控制菌及螨類檢查技術-控制菌檢查用培養(yǎng)基及適用性檢查

項目九控制菌及螨類檢查技術任務2控制菌檢查用培養(yǎng)基及其適用性檢查知識點2培養(yǎng)基制備及適用性檢查2培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)基質(zhì)量是影響微生物檢驗結果的重要環(huán)節(jié)。計數(shù)測定用培養(yǎng)基的促生長能力是微生物限度檢查結果判斷的重要影響因素，控制菌檢查用培養(yǎng)基也可能由于其促生長能力、指示能力、抑制能力的差異，從而對菌落顏色、形態(tài)等指標存在較大差異，影響結果判斷的客觀性。培養(yǎng)基適用性檢查是通過檢驗用培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基的比較，以陽性菌的生長狀態(tài)或特征來評價檢驗用培養(yǎng)基是否符合檢驗要求。

培養(yǎng)基制備及適用性檢查

2.1培養(yǎng)基適用性檢查適用范圍2010版《中國藥典》規(guī)定微生物限度檢查中成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應進行培養(yǎng)基適用性檢查。2.2微生物限度檢查用培養(yǎng)基質(zhì)量控制的一般原則2.2.1不同處方培養(yǎng)基的替代使用不能通過培養(yǎng)基使用性檢查試驗簡單確定。2.2.2.培養(yǎng)基適用性檢查不能取代供應商或其他法定標準對培養(yǎng)基的有效期、保存條件、制備方法等的更嚴格的規(guī)定。2.2.3.如果沒有特殊規(guī)定，培養(yǎng)基配制采用蒸餾水或純化水均可，但應采用一定措施加以檢測控制，如蒸餾水應核實PH是否為5~7；采用離子交換法制備的純化水，電阻值應不小于2MΩ等。

培養(yǎng)基制備及適用性檢查

2.2.4盡量臨用現(xiàn)配。培養(yǎng)基滅菌后在能取出的前提下，盡快取出，切忌在高壓鍋內(nèi)過夜存留；固體培養(yǎng)基滅菌或融化后，融化狀態(tài)放置不得超過8h；一般預制培養(yǎng)基可置潔凈環(huán)境2~25℃保存，但不應超過20天；固體瓊脂培養(yǎng)基熔化再使用應不超過一次。2.2.5干粉培養(yǎng)基或培養(yǎng)基原料變質(zhì)不應再用；預制培養(yǎng)基儲存過程中發(fā)現(xiàn)渾濁、變色、長菌、嚴重脫水等變化不應再用。2.3對照培養(yǎng)基對照培養(yǎng)基應通過嚴格的質(zhì)量研究和控制，具備性能穩(wěn)定、質(zhì)量優(yōu)異的特點。對照培養(yǎng)基作為一種標準試劑，應具備可靠的來源和保障。

培養(yǎng)基制備及適用性檢查

2.4培養(yǎng)基適用性檢查指標及常用方法2.4.1檢測指標：促生長能力、指示能力、抑制能力。2.4.2常用方法：直接接種法、澆碟法、表面接種法（涂布法）。2.4.3液體培養(yǎng)基通常采用直接接種法測定上述3種指標，接種時應注意接種量不得超過培養(yǎng)基體積的10%。固體培養(yǎng)基采用澆碟法和表面接種法測定上述指標。采用澆碟法考察固體培養(yǎng)基時，為了保證取樣的平行性，平行測定兩皿求平均數(shù)；采用表面接種法考察固體培養(yǎng)基時，表面接種菌液不多于0.2ml/皿，盡量控制在0.1ml/皿，保證取樣的平行性，平行測定兩皿觀察結果。

培養(yǎng)基制備及適用性檢查

2.5計數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查微生物限度檢查中計數(shù)用培養(yǎng)基3種，營養(yǎng)瓊脂、玫瑰紅鈉營養(yǎng)瓊脂和酵母浸出粉葡萄糖瓊脂。2.5.1計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查試驗菌株：

