ELISA操作技術(shù)問(wèn)題及解答課件

問(wèn)題與解答北京望爾生物技術(shù)有限公司問(wèn)題與解答北京望爾生物技術(shù)有限公司藥殘離心管最理想的洗滌方法，我們發(fā)現(xiàn)每次作完回收實(shí)驗(yàn)時(shí)，離心管就會(huì)出現(xiàn)不同程度的污染現(xiàn)象？建議實(shí)驗(yàn)完成后,先用流動(dòng)自來(lái)水沖洗干凈,再加入洗滌劑,然后立即清洗干凈，再用流動(dòng)自來(lái)水沖洗，最后用去離子水沖洗，烘干。超高陽(yáng)性樣本所使用的離心管或玻璃試管建議不再使用。藥殘離心管最理想的洗滌方法，我們發(fā)現(xiàn)每次作完回收實(shí)驗(yàn)時(shí)，離心實(shí)驗(yàn)中對(duì)水質(zhì)的要求：三蒸水、蒸餾水、純凈水還是去離子水？最好用去離子水,蒸餾水略遜,其余效果差異不大;理論來(lái)說(shuō)這幾種水都可以滿足分析要求,但對(duì)于某些項(xiàng)目來(lái)說(shuō)還是有一定的區(qū)別。實(shí)驗(yàn)中對(duì)水質(zhì)的要求：三蒸水、蒸餾水、純凈水還是去離子水？最好器具污染所造成的途徑有幾種？一:檢樣過(guò)程中出現(xiàn)含量較高的陽(yáng)性樣品;二:實(shí)驗(yàn)器具沒(méi)有清洗干凈;三：高濃度標(biāo)品貯備液保存不當(dāng)造成污染。容易被污染的實(shí)驗(yàn)器具,使用周期較長(zhǎng),建議方便更新的實(shí)驗(yàn)器具,定期(3-5個(gè)月)更新一次。器具污染所造成的途徑有幾種？一:檢樣過(guò)程中出現(xiàn)含量較高的陽(yáng)藥品的隱含違禁成份用ELISA方法檢測(cè)是否可行？針對(duì)不同成分的樣品,通過(guò)對(duì)應(yīng)的樣品前處理方法,消除干擾后,可以用ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)，但應(yīng)防止與藥殘實(shí)驗(yàn)交叉污染。藥品的隱含違禁成份用ELISA方法檢測(cè)是否可行？針對(duì)不同成分同樣一個(gè)樣品，稱(chēng)取兩個(gè)樣檢測(cè)兩次，兩次值差別較大，是取樣原因還是板間的差異？檢測(cè)中常遇到的問(wèn)題。正常情況下,板孔間的變異不會(huì)對(duì)樣本的檢測(cè)結(jié)果造成絕對(duì)的影響樣品的取樣,前處理過(guò)程和分析過(guò)程中的操作誤差是影響結(jié)果差異較大的主要因素。同樣一個(gè)樣品，稱(chēng)取兩個(gè)樣檢測(cè)兩次，兩次值差別較大，是取樣原因前處理樣品所用的氮?dú)馐遣皇强蓳Q用壓縮空氣？空氣中的氧氣是否會(huì)對(duì)樣品產(chǎn)生氧化作用，進(jìn)而影響試驗(yàn)結(jié)果？

可以用壓縮空氣替換氮?dú)?藥物的氧化在此不會(huì)產(chǎn)生，一般情況下需要檢測(cè)的目標(biāo)物是非常穩(wěn)定的藥物，如果藥物容易產(chǎn)生氧化，那么則沒(méi)有檢測(cè)的必要性了。前處理樣品所用的氮?dú)馐遣皇强蓳Q用壓縮空氣？空氣中的氧氣是否會(huì)將肉中藥物殘留成份轉(zhuǎn)移到提取液中，最佳的離心力、離心時(shí)間是多少（不同的試劑盒離心時(shí)間不一樣）？組份區(qū)別，4500r/min,離心5min,離心力一般是3000g。將肉中藥物殘留成份轉(zhuǎn)移到提取液中，最佳的離心力、離心時(shí)間是多呋喃唑酮檢測(cè)孵育時(shí)間多長(zhǎng)為最佳？

14到16h（參考儀器方法）,有實(shí)驗(yàn)證明過(guò)最低可以縮短至12小時(shí),但對(duì)于高陽(yáng)性樣本來(lái)說(shuō)可能會(huì)出現(xiàn)差異,建議使用14-16h。呋喃唑酮檢測(cè)孵育時(shí)間多長(zhǎng)為最佳？

14到16h（參考儀器方法回收率的測(cè)定方法？每個(gè)盒子是否有一個(gè)推薦的回收率測(cè)定方法?

