2023年研究生類研究生入學(xué)考試專業(yè)課現(xiàn)代分子生物學(xué)題庫

2023年研究生類研究生入學(xué)考試專業(yè)課現(xiàn)代分子生物學(xué)題庫卷I一.歷年考點試題黑鉆版(共50題)1.已知一個cDNA3'端的部分序列，請設(shè)計實驗流程得到該基因的全長cDNA。2.已知一個cDNA3'端的部分序列，請設(shè)計實驗流程得到該基因的全長cDNA。3.岡崎片段4.常見的轉(zhuǎn)錄活化域的特征性結(jié)構(gòu)包括：帶負電荷的螺旋結(jié)構(gòu)，富含______的結(jié)構(gòu)和富含______的結(jié)構(gòu)。5.試分析基因治療的前景和應(yīng)用途徑。6.試述基因克隆載體進化過程。7.定義重組DNA技術(shù)。8.堿法質(zhì)粒提取用到的溶液成分的作用是什么?操作中有哪些注意事項?9.在原核生物中轉(zhuǎn)移噬菌體裸露的完全基因組DNA屬于______。A.接合B.轉(zhuǎn)化C.轉(zhuǎn)染D.轉(zhuǎn)導(dǎo)10.高等生物基因組中含有大量的不編碼蛋白質(zhì)的序列，因此基因組的大小與其進化程度并不一一對應(yīng)。11.基因工程的一個必需步驟是利用限制性內(nèi)切核酸酶切割目的基因使其產(chǎn)生黏性末端，然后連接到載體上。12.你認為21世紀初分子生物學(xué)將在哪些領(lǐng)域取得進展?13.試述結(jié)合各種基因組學(xué)方法和已有數(shù)據(jù)還能進一步探索哪些生物學(xué)問題?14.研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的方法主要有哪些?詳述其中一種的原理和步驟。15.蛋白質(zhì)有哪些翻譯后的加工修飾?其作用機制和生物學(xué)功能是什么?16.核酶具有哪些結(jié)構(gòu)特點?根據(jù)其催化功能的不同可分為哪兩大類?其生物學(xué)意義是什么?17.簡述抗終止子的調(diào)控機制。18.蛋白質(zhì)組(proteome)19.什么是操縱子學(xué)說?20.原核生物的mRNA通常是多順反子，并且通常是邊轉(zhuǎn)錄邊翻譯的。21.蛋白質(zhì)Pull-down實驗原理與主要步驟。22.cDNA合成時的方向性是如何實現(xiàn)的?23.SDS上樣緩沖液成分有哪些?各有何作用?無此電泳出現(xiàn)什么問題?24.什么是FISH技術(shù)?如何利用它來構(gòu)建基因組的物理圖譜?25.無義密碼子的功能是______。A.編碼n種氨基酸中的每一種B.使mRNA附著于任一核糖體上C.編碼每一種正常的氨基酸D.規(guī)定mRNA中被編碼信息的終止26.2013年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎的得主是哪幾位?得獎理由?其意義何在?27.Alternativesplicing28.什么是套索狀結(jié)構(gòu)?哪些類型RNA的剪接中會形成該結(jié)構(gòu)?29.遺傳密碼是怎樣被破譯的?30.核糖體不僅存在于細胞質(zhì)中，也存在于線粒體和葉綠體中。31.新一代測序較之芯片技術(shù)優(yōu)點有哪些?32.簡述反式作用因子的結(jié)構(gòu)特點及其對基因表達的調(diào)控。33.在大腸桿菌中，許多蛋白質(zhì)的降解是通過一個______來實現(xiàn)的。真核蛋白的降解依賴于一個只有______個氨基酸殘基、其序列高度保守的______。34.證明DNA是遺傳物質(zhì)的經(jīng)典實驗是Avety的______和Hershey、Chase的______。35.如何通過實驗的方法分析CTD上S2和S5不同磷酸化模式的功能?36.簡述真核生物轉(zhuǎn)錄元件組成及其分類。37.原核生物強終止子結(jié)構(gòu)為富含GC堿基的發(fā)夾+polyU鏈，若polyU突變?yōu)閜olyC，則轉(zhuǎn)錄終止效率提高。38.簡述Mendel、Morgan和Watson等人對分子生物學(xué)發(fā)展的主要貢獻。39.簡述RNA干擾的分子機制及其應(yīng)用前景。40.列舉參與DNA復(fù)制的酶和相關(guān)的蛋白質(zhì)及其功能。41.什么是弱化作用?42.簡述染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)技術(shù)原理與基本過程。43.拓撲異構(gòu)酶(topoisomerase)44.下列各項中，尚未獲得諾貝爾獎的是______。A.DNA雙螺旋模型B.PCR儀的發(fā)明C.RNA干擾技術(shù)D.抑癌基因的發(fā)現(xiàn)45.成功提取mRNA，最關(guān)鍵的問題是什么，為什么?從總RNA中分離mRNA的原理是什么?46.典型的操縱子不包括下列哪些元件?______A.結(jié)構(gòu)基因B.調(diào)控元件C.調(diào)節(jié)基因D.重復(fù)序列47.說出免疫共沉淀(CoIP)實驗的原理與過程，比較酵母雙雜交技術(shù)和免疫共沉淀技術(shù)在研究蛋白質(zhì)相互作用方面的優(yōu)缺點。48.單順反子mRNA(monocistronicmRNA)和多順反子mRNA(polycistronicmRNA)49.請列舉3項實驗證據(jù)來說明為什么染色質(zhì)中DNA與蛋白質(zhì)分子是相互作用的。50.基因家族的分類及其主要表達調(diào)控模式。卷I參考答案一.歷年考點試題黑鉆版1.參考答案：提取RNA，以oligodT在M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶的作用下引導(dǎo)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，用TdT在合成的cDNA末端加上polyC尾，在反應(yīng)體系中加1.0μL的TdT于37℃反應(yīng)15min以加尾的dC-cDNA為模板，用接頭引物AdapterdG分別和基因特異性引物進行PCR，擴增基因5'末端。將5'端的擴增片段克隆到pMD18-Tsimple載體上，轉(zhuǎn)化大腸桿菌E.coliTop10F感受態(tài)細胞，陽性轉(zhuǎn)化子經(jīng)PCR篩選后測序。2.參考答案：實驗流程設(shè)計如下：

