醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座

器材準(zhǔn)備醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第1頁自然界中微生物已經(jīng)發(fā)覺微生物大約13萬5千種，被認(rèn)為非常危險有600種，在人間傳染病原微生物380種。這些微生物存在于地球各個角落，從嚴(yán)寒極地到酷熱赤道，從4.2千米地層深處到85千米高空（芽孢）,都有它們蹤跡。空氣、水、土壤、人體體表以及與外界相通腔道，都有不一樣種類和數(shù)量微生物存在。存在于人體消化道細(xì)菌超出800種，數(shù)量可達(dá)100萬億（1014），菌體重量1～1.5千克。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第2頁醫(yī)學(xué)微生物學(xué)試驗

綜合性試驗三(P38)空氣與人體體表細(xì)菌學(xué)檢驗空氣細(xì)菌學(xué)檢驗P38手指皮膚細(xì)菌學(xué)檢驗P41醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第3頁空氣細(xì)菌學(xué)檢驗P38

空氣是人類賴以生存環(huán)境之一，也是主要疾病傳輸媒介?？諝庵胁≡饕獊碜圆∪伺判刮锖头置谖?。這些污物，因風(fēng)吹，以及人類日?；顒?，以氣溶膠形式懸浮于空中，使空氣受到污染。環(huán)境：不利于微生物生長。種類：主要是病毒、真菌和細(xì)菌。在醫(yī)院，公共場所致病菌數(shù)量比較多。作用：可快速全球傳輸。危害：引發(fā)培養(yǎng)基、生物制品污染，病原菌引發(fā)呼吸道傳染病。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第4頁試驗方法：自然沉降法是依據(jù)空氣中細(xì)菌氣溶膠粒子，在地心引力作用下，以垂直自然方式沉降到培養(yǎng)基表面；培養(yǎng)以后，計數(shù)菌落形成單位（colonyformingunit，CFU），了解空氣污染情況。試驗步驟：每組1塊平板，選擇采樣地點（試驗室、宿舍、衛(wèi)生間、飯?zhí)没蛉芜x地點），將平板蓋打開，蓋朝下放置在平板旁，平板暴露于空氣中15分鐘，然后蓋上蓋子，作標(biāo)識。37℃溫箱培養(yǎng)24小時，觀察結(jié)果?！?/p>

CFU/m3＝50000N÷AT≈86N(直徑7cm平板）。

N：平板上菌落數(shù)。A：平板面積(平方厘米)。

T：采樣時間(分鐘)。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第5頁空氣細(xì)菌學(xué)檢驗組號地點時間(min)菌落形成單位(CFU)1衛(wèi)生間152食堂153門診大廳154呼吸科病房155呼吸科ICU156外科病房157外科ICU158外科治療室159嬰兒室1510試驗室15醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第6頁手指皮膚細(xì)菌學(xué)檢驗P41

在日常生活中，手接觸范圍廣，使用頻率高，受到污染機會也最多。一只外觀比較“潔凈”手，可攜帶10萬個細(xì)菌、200各種病毒。所以，經(jīng)手傳輸疾病很多，范圍很廣，包含腸道傳染病、部分呼吸道傳染病、皮膚傳染病，以及一切可經(jīng)手間接傳輸疾病。常住菌：存在于皮膚表面、毛囊和皮脂腺。種類和數(shù)量比較恒定。附著在皮膚上比較牢靠，用普通洗手方法，常不易去除。暫住菌：存在于皮膚表面經(jīng)常暴露部位。暫住菌是外來非正常菌群，種類和數(shù)量不定。引發(fā)人類致病通常是暫住菌。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第7頁醫(yī)務(wù)人員，經(jīng)常要與病人接觸，不論是直接接觸，還是間接接觸，都有傳輸病菌可能。即使病菌直接起源是患者,不過造成病菌擴(kuò)散主要路徑則是氣溶膠和醫(yī)務(wù)人員手。所以，經(jīng)常洗手和消毒是控制醫(yī)院內(nèi)交叉感染主要方法。實際上，預(yù)防感染辦法中，最簡單又十分有效方法就是洗手。據(jù)測定，只用自來水洗手可使暫住菌總數(shù)降低40%，用肥皂洗手可降低80%以上。洗手？醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第8頁常規(guī)洗手方法（甲和丙操作）將手充分浸濕，涂抹肥皂或洗滌液。重復(fù)搓揉雙手，搓揉時間不應(yīng)少于30秒。用流水沖洗潔凈，整個洗手過程不少于1分鐘?！苡行У厝コ蠖鄶?shù)手上暫住菌。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第9頁醫(yī)學(xué)微生物學(xué)試驗室標(biāo)準(zhǔn)洗手方法（乙和丁操作）用流動水沖洗，將手充分浸濕，涂抹肥皂、洗滌液。分別搓擦10～15次。保持雙手低于肘部，流水沖洗一分鐘以上。1.掌心對掌心搓擦2.手指交織掌心對手背搓擦3.手指交織掌心對掌心搓擦4.兩手互握互搓指背5.拇指在掌中轉(zhuǎn)動搓擦6.指尖在掌心中搓擦醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第10頁1.掌心對掌心搓擦2.手指交織掌心對手背搓擦3.手指交織掌心對掌心搓擦4.兩手互握互搓指背5.拇指在掌中轉(zhuǎn)動搓擦6.指尖在掌心中搓擦醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第11頁醫(yī)務(wù)人員洗手指征接觸傳染病患者之后。接觸攜帶多耐藥性細(xì)菌病人之后。接觸病人血液、體液、分泌物和排泄物之后。接觸高危病室兩個病人之間、新生兒室兩個新生兒之間。接觸舊錢幣之后。上廁所前后。進(jìn)行微生物操作或作血、尿等生化、免疫測定之后。在施行各種手術(shù)前后。診療、治療、護(hù)理尤其易感染病人之前。進(jìn)食之前。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第12頁132