不同的試劑盒的不同種類(lèi)的樣本,按照說(shuō)明書(shū)中樣本的前處理方法,回收率的測(cè)定方法也有不同，如硝基呋喃類(lèi)與喹諾酮類(lèi)的添加方式等。添加回收的體積公式:V=C*1000M/P。其中:V為添加的高標(biāo)準(zhǔn)體積（ul）,C為添加的濃度,P為高標(biāo)準(zhǔn)的濃度(ppb),M為樣本的質(zhì)量(g)?；厥章实臏y(cè)定方法？每個(gè)盒子是否有一個(gè)推薦的回收率測(cè)定方法?

脂肪存在為什么會(huì)造成試驗(yàn)的假陽(yáng)性率比較高？

在提取過(guò)程中,容易造成乳化,對(duì)樣本進(jìn)行不正常的濃縮，易與雜質(zhì)混合難以分離。乳化后一般利用60℃水浴加熱半小時(shí),最好是先把上層有機(jī)相去除后再利用水浴加熱較好.第二種解乳化的方法是把整個(gè)乳化后的樣本全部放入冰箱-20℃急凍室急凍30min或更長(zhǎng)，回溫后去除上層有機(jī)相再次離心后去上清液，取下層進(jìn)行下一步操作分析。如氯霉素或其他在加入正已烷再加入復(fù)溶液進(jìn)行操作時(shí)，可在加入正已烷后充分渦動(dòng)1-2分鐘，然后加入復(fù)溶液后渦動(dòng)5-10s，即可在一定程度上防止乳化造成。如硝基呋喃類(lèi)代謝物的前處理中加入乙酸乙酯后形成乳化層，不易取到相應(yīng)的量，可以在加入乙酸乙酯時(shí)，放大加入的量，然后取液相應(yīng)增加，保證稀釋倍數(shù)不變，也可在一定程度上防止乳化形成。脂肪存在為什么會(huì)造成試驗(yàn)的假陽(yáng)性率比較高？

在提取過(guò)程中,樣品OD值落在藥殘標(biāo)準(zhǔn)曲線的那一區(qū)間值精確度最高？一般在第三和第四標(biāo)準(zhǔn)之間精確度較高,但是不同的試劑盒曲線的局部差異,精確區(qū)間會(huì)稍有變化。一般在IC50左右曲線上的直線段較為準(zhǔn)確。樣品OD值落在藥殘標(biāo)準(zhǔn)曲線的那一區(qū)間值精確度最高？一般在第三整板ＯＤ值偏低．反應(yīng)溫度偏低,反應(yīng)時(shí)間偏少,洗板時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或次數(shù)過(guò)多,點(diǎn)板時(shí)間過(guò)長(zhǎng),酶標(biāo)儀故障,(波長(zhǎng)錯(cuò)誤；鎢光燈壽命將近,導(dǎo)致光強(qiáng)變?nèi)酰?試劑盒有效期已過(guò)或?qū)⑦^(guò)，某些試劑盒需要稀釋才使用的試劑稀釋倍數(shù)錯(cuò)誤，試劑變質(zhì)或污染，不同批次的試劑盒混用，試劑盒的回溫時(shí)間太短，試劑盒保存環(huán)境過(guò)于復(fù)雜，試劑盒處于極端條件下，比如放在貼著冰箱壁，試劑凍傷。

OD值偏低由什么因素引起的?整板ＯＤ值偏低．OD值偏低由什么因素引起的?