(1)提取總RNA

①用液氮研磨材料至成為勻漿，加入Trizol試劑，進一步破碎細胞并溶解細胞成分；

②加入氯仿抽提，離心，分離水相和有機相；

③收集含有RNA的水相，通過異丙醇沉淀，獲得比較純的總RNA。

(2)mRNA的純化

采用寡(dT)一纖維素柱層析法獲得高純的mRNA。

(3)cDNA的合成

①以mRNA為模板、oligo(dT)為引物，由反轉(zhuǎn)錄酶催化反轉(zhuǎn)錄成cDNA。

②用TdT在cDNA末端加上poly(C)。

③以加尾的dC-cDNA為模板，用接頭引物AdapterdG分別和基因特異性引物進行PCR，擴增基因5'末端。

④將5'端的擴增片段克隆到pMD18-T載體上，轉(zhuǎn)化大腸桿菌E.coliTop10F感受態(tài)細胞。

⑤篩選出陽性轉(zhuǎn)化子經(jīng)PCR篩選后測序。3.參考答案：岡崎片段是指在DNA半不連續(xù)復(fù)制中，沿著后隨鏈的模板鏈合成長度為1000～2000個堿基的短的DNA片段，能被連接形成一條完整的DNA鏈。岡崎片段的長度在真核與原核生物中存在差別，真核生物的岡崎片段長度約為100～200核苷酸殘基，而原核生物的岡崎片段長度約為1000～2000核苷酸殘基。4.參考答案：谷氨酰胺；脯氨酸[解析]反式作用因子的轉(zhuǎn)錄激活域通常依賴于DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域以外的30～100個氨基酸殘基。不同的轉(zhuǎn)錄激活域包括帶負電荷的螺旋結(jié)構(gòu)、富含谷氨酰胺的結(jié)構(gòu)及富含脯氨酸的結(jié)構(gòu)。5.參考答案：(1)基因治療的前景

基因治療是將具有治療價值的基因，即“治療基因”裝配于帶有在人體細胞中表達所必備元件的載體中，導(dǎo)入人體細胞，直接進行表達。近年來，載體系統(tǒng)不斷完善和發(fā)展，利用逆轉(zhuǎn)錄病毒基因與宿主細胞基因組的整合特性介導(dǎo)并表達目的基因，經(jīng)過改建后的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體已用于基因治療并開始為人類造福。基因治療作為一種新興的治療技術(shù)讓人類看到希望，但基因治療還存在很多問題，如用于治療的基因過少，基因治療缺乏靶向性，導(dǎo)入的基因表達缺乏可控性，基因治療的安全性等。

(2)基因治療的應(yīng)用途徑

①exvivo途徑

exvivo途徑是將含外源基因的載體在體外導(dǎo)入人體自身或異體(異種)細胞(基因工程化的細胞)，經(jīng)體外細胞擴增后輸回人體。exvivo途徑易于操作，而且因為細胞擴增過程中對外源添加物質(zhì)的大量稀釋，不易產(chǎn)生副作用。同時，治療中用的是人體細胞，尤其是自體細胞，安全性好，但不易形成規(guī)模，且必須有固定的臨床基地。

②invivo途徑

invivo途徑是將外源基因裝配于特定的真核細胞表達載體上，直接導(dǎo)入人體內(nèi)。載體可以是病毒型或非病毒型，甚至是裸DNA。invivo途徑有利于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，但在技術(shù)上要求很高，導(dǎo)入的治療基因及其載體必須證明其安全性，而且導(dǎo)入體內(nèi)之后必須能進入靶細胞，有效地表達并達到治療的目的。6.參考答案：自Cohen等(1973)構(gòu)建第一個質(zhì)粒載體pSC101作克隆載體以來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，越來越多的克隆載體相繼出現(xiàn)，克隆載體的發(fā)展劃分為三個階段：第一階段以質(zhì)粒(plasmid)、λ噬菌體(λbacteriophage)、柯斯質(zhì)粒(cosmid，又稱粘粒)為主，主要特點是載體在宿主細胞內(nèi)穩(wěn)定遺傳、易分離、轉(zhuǎn)化效率高，但是克隆容量有限，一般小于45kb；第二階段的克隆載體則突破了上述載體容量，顯著特點是載體的容載能力擴大，為100～350kb，主要有酵母人工染色體(YAC)、細菌人工染色體(BAC)以及源于噬菌體P1的人工染色體(PAC)；第三個發(fā)展階段是以近幾年發(fā)展起來的雙元細菌人工染色體(BIBAC)和可轉(zhuǎn)化人工染色體(TAC)，這些載體不僅具有較大的克隆容量，而且具備了直接轉(zhuǎn)化植物進行功能互補實驗的功能。這些載體的發(fā)展推動了結(jié)構(gòu)基因組學(xué)和功能基因組學(xué)研究。7.參考答案：重組DNA技術(shù)又稱基因工程，是20世紀70年代初興起的技術(shù)科學(xué)，目的是將不同DNA片段(如某個基因或基因的一部分)按照人們的設(shè)計定向連接起來，在特定的受體細胞中與載體同時復(fù)制并得到表達，產(chǎn)生影響受體細胞的新的遺傳性狀。

嚴格地說，重組DNA技術(shù)并不完全等于基因工程，因為后者還包括其他可能使生物細胞基因組結(jié)構(gòu)得到改造的體系。8.參考答案：堿法全稱為堿裂解法，是一種應(yīng)用最為廣泛的制備質(zhì)粒DNA的方法。該方法基于DNA的變性與復(fù)性差異而達到分離目的，其基本原理是堿性使質(zhì)粒DNA變性，再將pH值調(diào)至中性使其復(fù)性，復(fù)性的為質(zhì)粒DNA，而染色體DNA不會復(fù)性，而是纏結(jié)成網(wǎng)狀物質(zhì)，可通過離心除去。堿法提取質(zhì)粒用到的溶液及其成分、作用、操作注意事項如下：