大腸埃希菌［CMCC(B)44102］金黃色葡萄球菌［CMCC(B)26003］

枯草芽孢桿菌［CMCC(B)63501］

白色念珠菌［CMCC(F)98001］

黑曲霉菌［CMCC(F)98003］

菌株培養(yǎng)基菌液制備同微生物限度檢查方法驗證

培養(yǎng)基制備及適用性檢查

2.5.2實驗操作2.5.2.1培養(yǎng)基制備按規(guī)定程序新鮮配置營養(yǎng)瓊脂（被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基）、玫瑰紅鈉營養(yǎng)瓊脂（被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基）以及酵母浸出粉葡萄糖瓊脂（被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基），滅菌后備用。2.5.2.2營養(yǎng)瓊培養(yǎng)基取7個無菌平皿，分別接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各2皿，每皿接種1ml菌液（含菌50~100cfu），另一平皿不接種菌作為空白對照，傾注對照營養(yǎng)瓊培養(yǎng)基，混勻，凝固后于30~35℃倒置培養(yǎng)48h,計數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。

培養(yǎng)基制備及適用性檢查

2.5.2.3玫瑰紅鈉營養(yǎng)瓊脂取5個無菌平皿，分別接種白色念球菌、黑曲霉菌各2皿，每皿接種1ml菌液（含菌50~100cfu），另一平皿不接種菌作為空白對照，傾注對照玫瑰紅鈉營養(yǎng)瓊脂，混勻，凝固后倒置培養(yǎng)72h,計數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。2.5.2.4酵母浸出粉葡萄糖瓊脂

取3個無菌平皿，分別接種白色念球菌2皿，每皿接種1ml菌液（含菌50~100cfu），另一平皿不接種菌作為空白對照，傾注對照酵母浸出粉葡萄糖瓊脂，混勻，凝固后倒置培養(yǎng)72h,計數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。

培養(yǎng)基制備及適用性檢查

2.5.2.4結果判斷若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)、大小應與對照培養(yǎng)基上的菌落一致，則判斷該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。

培養(yǎng)基制備及適用性檢查

2.6控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查控制菌檢查用成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按培養(yǎng)基處方配置的培養(yǎng)基均應檢查。檢查項目包括培養(yǎng)基的促生長能力、指示和抑制特性能力。2.6.1計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查試驗菌株。

大腸埃希菌［CMCC(B)44102］

金黃色葡萄球菌［CMCC(B)26003］

銅綠假單胞菌［CMCC(B)10104］

乙型副傷寒沙門菌［CMCC(B)50094］

白色念珠菌［CMCC(F)98001］

枯草芽孢桿菌［CMCC(B)63501］

菌株培養(yǎng)基菌液制備同微生物限度檢查方法驗證。

培養(yǎng)基制備及適用性檢查

2.6.2各種培養(yǎng)基需要測試的能力及判斷指標2.6.2.1液體培養(yǎng)基促生長能力檢查：取不大于100cfu的試驗菌株分別接種于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)基溫度（30~35℃）及最短培養(yǎng)基時間下培養(yǎng)。增菌培養(yǎng)基多為澄清液體培養(yǎng)基，與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗菌應生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁。2.6.2.2固體培養(yǎng)基促生長能力檢查：取試驗菌液0.1ml（含菌數(shù)50~100cfu）分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基上，在相應控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)基溫度（30~35℃）及最短培養(yǎng)基時間下培養(yǎng)。與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基上生長的菌落大小、形態(tài)特征應一致。培養(yǎng)基制備及適用性檢查

2.6.2.3液體培養(yǎng)基指示能力檢查：取不大于100cfu的試驗菌株分別接種于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)基溫度（30~35℃）及最短培養(yǎng)基時間下培養(yǎng)。與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基中試驗菌應生長情況/指示劑反應等應與對照培養(yǎng)基一致。2.6.2.4固體培養(yǎng)基指示能力檢查：取試驗菌液0.1ml（含菌數(shù)50~100cfu）分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基上，在相應控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)基溫度（30~35℃）及最短培養(yǎng)基時間下培養(yǎng)。被檢培養(yǎng)基上試驗菌的菌落形態(tài)特征、菌落顏色及指示劑反應情況應與對照培養(yǎng)基一致。培養(yǎng)基制備及適用性檢查

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