樣本的ＯＤ值偏低．樣本的陽(yáng)性太高，某些試劑盒的樣本需要調(diào)節(jié)pＨ的沒(méi)有調(diào)節(jié)到需要的pＨ范圍，某些試劑盒的復(fù)溶液需要稀釋后才能使用的沒(méi)有經(jīng)過(guò)稀釋?zhuān)瑯颖厩疤幚頃r(shí)沒(méi)有去掉上層有機(jī)相，加樣吸取到上層有機(jī)相，樣本被污染，樣本與標(biāo)準(zhǔn)品的溫度相差太多，樣本前處理時(shí)使用的去離子水質(zhì)量不合格。OD值偏低由什么因素引起的?樣本的ＯＤ值偏低．OD值偏低由什么因素引起的?樣本的吸光度值為什么會(huì)超出曲線上最大ＯＤ值？樣本在離心以后沒(méi)有充分回溫到室溫或未與標(biāo)準(zhǔn)品溫度一致，標(biāo)準(zhǔn)品回溫時(shí)間不夠，樣本中含有非樣本基質(zhì)的物質(zhì)，如有機(jī)溶劑，樣本復(fù)溶液稀釋錯(cuò)誤或直接利用去離子水作為復(fù)溶液，標(biāo)準(zhǔn)１被污染，邊緣效應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間錯(cuò)誤，導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)品的ＯＤ值不上升而樣本的ＯＤ值繼續(xù)上升，常規(guī)操作中超過(guò)≤０.2的吸光度值為正?，F(xiàn)象，可能由于變異系數(shù)引起。附：此種情況一般可以說(shuō)明樣本為陰性樣本。樣本的吸光度值為什么會(huì)超出曲線上最大ＯＤ值？樣本在離心以后沒(méi)氮吹儀為什么需要水??？水浴加熱是為了使樣本揮發(fā)的速度更快一些。氮吹儀為什么需要水?。克〖訜崾菫榱耸箻颖緭]發(fā)的速度更快一些樣本檢測(cè)結(jié)果在曲線之外如何判定?把樣本利用復(fù)溶液進(jìn)行稀釋后才進(jìn)行檢測(cè).使之在曲線之中最佳.最好是稀釋到IC50左右后再次進(jìn)行檢測(cè)。樣本檢測(cè)結(jié)果在曲線之外如何判定?把樣本利用復(fù)溶液進(jìn)行稀釋后才氮吹儀步驟為什么要50-60℃進(jìn)行水浴?

一般有機(jī)溶劑的沸點(diǎn)在60-90℃不等,而水浴的溫度一般較溶劑的沸點(diǎn)略低為佳,故對(duì)于大眾溶劑,可以選用50-60℃的水浴進(jìn)行加熱.但對(duì)于某些沸點(diǎn)較高的試劑,比如乙腈等沸點(diǎn)在80℃以上的有機(jī)溶劑吹干的時(shí)候可選用65-70℃水浴進(jìn)行加熱.但是溫度不宜過(guò)高.注：對(duì)于混合有機(jī)溶劑一般來(lái)說(shuō)沸點(diǎn)會(huì)有所降低.相應(yīng)的水浴溫度也應(yīng)稍微降低。氮吹儀步驟為什么要50-60℃進(jìn)行水浴?