(1)溶液Ⅰ

①主要成分

50mmol/L葡萄糖、25mmol/LTris-HCl(pH8.0)、10mmol/LEDTA(pH8.0)。

②各成分的主要作用

a.葡萄糖：能使懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管底。

b.Tris-HCl溶液：控制溶液的pH。

c.EDTA：Ca2+和Mg2+等金屬離子的螯合劑，主要作用是抑制DNase的活性和抑制微生物生長。

③操作中的注意事項

菌體要均勻懸浮，不能有結(jié)塊，否則會降低抽提得率。

(2)溶液Ⅱ

①主要成分

0.2mol/LNaOH(臨用前用10mol/L貯存液現(xiàn)用現(xiàn)稀釋)、1%SDS。

②各成分的主要作用

a.NaOH：用于溶解大腸桿菌細胞。

b.SDS：一種陰離子表面活性劑，處理細胞后會導(dǎo)致細菌細胞壁裂解，從而使內(nèi)容物釋放出來，釋放出來的蛋白質(zhì)、質(zhì)粒DNA和基因組DNA，遇到強堿變性，為下一步做鋪墊。

③操作中的注意事項

a.溶液Ⅱ要現(xiàn)用現(xiàn)配，因為裂解細菌的主要是NaOH，使用新鮮配制的NaOH是為了保證該溶液沒有吸收空氣中的CO2而使其堿性下降。

b.加入溶液Ⅱ的時間不能過長，而且操作要溫和，不能激烈振蕩，否則基因組DNA會斷裂。

(3)溶液Ⅲ

①主要成分

pH4.8的乙酸鉀溶液(5mol/L乙酸鉀60mL，冰乙酸11.5mL，水28.5mL)，所配成的溶液鉀離子濃度是3mol/L，乙酸根濃度是5mol/L。

②各成分的主要作用

a.乙酸：可以中和NaOH，因為長時間的堿性環(huán)境會打斷DNA。

b.乙酸鉀：鉀離子置換SDS中的鈉離子，能形成不溶性的十二烷基硫酸鉀(PDS)。由于SDS易與蛋白質(zhì)結(jié)合，因此大量蛋白質(zhì)被沉淀，同時分子較大的基因組DNA也易被SDS共沉淀。

③操作中的注意事項

加入溶液Ⅲ后要冰上放置，因為在高濃度鹽和低溫條件下，PDS沉淀更完全。

(4)酚/氯仿/異戊醇溶液

①主要作用

a.酚：沉淀殘留的部分蛋白質(zhì)，因為酚對蛋白質(zhì)的變性作用遠大于氯仿。

b.氯仿：可使蛋白變性，增加相對密度，方便水相回收。

c.異戊醇：讓離心后的分層界面更加清晰，方便水相回收；消除抽提過程中出現(xiàn)的泡沫。

②操作中的注意事項

a.酚/氯仿/異戊醇體積比為25:24:1。

b.酚和氯仿均有很強的腐蝕性，操作時應(yīng)戴手套。

(5)無水乙醇和70%乙醇溶液

①主要作用

a.回收后的水相含有足夠多的鹽，加入2倍體積的乙醇，在室溫放置離心即可得到質(zhì)粒DNA的沉淀。

b.如果在-20℃環(huán)境中放置的時間較長，則可能會導(dǎo)致大量鹽的沉淀，70%乙醇可去除鹽類。

②注意事項

沉淀DNA通常使用冰乙醇，在低溫條件下放置時間稍長可使DNA沉淀完全。

(6)pH8.0TE緩沖液

①主要成分

10mmol/LTris-HCl，1mmol/LEDTA，其中含RNA酶20μg/mL。

②主要作用

a.Tris-HCl：避免金屬離子的干擾作用，DNA在pH8.0下比較穩(wěn)定。

b.EDTA：穩(wěn)定DNA的活性。

c.RNA酶：降解RNA。9.參考答案：C[解析]A項，接合是指兩個細菌之間通過性菌毛直接交換DNA的過程。B項，轉(zhuǎn)化是指將質(zhì)?；蚱渌庠碊NA導(dǎo)入處于感受態(tài)的宿主細胞，并使其獲得新的表型的過程。C項，轉(zhuǎn)染是指將重組噬菌體DNA直接導(dǎo)入受體細胞，進行復(fù)制與繁殖的方式。D項，轉(zhuǎn)導(dǎo)是指通過病毒將宿主的DNA轉(zhuǎn)移到另一個宿主的細胞而引起的基因重組現(xiàn)象。10.參考答案：A[解析]蛋白質(zhì)組比基因組更復(fù)雜，蛋白質(zhì)組中存在的蛋白質(zhì)數(shù)目遠多于基因組中存在的基因數(shù)目，基因組的大小并不代表其進化程度。11.參考答案：B[解析]目的基因并非只能通過內(nèi)切核酸酶產(chǎn)生，PCR等其他方法也可以產(chǎn)生目的基因，而且不一定只產(chǎn)生黏性末端，也有可能產(chǎn)生平末端。12.參考答案：21世紀的生物學(xué)將是真正的系統(tǒng)生物學(xué)，是生物學(xué)范圍內(nèi)所有學(xué)科在分子水平上的統(tǒng)一。以基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)以及代謝組學(xué)等不同層次“組學(xué)”的最新成果為基礎(chǔ)的系統(tǒng)生物學(xué)，是研究一個生物系統(tǒng)中所有組成成分(基因、mRNA、蛋白質(zhì)等)的變化規(guī)律及其在特定遺傳或環(huán)境條件下相互關(guān)系的學(xué)科。

(1)分子生物學(xué)的全面滲透推動細胞生物學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)的發(fā)展；

(2)越來越多的遺傳學(xué)原理被分子水平的實驗所證實或否定，許多遺傳病將得到控制或可以治愈，許多經(jīng)典遺傳學(xué)無法解釋的問題和無法破譯的奧秘也將相繼被攻克；

