實驗五、線粒體的超活染色與觀察課件

實驗五

線粒體的超活染色與觀察

驗證型實驗五

線粒體的超活染色與觀察

驗證型掌握口腔上皮細胞臨時標本的制做方法理解并掌握超活染色的原理及注意事項。

一、實驗目的掌握口腔上皮細胞臨時標本的制做方法一、實驗目的三、實驗原理1)活體染色是應用無毒或毒性較小的染色劑真實地顯示活細胞內(nèi)某些結構而又很少影響細胞生命活動的一種染色方法。2)線粒體是細胞內(nèi)一種重要細胞器，是細胞進行呼吸作用的場所。細胞的各項活動所需要的能量，主要是通過線粒體呼吸作用來提供的。3)詹納斯綠

B（JanusgreenB）是線粒體的專一性活體染色劑。線粒體中細胞色素氧化酶系使染料保持氧化狀態(tài)呈藍綠色，而在周圍的細胞質中染料被還原，成為無色狀態(tài)。三、實驗原理1)活體染色是應用無毒或毒性較小的染色劑真實地顯儀器：光學顯微鏡、載玻片、蓋玻片、培養(yǎng)皿、消毒牙簽、吸水紙、擦鏡紙；藥品：詹納斯綠B染液、生理鹽水；材料：口腔上皮、洋蔥鱗莖內(nèi)表皮三、實驗器材儀器：光學顯微鏡、載玻片、蓋玻片、培養(yǎng)皿、消毒牙簽、吸水紙、試劑配制（1）Ringer溶液（100mL）氯化鈉

0.85g氯化鉀0.25g氯化鈣

0.03g（2）1/5000詹納斯綠Ｂ溶液稱取0.5g詹納斯綠Ｂ溶于5mLRinger溶液中，稍加熱(30-40℃)溶解，用濾紙過濾后，即為1%原液。取1mL1%原液加入49mLRinger溶液，即得1/5000工作液，將其裝入棕色瓶中備用。最好現(xiàn)配現(xiàn)用，以保持充分的氧化能力。試劑配制（1）Ringer溶液（100mL）四、實驗步驟（一）口腔上皮線粒體顯示口腔粘膜上皮細胞涂片的制作染色繪圖并描述現(xiàn)象四、實驗步驟（一）口腔上皮線粒體顯示1、口腔粘膜上皮細胞涂片的制作：1）將載玻片刷洗干凈，用紗布擦干，置于實驗臺的適當位置；2）蒸餾水漱口，將牙簽粗的一端放入自己口腔中；3）用力適當?shù)脑诳谇活a內(nèi)刮幾下（用力輕重適宜，以獲得活力旺盛的細胞，又不損傷皮膚）4）將刮下的白色粘性物薄而均勻地涂在載玻片上（可用生理鹽水，細胞容易展開；可不用，不用的容易貼壁）。1、口腔粘膜上皮細胞涂片的制作：2、染色：

將片子放在37℃水浴中

在材料部位滴3-5滴詹納斯綠B染液

染色5-10分鐘

加蓋玻片后，擦凈蓋片周圍殘液鏡檢2、染色：預期效果

低倍鏡：口腔內(nèi)粘膜上皮細胞成群或分散存在，大多呈扁平狀，核呈圓形或橢圓形，被染成淡藍色。

選擇輪廓清楚的細胞，轉換高倍鏡觀察，可見細胞質中散在一些被染成亮綠色的粒狀和短棒狀的顆粒，即線粒體。預期效果（二）洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細胞線粒體顯示（1）載玻片中央加2滴詹納斯綠Ｂ溶液工作液（1/5000

）；（2）鑷子撕取適當大小的洋蔥鱗莖內(nèi)表皮，鋪展在染液中；（3）載玻片置于37℃恒溫水浴，染色5～10min；（4）吸去染液，加Ringer溶液１滴，蓋上蓋玻片，顯微鏡下觀察。（二）洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細胞線粒體顯示（1）載玻片中央加2滴詹納五