一般有機(jī)溶劑的沸點(diǎn)所有試劑盒的洗板液是否可以通用？同批試試劑盒的洗板液成份基本一致，可以通用。相隔時(shí)間太長(zhǎng)的試劑盒內(nèi)的洗液成份可能會(huì)有少許的變更，建議不通用，如遇到此種情況，可利用較新批次的試劑盒洗液進(jìn)行操作。所有試劑盒的洗板液是否可以通用？同批試試劑盒的洗板液成份基本樣本吹干后保存問(wèn)題。樣本吹干后建議立即進(jìn)行復(fù)溶后點(diǎn)板，盡量不進(jìn)行保存，如果確實(shí)需要進(jìn)行保存的，最好是選擇吹干后放置于2-8℃冰箱進(jìn)行保存，如果是已經(jīng)復(fù)溶好的樣本，需要用封口膜進(jìn)行封口后方可放置于2-8℃冰箱保存。另外有些樣本是不能放置在玻璃里面進(jìn)行保存的，如喹諾酮類(lèi)藥物吹干后不能進(jìn)行保存，如果需要保存，則要復(fù)溶后轉(zhuǎn)移到塑料瓶中方可放置于2-8℃冰箱進(jìn)行保存。一般說(shuō)來(lái)，復(fù)溶后的樣本保存時(shí)間不超過(guò)12小時(shí)。樣本吹干后保存問(wèn)題。樣本吹干后建議立即進(jìn)行復(fù)溶后點(diǎn)板，盡量不試劑盒在保質(zhì)期內(nèi)顏色變淺，但有梯度，可否繼續(xù)使用？試劑盒在保質(zhì)期內(nèi)顏色變淺可能是保存環(huán)境影響所致，在有梯度的情況下可以繼續(xù)使用，但是檢測(cè)結(jié)果只可做為相對(duì)判定依據(jù)，而不能做為定量檢測(cè)結(jié)果。試劑盒在保質(zhì)期內(nèi)顏色變淺，但有梯度，可否繼續(xù)使用？試劑盒在?；厥章书L(zhǎng)期偏高或偏低，是否正常？國(guó)家對(duì)試劑盒的回收率范圍要求較寬（40%-130%），如果在穩(wěn)定的前提下出現(xiàn)試劑盒的回收率長(zhǎng)期偏高或偏低是正常的，也可以做為判定依據(jù)。需要在檢測(cè)結(jié)果的檢測(cè)值除上回收率即是該樣本的相對(duì)準(zhǔn)確檢測(cè)結(jié)果。如果有陽(yáng)性樣本的情況下，最好是使用確證后的陽(yáng)性樣本進(jìn)行復(fù)核實(shí)驗(yàn)為佳?；厥章书L(zhǎng)期偏高或偏低，是否正常？國(guó)家對(duì)試劑盒的回收率范圍要求ELISA方法在方法及操作無(wú)問(wèn)題的情況下，能否出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性？ELISA方法本身的特點(diǎn)具有半定量的性質(zhì)，一般允許有一定比例的假陽(yáng)性（國(guó)家要求在10%以下），在實(shí)驗(yàn)室研發(fā)工作中是不允許出現(xiàn)如此大的假陽(yáng)性率的，一般控制在5%以下。但是不能出現(xiàn)假陰性檢測(cè)結(jié)果。ELISA方法在方法及操作無(wú)問(wèn)題的情況下，能否出現(xiàn)假陽(yáng)性或假樣本處理過(guò)程中出現(xiàn)稀釋倍數(shù)問(wèn)題時(shí)，如何計(jì)算？樣本處理過(guò)程中出現(xiàn)的稀釋均為在無(wú)損失的情況下每ml樣本液中溶解的樣本體積，如2g樣本在無(wú)損失的情況下處理完成后溶解于1ml樣本液中，則表示該方法的稀釋倍數(shù)為0.5倍，如0.5g樣本在無(wú)損失的情況下處理完成后溶解于1ml樣本液中，則表示該方法的稀釋倍數(shù)為2倍，如2g樣本在無(wú)損失的情況下處理完成后溶解于0.5ml樣本液中，則表示該方法的稀釋倍數(shù)為0.25倍。樣本處理過(guò)程中出現(xiàn)稀釋倍數(shù)問(wèn)題時(shí)，如何計(jì)算？樣本處理過(guò)程中出沒(méi)有結(jié)晶水的試劑在配置溶液時(shí)，該如何換算？沒(méi)有結(jié)晶水的試劑在配置溶液時(shí)，應(yīng)該取該試劑需要的物質(zhì)的量乘上分子量后才是需要的試劑的重量。如說(shuō)明書(shū)上需要ng分子量為M1的物質(zhì)，如果在沒(méi)有的情況下，需要用分子量為M2的沒(méi)有結(jié)晶水的物質(zhì)代替時(shí)，則需要的分子量為M2的物質(zhì)重量為n*M2/M1。