(3)反映不同生命活動中更為本質(zhì)的核酸、蛋白質(zhì)序列間的比較，被大量用于分類和進化的研究，許多滅絕生物在進化樹中的地位將可能被確立；

(4)分子生物學(xué)還將對發(fā)育生物學(xué)研究產(chǎn)生巨大的影響；

(5)分子生物學(xué)與信息科學(xué)、物理、化學(xué)的結(jié)合，將推動上述學(xué)科的發(fā)展。13.參考答案：以全基因組測序為目標(biāo)的結(jié)構(gòu)基因組學(xué)，有助于人們在基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子細胞生物學(xué)以致生物體整體水平上理解生命的原理，對疾病機理的闡明、對疾病的防治有重要應(yīng)用意義。

以基因功能鑒定為目標(biāo)的功能基因組學(xué)，將人類基因組與模式生物基因組進行比較，這一方面有助于根據(jù)同源性方法分析人類基因的功能，另一方面有助于發(fā)現(xiàn)人類和其他生物的本質(zhì)差異，探索遺傳語言的奧秘。14.參考答案：(1)研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的方法

凝膠阻滯(EMSA)實驗、DNaseⅠ足跡法、酵母單雜交技術(shù)、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)技術(shù)、甲基化干擾試驗和體內(nèi)足跡試驗等。

(2)酵母單雜交系統(tǒng)

酵母單雜交系統(tǒng)是用于研究DNA-蛋白質(zhì)之間的相互作用的方法，可通過篩選DNA文庫直接獲得靶序列相互作用蛋白的編碼基因。

①原理

真核生物基因的轉(zhuǎn)錄起始需轉(zhuǎn)錄因子參與，轉(zhuǎn)錄因子通常由一個DNA特異性結(jié)合功能域和一個或多個其他調(diào)控蛋白相互作用的激活功能域組成，即DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(AD)。將已知的特定順式作用元件構(gòu)建到最基本啟動子(Pmin)的上游，把報告基因連接到Pmin下游，然后將編碼待測轉(zhuǎn)錄因子cDNA與已知酵母轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(AD)融合表達載體導(dǎo)入酵母細胞，該基因產(chǎn)物如果能夠與順式作用元件相結(jié)合，就能激活Pmin啟動子，使報告基因得到表達。

②步驟

a.構(gòu)建報道子載體。將已知的特定順式作用元件按同一方向隨機串聯(lián)到一個最基本啟動子(Pmin)的上游，把報告基因連接到Pmin下游。

b.篩選含有報道子載體的酵母細胞。將構(gòu)建好的報道子載體轉(zhuǎn)化酵母細胞并篩選合適的3-AT濃度。

c.構(gòu)建cDNA表達文庫。將樣品經(jīng)過一定處理之后，提取mRNA，經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA。

d.篩選cDNA融合的表達文庫。將報道子、cDNA和融合表達載體共轉(zhuǎn)化到酵母中，在相應(yīng)的SD培養(yǎng)基上篩選陽性克隆。

e.對陽性克隆進行鑒定，去除假陽性克隆。

f.對獲得的陽性克隆進行測序。15.參考答案：新生的多肽鏈大多數(shù)是沒有功能的，必須經(jīng)過加工修飾才能轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘牡鞍踪|(zhì)，翻譯后的加工修飾主要包含：N端fMet或Met的切除、二硫鍵的形成、特定氨基酸的修飾、非功能片斷的切除等等。

(1)N端fMet或Met的切除：原核生物的肽鏈，其N-端不保留fMet，其甲?；幻摷柞；杆?，原核及真核細胞中端的Met往往在多肽鏈合成完畢之前就由氨肽酶水解而除去。新生蛋白質(zhì)在去掉N端一部分殘基后就變成有功能的蛋白質(zhì)。

(2)二硫鍵的形成：蛋白質(zhì)中的二硫鍵由兩個半胱氨酸殘基通過氧化作用而形成。二硫鍵的正確形成對維持蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象起重要作用。

(3)特定氨基酸的修飾：生物體內(nèi)最普通發(fā)生的氨基酸側(cè)鏈的修飾作用主要包括磷酸化、糖基化、甲基化、乙?；?。磷酸化主要是由多種蛋白激酶催化，發(fā)生在Ser、Thr和Tyr等3種氨基酸的側(cè)鏈；糖基化則是由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的糖基化酶催化進行的；甲基化主要是由細胞質(zhì)基質(zhì)內(nèi)的N-甲基轉(zhuǎn)移酶催化完成，多發(fā)生在Arg、His和Gln的側(cè)鏈基團的N-甲基化以及Glu和Asp側(cè)鏈基團的O-甲基化；乙?；怯蒒-乙酰轉(zhuǎn)移酶催化多肽鏈的N端，發(fā)生在Lys側(cè)鏈上的ε-NH2。蛋白質(zhì)前體經(jīng)過特定的化學(xué)修飾后才能成為成熟的蛋白質(zhì)而參與正常的生理活動。

(4)新生肽中非功能片斷的切除：不少多肽類激素和酶的前體需要經(jīng)過加工切除不必要的肽段才能成為有活性的分子。例如，新合成的胰島素前體是前胰島素原，必須先切除信號肽變成胰島素原，再切除C-肽，才能成為有活性的胰島素。16.參考答案：(1)核酶是指一類具有催化功能的RNA分子，通過催化靶位點RNA鏈中磷酸二酯鍵的斷裂，特異性地剪切底物RNA分子，從而阻斷基因的表達。

核酶的結(jié)構(gòu)特點：能形成錘頭結(jié)構(gòu)或發(fā)夾結(jié)構(gòu)。其中典型的錘頭結(jié)構(gòu)是由11～13個保守的核苷酸和三個莖構(gòu)成，而莖區(qū)是由互補堿基構(gòu)成的局部雙鏈結(jié)構(gòu)，將保守的核苷酸包圍著構(gòu)成的催化中心；典型的發(fā)夾型結(jié)構(gòu)是由50個核苷酸組成，包括四個螺旋區(qū)、三個連接區(qū)和兩個環(huán)。

(2)根據(jù)其催化功能的不同，可將核酶分為剪切型核酶和剪接型核酶兩大類：

剪切型核酶是只剪不接，能夠催化自身RNA或不同的RNA分子切下特異的核苷酸序列；剪接型核酶具有序列特異性的內(nèi)切核酸酶、RNA連接酶等多種酶的活性，它既能切割RNA分子，也能通過轉(zhuǎn)酯反應(yīng)形成新的磷酸二酯鍵，連接切割后的RNA分子。

