨5g/LNaCl2%瓊脂粉第6頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌滅菌（Sterilization）是指利用物理、化學(xué)等手段殺滅一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體、芽孢和孢子的過程。第7頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌方法化學(xué)藥品滅菌輻射滅菌過濾除菌加熱法干熱滅菌濕熱滅菌火焰灼燒熱空氣滅菌煮沸消毒法常壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽法第8頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月高壓蒸汽滅菌鍋的構(gòu)造Becareful!第9頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月高壓蒸汽滅菌鍋的使用待滅菌物品的包扎裝鍋、加水加蓋（對(duì)角線均勻擰旋）升溫、排氣（放大氣5min）恒溫切斷電源、冷卻開鍋取物121℃20minAttention!第10頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月倒平板融化的瓊脂培養(yǎng)基,冷卻至50℃左右(以手背能忍受的溫度為準(zhǔn))第11頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月平板劃線的基本程序滅菌接種環(huán)沾取菌液接種滅菌接種環(huán)殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染標(biāo)本殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染環(huán)境第12頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月連續(xù)劃線法第13頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月滅菌過的移液管吸取菌液0.1ml滴在培養(yǎng)皿中央用滅菌的涂布棒均勻涂布：將菌懸液先沿一條直線輕輕地來回推動(dòng),使之分布均勻，然后改變方向沿另一垂直來回推動(dòng)，平板內(nèi)邊緣處可改變方向用三角玻扒再涂布幾次。三角鐵扒平板涂布的基本程序第14頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月涂布好的平板濾紙片抑菌圈實(shí)驗(yàn)青霉素第15頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月每組4人需要滅菌的東西：固體培養(yǎng)基200ml（2g蛋白胨，0.6g牛肉膏，1gNaCl，4g瓊脂，自來水200ml，自然pH）培養(yǎng)皿10個(gè)（每人倒平板兩個(gè)，一個(gè)劃線，一個(gè)涂布；涂布的那個(gè)用于抑菌圈實(shí)驗(yàn)）1ml移液管4支(每人1支）濾紙片，每人兩片，每組需剪10片，裝入培養(yǎng)皿中滅菌Ready?GO!第16頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月思考題1、總結(jié)一下，配制培養(yǎng)基應(yīng)注意哪些問題。2、高壓滅菌的關(guān)鍵是什么？3、加入青霉素濾紙的涂布平板究竟會(huì)產(chǎn)生什么樣的效果，為什么？第17頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月GameOver!第18頁，課件共19頁，創(chuàng)作于2023年2月（1）加入適量自來水于滅菌鍋中（至水位線）。（2）放入需要滅菌的東西。注意：不要擺得太擠，以免影響蒸汽流通和滅菌效果。（3）加蓋旋緊螺旋，使蒸汽鍋密閉不漏氣（對(duì)角線均勻擰旋）（4）打開放氣閥，打開電源，自開始產(chǎn)生大氣后5分鐘（此時(shí)蒸汽鍋內(nèi)的冷空氣由排氣閥排盡），關(guān)緊放氣閥，讓溫度隨蒸汽壓力上升而上升，當(dāng)達(dá)所需壓力時(shí)（即溫度上升到121℃），控制熱源維持所需時(shí)間（20分鐘），然后停止加熱，讓其自然冷卻。注意：應(yīng)用此法滅菌是否徹底的一個(gè)重要關(guān)鍵是在壓力上升之前，必須將鍋內(nèi)的冷空氣完全排盡。（5）待壓力降至0