沒(méi)有結(jié)晶水的試劑在配置溶液時(shí)，該如何換算？沒(méi)有結(jié)晶水的試劑在配置好的試劑保存問(wèn)題。配置好的無(wú)機(jī)試劑一般可以保存2-3個(gè)月，保存環(huán)境可以選擇在室溫，避光，陰涼處進(jìn)行密封保存，洗液和復(fù)溶液等與抗原抗體直接接觸的試劑選擇在2-8℃冰箱里進(jìn)行保存。有機(jī)混合溶液或有機(jī)和無(wú)機(jī)混合溶液保存的時(shí)間原則上不能超過(guò)1個(gè)星期，室溫保存，建議現(xiàn)配現(xiàn)用。配置好的試劑保存問(wèn)題。配置好的無(wú)機(jī)試劑一般可以保存2-3個(gè)月標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性要求達(dá)到多少為好？標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性直接反應(yīng)該實(shí)驗(yàn)的優(yōu)劣，理論上應(yīng)該無(wú)限接近1。在實(shí)際操作中主要還是以標(biāo)準(zhǔn)曲線判定為主，相關(guān)系數(shù)判定為輔，在曲線較好的情況下，相關(guān)系數(shù)只要能達(dá)到0.98以上即可做為半定量檢測(cè)結(jié)果判定依據(jù)。如果低于0.98，可以選擇去除某一個(gè)點(diǎn)，以五個(gè)點(diǎn)作出曲線后再進(jìn)行分析。標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性要求達(dá)到多少為好？標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性直接反應(yīng)該實(shí)驗(yàn)加樣的量錯(cuò)誤會(huì)導(dǎo)致結(jié)果如何？由于該方法為生物法，其反應(yīng)基理非常復(fù)雜，如果加樣的量錯(cuò)誤，可能會(huì)導(dǎo)致不可預(yù)料的結(jié)果，不建議進(jìn)行理論分析。加樣的量錯(cuò)誤會(huì)導(dǎo)致結(jié)果如何？由于該方法為生物法，其反應(yīng)基理非添加回收的添加濃度多少為好？添加回收是驗(yàn)證該處理過(guò)程所反應(yīng)的樣本檢測(cè)結(jié)果可信度，一般要求添加回收的濃度最好為檢測(cè)判定值。如某些項(xiàng)目在檢測(cè)時(shí)判定標(biāo)準(zhǔn)為0.5ppb，那么最好在做添加回收實(shí)驗(yàn)時(shí)添加濃度選在0.5ppb。添加回收的添加濃度多少為好？添加回收是驗(yàn)證該處理過(guò)程所反應(yīng)的怎樣降低實(shí)驗(yàn)器材對(duì)實(shí)驗(yàn)帶來(lái)的干擾？嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)的器材清洗步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)器材清洗。怎樣降低實(shí)驗(yàn)器材對(duì)實(shí)驗(yàn)帶來(lái)的干擾？嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)的器材清洗步驟如何根據(jù)顏色深淺進(jìn)行延時(shí)或縮短時(shí)間？對(duì)于有經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)操作人員來(lái)說(shuō)，顏色與OD值的關(guān)系很容易進(jìn)行把握，如果顏色所示的OD值達(dá)到一定的程度即可進(jìn)行終止。如果顏色過(guò)早達(dá)到一定的OD值范圍，即可提前進(jìn)行終止，反之則延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間。如顯色反應(yīng)時(shí)間是30min的，則需要達(dá)到15min以上方可結(jié)束，如果是顯色15min的，則必須要到8min后方可進(jìn)行終止。