(3)核酶的生物學(xué)意義：

①RNA為生物催化劑，具有重要生物學(xué)意義。

②打破了酶是蛋白質(zhì)的傳統(tǒng)觀念。

③在生命起源問題上，為先有核酸提供了依據(jù)。

④為治療破壞有害基因，腫瘤等疾病提供手段。17.參考答案：抗終止子是能夠在特定位點阻止轉(zhuǎn)錄終止的一類蛋白質(zhì)。依賴ρ因子的終止子上游有抗終止信號(靠近PL的nutL，靠近tR1的nutR)，在RNApol到達終止子之前，抗終止蛋白和nut位點的結(jié)合，等待RNApol經(jīng)過時修飾RNApol的構(gòu)象，拮抗寄主編碼的終止蛋白ρ的活性，使RNApol通過那些依賴ρ的終止子，轉(zhuǎn)錄得以繼續(xù)進行。18.參考答案：蛋白質(zhì)組是指一種生物或一個細胞、組織所表達的全套蛋白質(zhì)，即包括一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)組在生命進程中是動態(tài)變化的，會根據(jù)時間、空間和環(huán)境條件發(fā)生顯著的變化，因此不同器官、組織或細胞內(nèi)擁有不同的蛋白質(zhì)組。19.參考答案：Jacob和Monod通過大量實驗及分析提出來的，其內(nèi)容如下：Z、Y，A基因產(chǎn)物由同一條多順反子mRNA分子所編碼，該mRNA分子的啟動區(qū)(P)位于阻遏基因(I)與操縱區(qū)(0)之間，不能單獨起始半乳糖苷酶和透過酶基因的高效表達。操縱區(qū)是DNA上的一小段序列(僅為26bp)，是阻遏物的結(jié)合位點。當(dāng)阻遏物與操縱區(qū)相結(jié)合時，lacmRNA的轉(zhuǎn)錄起始受到抑制；誘導(dǎo)物通過與阻遏物結(jié)合，改變其三維構(gòu)象，使之不能與操縱區(qū)相結(jié)合，誘發(fā)lacmRNA的合成。20.參考答案：A21.參考答案：(1)蛋白質(zhì)Pull-down的實驗原理

利用GST與谷胱甘肽偶聯(lián)的瓊脂糖球珠的親和性，從混合蛋白質(zhì)樣品中純化得到相互作用蛋白。利用重組技術(shù)將探針蛋白與GST融合，將融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹脂上。當(dāng)與融合蛋白有相互作用的蛋白通過層析柱時就可被吸附而分離，從而證實兩種蛋白間的相互作用或篩選相應(yīng)的目的蛋白。

(2)蛋白質(zhì)Pull-down的主要步驟

①GST融合蛋白先與下列蛋白溶液之一孵育，包括：a.單一明確的重組蛋白；b.細胞裂解蛋白混合液；c.體外翻譯cDNA表達得到的未知蛋白。

②混合液與谷胱甘肽瓊脂糖球珠在4℃反應(yīng)2h，離心得沉淀。

③沉淀加入LoadingBuffer煮沸3min，高速離心，取上清液進行SDS電泳。

④考馬斯亮藍對SDS膠進行染色，觀察特異沉降的蛋白帶，接著進行質(zhì)譜分析確定沉降的蛋白；或?qū)﹄娪竞蟮哪z做Westernblotting來確定沉降的蛋白中是否含有目的蛋白。22.參考答案：在cDNA合成過程中，選用活性較高的反轉(zhuǎn)錄酶及甲基化dCTP，在cDNA兩端加上不同內(nèi)切酶所識別的接頭序列，可以保證所獲得雙鏈cDNA的方向性。23.參考答案：(1)SDS上樣緩沖液成分

SDS、還原試劑(二硫蘇糖醇或β-巰基乙醇)、溴酚藍和甘油。

(2)SDS上樣緩沖液成分的作用及不加此成分的后果

①SDS

a.作用：SDS是一種陰離子去污劑，作為變性劑和助溶劑。SDS使蛋白質(zhì)本身的電荷變化被屏蔽，氫鍵被斷裂，疏水相互作用被取消，多肽被去折疊(二級結(jié)構(gòu)被破壞)，最后形成橢球形。

b.如果不加SDS，會使電泳條帶出現(xiàn)拖尾、紋理現(xiàn)象。

②還原試劑

a.作用：使半胱氨酸殘基之間的二硫鍵斷裂，蛋白質(zhì)完全去折疊，只根據(jù)亞基分子質(zhì)量分離。

b.如果不加還原試劑，在高分子質(zhì)量范圍會產(chǎn)生“鬼帶”。

③溴酚藍

a.作用：溴酚藍作為指示劑，用于指示樣品的遷移過程。溴酚藍呈藍色，而蛋白質(zhì)是白色，在SDS-凝膠中不明顯，且溴酚藍的相對分子量比蛋白質(zhì)(絕大部分)小，電泳時速度比蛋白質(zhì)稍快，因此當(dāng)溴酚藍到達電泳槽底部(可看藍色調(diào)帶)時，則電泳結(jié)束。

b.如果不加溴酚藍，則無法分辨蛋白質(zhì)電泳的條帶。

④甘油

a.作用：使樣品沉入孔底。

b.如果不加，會使樣品漂移影響電泳效果。24.參考答案：FISH技術(shù)即熒光原位雜交技術(shù)(fluorescenceinsituhybridization)是一種非放射性原位雜交方法，用特殊的熒光素標(biāo)記DNA探針，在染色體、細胞或組織切片標(biāo)本上進行DNA雜交，以檢測細胞內(nèi)DNA或RNA特定序列存在與否。