如何根據(jù)顏色深淺進(jìn)行延時(shí)或縮短時(shí)間？對(duì)于有經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)操作人員多殘與單殘檢測(cè)問(wèn)題一般來(lái)說(shuō)，如果對(duì)方要求的是某類(lèi)藥物總殘留檢測(cè)結(jié)果不得超過(guò)某個(gè)值時(shí)，則可以使用多殘留檢測(cè)試劑盒，對(duì)于多殘留檢測(cè)試劑盒來(lái)說(shuō)，交叉反應(yīng)率越接近100%越好。如果對(duì)方要求的某藥物檢測(cè)結(jié)果不得超過(guò)某個(gè)值時(shí)，則要使用單殘留檢測(cè)試劑盒，且交叉反應(yīng)率越低越好。對(duì)于不得檢出的藥物來(lái)說(shuō)一般使用單殘留檢測(cè)試劑盒，避免出現(xiàn)過(guò)高的假陽(yáng)性。多殘與單殘檢測(cè)問(wèn)題一般來(lái)說(shuō)，如果對(duì)方要求的是某類(lèi)藥物總殘留檢稀釋好的抗體工作液或酶標(biāo)二抗工作液能存放多長(zhǎng)時(shí)間？稀釋好的抗體工作液或酶標(biāo)二抗工作液不能保存，必須現(xiàn)配現(xiàn)用。稀釋好的抗體工作液或酶標(biāo)二抗工作液能存放多長(zhǎng)時(shí)間？稀釋好的抗如何避免假陰性，如何提高回收率？一般在試劑盒研發(fā)過(guò)程中，前處理方法研究的時(shí)候即會(huì)在假陽(yáng)性與回收率之前取一個(gè)平衡點(diǎn)，只要在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)所提供的方法進(jìn)行操作時(shí)不會(huì)出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象?；厥章逝c添加的藥物的溶解度、藥物的性質(zhì)、移液器的精度、樣本的種類(lèi)、實(shí)驗(yàn)室條件、實(shí)驗(yàn)人員的操作熟練程度等有關(guān)，在各項(xiàng)均滿足要求的情況下，回收率應(yīng)該在說(shuō)明書(shū)的規(guī)定范圍內(nèi)。如何避免假陰性，如何提高回收率？一般在試劑盒研發(fā)過(guò)程中，前處回收率為什么會(huì)超過(guò)100%？在處理樣本的過(guò)程中樣本中的雜質(zhì)會(huì)對(duì)檢測(cè)藥物或抗體產(chǎn)生干擾，因此才會(huì)出現(xiàn)回收率超過(guò)100%的現(xiàn)象。此種情況對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度不會(huì)造成本質(zhì)的影響?；厥章蕿槭裁磿?huì)超過(guò)100%？在處理樣本的過(guò)程中樣本中的雜質(zhì)會(huì)酶標(biāo)儀中自帶有曲線分析系統(tǒng)，還有必要用試劑盒專(zhuān)用處理軟件嗎？酶標(biāo)儀在生產(chǎn)過(guò)程中內(nèi)部都會(huì)有自帶的曲線分析系統(tǒng)，但是一般酶標(biāo)儀針對(duì)的對(duì)象為醫(yī)院或醫(yī)學(xué)上使用，曲線分析系統(tǒng)也是針對(duì)醫(yī)學(xué)上進(jìn)行研制和配備的。所有在試劑盒殘留分析時(shí)不能使用酶標(biāo)儀自帶的曲線分析系統(tǒng)。而試劑盒專(zhuān)用的分析軟件則是專(zhuān)門(mén)為該試劑盒配備的，分析的準(zhǔn)確性高于于酶標(biāo)儀自帶的曲線分析系統(tǒng)。酶標(biāo)儀中自帶有曲線分析系統(tǒng)，還有必要用試劑盒專(zhuān)用處理軟件嗎？如果檢測(cè)樣本在說(shuō)明書(shū)上未出現(xiàn)，可否采用其他樣本的方法代替？如果檢測(cè)的樣本在說(shuō)明書(shū)上未出現(xiàn)，則需要與技術(shù)部進(jìn)行聯(lián)系確證后方可進(jìn)行答復(fù)，如果其他樣本方法不可行且條件允許可以把樣本郵寄到北京望爾技術(shù)有限公司，由北京望爾研發(fā)中心的技術(shù)人員進(jìn)行對(duì)此樣本的單獨(dú)研發(fā)工作，我們將會(huì)在最短的時(shí)間內(nèi)給您滿意的答復(fù)。如果檢測(cè)樣本在說(shuō)明書(shū)上未出現(xiàn)，可否采用其他樣本的方法代替？如回收率能否驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)過(guò)程以及數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性？在沒(méi)有確證樣本對(duì)照的情況下，樣本的添加回收率是對(duì)操作人員及操作環(huán)境乃至試劑唯一的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。因此回收率是一次實(shí)驗(yàn)成功與否除了曲線因素外的一個(gè)重要的判定標(biāo)準(zhǔn)。另：回收率只是一個(gè)參考標(biāo)準(zhǔn)，如果需要得到準(zhǔn)確的衡量標(biāo)準(zhǔn)，建議使用已確證過(guò)的陽(yáng)性樣本進(jìn)行復(fù)核實(shí)驗(yàn)。回收率能否驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)過(guò)程以及數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性？在沒(méi)有確證樣本對(duì)照的呋喃類(lèi)藥物代謝物的前處理過(guò)程中，如果取上層2.5ml時(shí)上層不夠取，如何解決？呋喃類(lèi)藥物代謝物的前處理過(guò)程中，加入的有機(jī)溶劑的量比較有限，如果離心機(jī)效果不明顯的話，很容易造成上層不夠取的情況。遇到這種情況可以把加入的5ml乙酸乙酯的量加大到10ml，然后取上層5ml進(jìn)行吹干。如果有乳化現(xiàn)象，請(qǐng)按照乳化處理方法進(jìn)行操作。呋喃類(lèi)藥物代謝物的前處理過(guò)程中，如果取上層2.5ml時(shí)上層不酶標(biāo)儀的檢測(cè)校正只能由官方部門(mén)來(lái)進(jìn)行檢測(cè)嗎？所有儀器的檢測(cè)校正均只能由官方部門(mén)來(lái)進(jìn)行檢測(cè)，并貼上檢驗(yàn)合格標(biāo)志后，方可用來(lái)做檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。酶標(biāo)儀的檢測(cè)校正只能由官方部門(mén)來(lái)進(jìn)行檢測(cè)嗎？所有儀器的檢測(cè)校呋喃四合一有必要做到用同一個(gè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)嗎？呋喃類(lèi)藥物代謝物四種藥物在檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)中均為不得檢出的藥物，單個(gè)檢測(cè)要求都不得檢出，如果做成四合一的形式，那么就無(wú)法判定檢測(cè)出的單個(gè)藥物是否超標(biāo)。失去監(jiān)控意義。呋喃四合一有必要做到用同一個(gè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)嗎？呋喃類(lèi)藥物代謝呋喃類(lèi)藥物在做添加回收實(shí)驗(yàn)時(shí)，可否利用通過(guò)已衍生化的標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行添加？呋喃類(lèi)藥物代謝物在做添加回收實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須經(jīng)過(guò)一個(gè)衍生化的過(guò)程，使呋喃類(lèi)藥物代謝物變成代謝物的衍生物方可進(jìn)行檢測(cè)。而標(biāo)準(zhǔn)品中均都是已經(jīng)衍生化后衍生物，如果直接用來(lái)添加，則在衍生過(guò)程無(wú)法體現(xiàn)。