FISH技術(shù)和RFLE結(jié)合，可以精確地描述染色體長，短臂等結(jié)構(gòu)改變和染色體核型或復(fù)雜片段的性質(zhì)。在基因圖譜繪制中，F(xiàn)ISH和linkagemapping結(jié)合起來即使對具有高度多形態(tài)的基因位點也能較精確地確定下來。25.參考答案：D[解析]無義密碼子又稱終止密碼子，不編碼任何氨基酸，不能與tRNA的反密碼子配對，但能被終止因子或釋放因子識別，終止肽鏈的合成。終止密碼子包括UAG、UAA、UGA3種。26.參考答案：(1)2013年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎揭曉，美國、德國3位科學(xué)家詹姆斯·羅斯曼、蘭迪·謝克曼和托馬斯·聚德霍夫(JamesE.Rothman，RandyW.Schekman和ThomasC.Südhof)獲獎。

(2)獲獎理由是“發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)的主要運輸系統(tǒng)——囊泡運輸?shù)恼{(diào)節(jié)機制”RandySchekman發(fā)現(xiàn)了囊泡傳輸所需的一組基因；JamesRothman闡明了囊泡是如何與目標(biāo)融合并傳遞的蛋白質(zhì)機器；ThomasSüdhof則揭示了信號是如何引導(dǎo)囊泡精確釋放被運輸物的。

(3)該系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn)揭示了細胞生理學(xué)的一個基礎(chǔ)性過程，揭開了細胞物質(zhì)運輸和投遞的精確控制系統(tǒng)的面紗，而該系統(tǒng)的失調(diào)會帶來有害影響，并可導(dǎo)致諸如神經(jīng)學(xué)疾病、糖尿病和免疫學(xué)疾病等的發(fā)生。27.參考答案：Alternativesplicing的中文名稱為選擇性剪接，又稱可變剪接或變位剪接，是指在個體發(fā)育或細胞分化時有選擇性地越過某些外顯子或某個剪接點進行變位剪接，從而產(chǎn)生出組織或發(fā)育階段特異性mRNA的一種剪接方式。可變剪接可以保證各同源蛋白質(zhì)之間既具有大致相同的結(jié)構(gòu)或功能域，又具有特定的性質(zhì)差異，拓展了基因所攜帶的遺傳信息。28.參考答案：套索狀結(jié)構(gòu)是在真核生物RNA前體加工過程中，切除內(nèi)含子時，通過2'，5'-磷酸二酯鍵形成的一種特征性中間結(jié)構(gòu)。主要在前體mRNA的剪接過程中會形成該結(jié)構(gòu)。29.參考答案：遺傳密碼經(jīng)歷以下幾個破譯歷程：

(1)三聯(lián)體密碼的提出

1954年，物理學(xué)家GeorgeGamov根據(jù)DNA中存在四種核苷酸和蛋白質(zhì)中存在20種氨基酸的對應(yīng)關(guān)系，通過數(shù)學(xué)推理，得出三個核苷酸編碼一個氨基酸的結(jié)論。

(2)遺傳密碼子的驗證

①1961年Crick及其同事用噬菌體做實驗，證明遺傳密碼中三個堿基編碼一個氨基酸。

②1961年Nirenberg等人用各種人工合成模板在體外翻譯蛋白質(zhì)的方法破譯了遺傳密碼子；用核糖體結(jié)合技術(shù)測定密碼子中的核苷酸排列順序，歷經(jīng)4年時間，于1965年破譯了編碼20種天然氨基酸的密碼子。30.參考答案：A31.參考答案：新一代測序較之芯片技術(shù)優(yōu)點主要是高通量、低成本。(1)能夠通過對標(biāo)簽SNP進行GWAS(全基因組相關(guān)分析)分析找出不與周圍SNP連鎖的位點；(2)能夠?qū)w內(nèi)大量的體細胞突變進行系統(tǒng)性深度序列分析，闡明疾病的發(fā)生機制，服務(wù)于個性化醫(yī)療；(3)對全基因組有更敏感和更完整的覆蓋率，對序列的邊界有更好的分辨率，也能區(qū)分高度相似的序列；(4)能夠大規(guī)模鑒定各種順式調(diào)節(jié)因子并研究其功能，深入探所各種生命現(xiàn)象的調(diào)節(jié)機制；(5)可以發(fā)現(xiàn)新的轉(zhuǎn)錄物和變異體，準確定位轉(zhuǎn)錄起始位點；(6)適合小RNA測序，鑒定miRNA并對靶mRNA進行分析。32.參考答案：(1)反式作用因子的結(jié)構(gòu)特點

反式作用因子都含有DNA識別或結(jié)合域和轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域。

①DNA識別或結(jié)合域

包括：a．螺旋-轉(zhuǎn)折-螺旋(HTH)結(jié)構(gòu)；b．鋅指結(jié)構(gòu)；C．堿性-亮氨酸拉鏈(bZIP)結(jié)構(gòu)；d．堿性-螺旋-環(huán)-螺旋(bHLH)結(jié)構(gòu)。

②轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域

轉(zhuǎn)錄活化域有多種，通常依賴于DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域以外的30～100個氨基酸殘基。

包括：a．帶有負電荷的螺旋結(jié)構(gòu)；b．富含谷氨酰胺的結(jié)構(gòu)；C．富含脯氨酸的結(jié)構(gòu)。

(2)反式作用因子對基因表達的調(diào)控

①DNA識別或結(jié)合域?qū)虮磉_的調(diào)控

能夠直接地識別或間接地識別或結(jié)合在各類順式作用元件核心序列上，參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄效率。

②轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域?qū)虮磉_的調(diào)控

與其他轉(zhuǎn)錄因子相互作用，與DNA特異性區(qū)域結(jié)合，或者輔助轉(zhuǎn)錄。33.參考答案：依賴于ATP的蛋白酶；76；泛素[解析]生物體內(nèi)蛋白質(zhì)的降解是一個有序的過程。在大腸桿菌中，蛋白質(zhì)的降解是通過一個依賴于ATP的蛋白酶(稱為Lon)來實現(xiàn)的。當(dāng)細胞中出現(xiàn)錯誤的蛋白質(zhì)或半衰期很短的蛋白質(zhì)時，該酶就被激活。Lon蛋白酶每切除一個肽鍵消耗兩分子ATP。在真核生物中，蛋白質(zhì)的降解可能主要依賴于泛素。泛素是一類低相對分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)，只有76個氨基酸殘基，序列高度保守。34.參考答案：肺炎鏈球菌在老鼠體內(nèi)的毒性實驗；T2噬菌體感染大腸桿菌實驗[解析]肺炎鏈球菌轉(zhuǎn)化感染小鼠實驗，得出轉(zhuǎn)化因子是DNA的結(jié)論；Hershey的噬菌體侵染細菌實驗，進一步得出DNA是遺傳物質(zhì)的載體的結(jié)論。35.參考答案：CTD是RNA聚合酶Ⅱ最大亞基末端的羧基端結(jié)構(gòu)域，它是由以七氨基酸(Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser-)為重復(fù)單位的高度保守的重復(fù)序列組成的，磷酸化是CTD結(jié)構(gòu)的一個非常重要的特點，Ser-2和Ser-5是氨基酸發(fā)生磷酸化的兩個活躍位點。正是由于CTD結(jié)構(gòu)中具有了這些可發(fā)生磷酸化的位點，所以才有了RNA聚合酶Ⅱ的兩種不同類型RNAPⅡA和RNAPⅡO型，結(jié)構(gòu)上的不同也直接影響了它們各自的功能：RNAPⅡA與mRNA轉(zhuǎn)錄起始的階段有關(guān)，而RNAPⅡO則同轉(zhuǎn)錄的延伸過程有關(guān)?？梢酝ㄟ^構(gòu)建針對于S2和S5的磷酸化過程相關(guān)酶(TFⅡH、CDTK-I、Ser5PPPase)的特異性缺失突變體，檢測mRNA轉(zhuǎn)錄過程以及mRNA形態(tài)的改變，進而檢測不同的磷酸化模式的功能。36.參考答案：(1)真核生物轉(zhuǎn)錄元件組成

真核生物的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件主要包括：

①順式作用元件：啟動子和基因的調(diào)節(jié)序列。

②反式作用因子：能夠直接或間接識別或結(jié)合在順式作用元件上調(diào)控基因表達的蛋白質(zhì)或RNA。

(2)真核生物轉(zhuǎn)錄元件分類

①順式作用元件分類

a．啟動子

真核基因啟動子是指在基因轉(zhuǎn)錄起始位點(+1)及其5'上游100～200bp以內(nèi)的一組具有獨立功能的DNA序列，每個元件長度為7～20bp，是決定RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄起始位點和轉(zhuǎn)錄頻率的關(guān)鍵元件。

b．增強子

增強子是指能使與它連鎖的基因轉(zhuǎn)錄頻率明顯增加的DNA序列，增強效應(yīng)明顯且大多為重復(fù)序列。

C．沉默子

沉默子是指位于結(jié)構(gòu)基因附近，能抑制該基因轉(zhuǎn)錄表達的DNA序列。

②反式作用因子分類

a．轉(zhuǎn)錄因子(TF)

包括基本轉(zhuǎn)錄因子(識別啟動子元件)和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子(識別增強子或沉默子)。

b．共調(diào)節(jié)因子

不需要通過DNA-蛋白質(zhì)相互作用就可參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控。37.參考答案：B[解析]原核生物強終止子結(jié)構(gòu)為富含GC堿基的發(fā)夾+polyA鏈，若polyA突變?yōu)閜olyC，則轉(zhuǎn)錄終止效率明顯降低。38.參考答案：Mendel的遺傳學(xué)規(guī)律最先使人們對性狀遺傳產(chǎn)生了理性認識，他提出的“遺傳因子”后被命名為“基因”，而Morgan的基因?qū)W說則進一步將“性狀”與“基因”相偶聯(lián)，成為現(xiàn)代遺傳學(xué)的奠基石。Watson(美)和Crick(英)提出了DNA的反向平行雙螺旋模型，為充分揭示遺傳信息的傳遞規(guī)律鋪平了道路。39.參考答案：(1)RNA干擾的分子機制

RNA干擾(RNAi)是利用雙鏈小RNA高效、特異性降解細胞內(nèi)同源mRNA從而阻斷靶基因表達，使細胞出現(xiàn)靶基因缺失表型的現(xiàn)象。其分子機制是雙鏈RNA(dsRNA)是RNAi的觸發(fā)物，引發(fā)與之互補的單鏈RNA(ssRNA)的降解，較長雙鏈RNA經(jīng)過Dicer加工被降解形成21～25個核苷酸的siRNA，并有效地定位目標(biāo)mRNA。由siRNA中的反義鏈指導(dǎo)合成RISC(RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體)的核蛋白體，再由RISC介導(dǎo)切割目的mRNA分子中與siRNA反義鏈互補的區(qū)域，從而實現(xiàn)干擾靶基因表達的功能。

(2)RNA干擾的應(yīng)用前景

RNAi主要維持基因組穩(wěn)定、抑制轉(zhuǎn)基因表達和保護基因組免受外源核酸侵入。應(yīng)用前景如下：

①基因功能分析。RNAi技術(shù)投入少、周期短、操作簡單，適用于大規(guī)模篩選定位新的功能基因，使轉(zhuǎn)基因動物的構(gòu)建更簡便，為基因功能研究開辟新的途徑。

②信號傳導(dǎo)通路和細胞生長分化過程的研究。

③確認新的藥物靶標(biāo)的工具。

④基因治療。RNAi技術(shù)可以特異性抑制基因表達，有望用于癌癥、病毒感染、基因病等疾病，例如用于治療艾滋病和丙型肝炎等病毒性疾病。

⑤用于基因改造、基因敲除和基因表達調(diào)控。40.參考答案：參與DNA復(fù)制的酶和蛋白質(zhì)及其功能如下：

(1)DNA聚合酶：以母鏈DNA為模板，以四種dNTP為底物，催化新鏈不斷延長，合成起始時需要引物提供3'—OH。此外，DNA聚合酶還有核酸外切酶活性。

(2)解旋、解鏈兩類：包括DNA解鏈酶、單鏈結(jié)合蛋白和拓撲異構(gòu)酶。

①DNA解鏈酶：能使雙鏈DNA堿基對之間的氫鍵解開，每解開一對堿基，需消耗2個ATP。大部分DNA解鏈酶可沿后隨鏈模板的5'→3'方向并隨著復(fù)制叉前進而移動。