故不能拿標(biāo)準(zhǔn)品做添加回收實(shí)驗(yàn)。必須拿未衍生的高標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行添加。另：在做硝基呋喃類(lèi)藥物代謝物的試劑盒前處理操作時(shí)，應(yīng)在把甲醇－水溶液倒出后，加入去離子水、１M鹽酸和衍生化試劑步驟之前進(jìn)行添加。呋喃類(lèi)藥物在做添加回收實(shí)驗(yàn)時(shí)，可否利用通過(guò)已衍生化的標(biāo)準(zhǔn)曲線高陽(yáng)性樣本在點(diǎn)板反應(yīng)時(shí)會(huì)不會(huì)因?yàn)榉磻?yīng)時(shí)間過(guò)短而造成反應(yīng)不完全的現(xiàn)象？由于試劑盒的檢測(cè)依據(jù)是利用標(biāo)準(zhǔn)曲線的對(duì)照從而得出樣本中藥物的含量的，因此，只要標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的反應(yīng)環(huán)境和反應(yīng)時(shí)間一致，則可以保證檢測(cè)出來(lái)的樣本不論含量高低均可達(dá)到一個(gè)比較真實(shí)的檢測(cè)結(jié)果。高陽(yáng)性樣本在點(diǎn)板反應(yīng)時(shí)會(huì)不會(huì)因?yàn)榉磻?yīng)時(shí)間過(guò)短而造成反應(yīng)不完全反應(yīng)時(shí)間是否必須嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)所示？ELISA實(shí)驗(yàn)是一個(gè)與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照得出樣本含量的檢測(cè)過(guò)程，故在同一反應(yīng)環(huán)境下，超過(guò)說(shuō)明書(shū)反應(yīng)時(shí)間不多的情況下不會(huì)對(duì)樣本的檢測(cè)造成影響。一般來(lái)說(shuō)不得超過(guò)試劑盒說(shuō)明書(shū)所示反應(yīng)時(shí)間10min。10min以下對(duì)樣本的檢測(cè)結(jié)果影響較?。ㄡ槍?duì)除顯色步驟以外的操作）。反應(yīng)時(shí)間是否必須嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)所示？ELISA實(shí)驗(yàn)是一個(gè)與標(biāo)如果在做呋喃類(lèi)藥物代謝物的實(shí)驗(yàn)時(shí)，離心管的體積不夠，怎么辦？一般來(lái)說(shuō)，如果遇到離心管的體積不夠的實(shí)驗(yàn)時(shí)，可以在保持稀釋倍數(shù)不變的情況下把樣本以及加入的試劑的量進(jìn)行減半操作。減半操作后不會(huì)對(duì)樣本的檢測(cè)造成本質(zhì)性的影響。另一種方式，可以在比較大的試管中進(jìn)行前處理操作步驟的離心前一部分，在加入乙酸乙酯振蕩后，先靜置一段時(shí)間，然后轉(zhuǎn)移上層有機(jī)層相對(duì)較多的一層到另一離心管中進(jìn)行離心，再取上層進(jìn)行以下操作。如果在做呋喃類(lèi)藥物代謝物的實(shí)驗(yàn)時(shí)，離心管的體積不夠，怎么辦？試劑盒分析的液體一般pH值要求多少？試劑盒分析的液體一般要求為中性環(huán)境，pH值約在7.2-7.4之間。試劑盒分析的液體一般pH值要求多少？試劑盒分析的液體一般要求加入終止液后多久進(jìn)行計(jì)數(shù)比較合適？由于ELISA實(shí)驗(yàn)中所用到的都是生物試劑，而終止液為硫酸溶液，故在加入終止液后最好是在10min之內(nèi)進(jìn)行讀數(shù)，如果放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則會(huì)導(dǎo)致OD值呈不規(guī)則的降低現(xiàn)象。顏色深的孔內(nèi)可能會(huì)出現(xiàn)黑色絮狀物質(zhì)，這是正?，F(xiàn)象，是由于