②單鏈結(jié)合蛋白：單鏈結(jié)合蛋白可以在遠低于解鏈溫度時使雙鏈DNA分開，并牢牢地結(jié)合在單鏈DNA上，保證被解鏈酶解開的單鏈在復(fù)制完成前能保持單鏈結(jié)構(gòu)，它以四聚體形式存在于復(fù)制叉處，待單鏈復(fù)制完成后才離開，重新進入循環(huán)。

③拓撲異構(gòu)酶：在復(fù)制過程中，隨著DNA的解旋，雙螺旋的盤繞數(shù)減少，而超螺旋數(shù)增加，使正超螺旋增加，未解鏈部分的纏繞更加緊密，形成的壓力使解鏈不能繼續(xù)進行。拓撲異構(gòu)酶能夠消除解鏈造成的正超螺旋的堆積及阻礙解鏈繼續(xù)進行的壓力，使復(fù)制得以延伸。

(3)引發(fā)酶：是一種特殊的RNA聚合酶，該酶以DNA為模板，催化合成一段RNA鏈即引物，復(fù)制時由DNA聚合酶從RNA引物3'端開始合成新的DNA鏈。

(4)DNA連接酶：連接DNA鏈3'—OH末端和另一DNA鏈的5'-P末端，使二者生成磷酸二酯鍵，從而把兩段相鄰的DNA鏈連成完整的鏈。41.參考答案：弱化作用是一種轉(zhuǎn)錄翻譯調(diào)控機制，核糖體沿著mRNA分子的移動的速率決定轉(zhuǎn)錄是進行還是終止。色氨酸操縱子中存在弱化作用，其中起信號作用的是色氨酰-tRNA的濃度。

(1)低色氨酸濃度時，tRNATrp少，翻譯通過兩個相鄰色氨酸密碼子的速度慢，當(dāng)4區(qū)被轉(zhuǎn)錄完成時，核糖體才進行到1區(qū)(或停留在兩個相鄰的色氨酸密碼子處)，這時的前導(dǎo)區(qū)結(jié)構(gòu)是2-3配對，不形成3-4配對的終止結(jié)構(gòu)，所以轉(zhuǎn)錄可繼續(xù)進行，直到將trp操縱子中的結(jié)構(gòu)基因全部轉(zhuǎn)錄。

(2)高色氨酸濃度時，核糖體可順利通過兩個相鄰的色氨酸密碼子，在4區(qū)被轉(zhuǎn)錄之前，核糖體就到達2區(qū)，使2-3不能配對，3-4區(qū)可以自由配對形成莖一環(huán)狀終止子結(jié)構(gòu)，轉(zhuǎn)錄停止，色氨酸合成終止。42.參考答案：(1)基本原理：在活細胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物，并將其隨機切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段，通過對目的片斷的純化與檢測，從而獲得能真實、完整地反映蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。

(2)基本過程：甲醛處理細胞，使DNA和蛋白質(zhì)固定在交聯(lián)狀態(tài)→超聲或酶法等處理，獲得一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段→加入目的蛋白的抗體，與靶蛋白-DNA復(fù)合物相互結(jié)合→加入ProteinA，結(jié)合抗體-靶蛋白-DNA復(fù)合物，并沉淀→對沉淀下來的復(fù)合物進行清洗，除去一些非特異性結(jié)合→得到富集的靶蛋白-DNA復(fù)合物→解除交聯(lián)，對純化富集的DNA-片斷進行PCR檢測與分析，獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。43.參考答案：拓撲異構(gòu)酶是指通過切斷DNA鏈中的磷酸二酯鍵，然后重新纏繞和封口來改變兩條鏈的環(huán)繞次數(shù)的酶。在復(fù)制過程中，隨著DNA的解旋，雙螺旋的盤繞數(shù)T減少，而超螺旋數(shù)W增加，使正超螺旋增加，未解鏈部分的纏繞更加緊密，形成的壓力使解鏈不能繼續(xù)進行。拓撲異構(gòu)酶能夠消除解鏈造成的正超螺旋的堆積，消除阻礙解鏈繼續(xù)進行的壓力，使復(fù)制得以延伸。44.參考答案：D[解析]A項，1962年，Wason(美)和Crick(英)因為在1953年提出DNA的反向平行雙螺旋模型而與Wilkins共獲諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎。B項，1993年，Mullis由于發(fā)明PCR儀而與加拿大學(xué)者Smith(第一個設(shè)計基因定點突變)共享諾貝爾化學(xué)獎。C項，2006年，美國科學(xué)家Fire和Mello揭示控制遺傳信息流動的機制——RNA干擾而獲諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎。45.參考答案：(1)成功提取mRNA，最關(guān)鍵的問題是抑制RNase酶活性。原因如下：

mRNA呈單鏈狀，容易受到核酸酶的攻擊。RNase酶非常穩(wěn)定，是導(dǎo)致RNA降解最主要的物質(zhì)。對RNA的操作要求比DNA操作更嚴格，要保證實驗環(huán)境、所用器皿及溶液均沒有RNA酶的污染，因此提取mRNA時最關(guān)鍵的問題是抑制RNase酶活性，如必須帶手套等。

(2)從總RNA中分離mRNA的原理如下：

①常用異硫氰酸胍-苯酚抽提法提取總RNA。原理是：Trizol試劑主要由異硫氰酸胍和苯酚組成，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯仿時，它可抽提酸性的苯酚；而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，使RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層主要為RNA，有機層主要為DNA和蛋白質(zhì)。

②常用寡(dT)-纖維素柱層析法獲得高純度mRNA。原理為：利用mRNA3'末端含有poly(A)的特點，當(dāng)RNA流經(jīng)寡(dT)纖維素柱時，在高鹽緩沖液的作用下，mRNA被特異性地結(jié)合在柱上，再用低鹽溶液或蒸餾水洗脫mRNA。經(jīng)過兩次寡(dT)纖維柱后可得到較高純度的mRNA。具體操作是：用polyATTractmRNA分離系統(tǒng)將生物素標(biāo)記的寡(dT)引物與細胞總RNA溫育，加入與微磁球相連的抗生物素蛋白以結(jié)合poly(A)mRNA，通過磁場吸附作用將po