4132

4手指皮膚細(xì)菌學(xué)檢驗第1格為洗手前，第2格為洗手后，第3格為消毒后，第4格空白對照。

2人1塊平板上:甲、丙→常規(guī)洗手下:乙、丁→標(biāo)準(zhǔn)洗手甲（丙）乙（?。┍♂t(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第13頁醫(yī)學(xué)微生物學(xué)試驗

綜合性試驗一(P2)膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌檢測（二）臨床標(biāo)本檢驗程序細(xì)菌分離與培養(yǎng)P7※目標(biāo)要求：掌握分離、純化微生物基本操作技術(shù)。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第14頁常見病原性球菌檢驗程序P47：直接涂片、革蘭染色、鏡檢膿汁、痰、咽部分泌物觀察菌落性狀、溶血性、色素血瓊脂平板培養(yǎng)涂片染色鏡檢挑取可疑菌落生化反應(yīng)↑純培養(yǎng)動物試驗藥敏試驗血液、穿刺液→肉湯增菌培養(yǎng)→培養(yǎng)液涂片染色境檢常見腸道致病菌檢驗程序P48：糞便→SS瓊脂、伊紅美藍(lán)平板培養(yǎng)→挑取可疑菌落↑↓血清學(xué)判定血、骨髓→增菌培養(yǎng)雙糖鐵培養(yǎng)基染色鏡檢生化反應(yīng)

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第15頁平板劃線分離法：借助于劃線，將混雜各種細(xì)菌，在固體培養(yǎng)基表面分散成單個細(xì)菌，并固定在某一點上。培養(yǎng)以后細(xì)菌各自分裂繁殖，形成肉眼可見細(xì)菌集團(tuán)?！钤诠腆w培養(yǎng)基表面或基內(nèi)，由單個細(xì)菌在局部位置不停增值稠密群體稱為單菌落?！钤诠腆w培養(yǎng)基表面，由多個菌落融合在一起形成細(xì)菌堆積物,稱為菌苔。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第16頁平板分區(qū)劃線分離法步驟（5區(qū)）接種環(huán)燒灼滅菌，以免污染標(biāo)本。取標(biāo)本在平板表面上方密集涂布5～10mm2。燒掉接種環(huán)上多出標(biāo)本（火焰后面烤干→燒灼）?；蝿悠桨?，當(dāng)看到平板表面象鏡面有反光時候，保持這個角度，劃線時就能看清劃線痕跡，方便控制劃線。接種環(huán)與平板呈30～40度角，經(jīng)過密集涂布部分1～3次，使接種環(huán)重新沾上少許標(biāo)本(細(xì)菌)，然后在平板表面，以曲線形式，作大幅度往返連續(xù)劃線，邊劃邊退，線段要劃得長而密集，每區(qū)劃線不少于30條。轉(zhuǎn)動平板，接種環(huán)經(jīng)過第一區(qū)1次，一樣方法劃第二區(qū)。如此依次劃完3～5區(qū)。接種環(huán)燒灼滅菌（火焰后面烤干→燒灼），以免污染環(huán)境。將平板倒置（蓋在下，底朝上），37℃培養(yǎng)18～24h

。★要充分利用平板面積，5區(qū)間隔盡可能小，不能劃破瓊脂。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第17頁5～10mm2↓↙＞30條線平板劃線不少于150條線醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第18頁平板劃線分離法P8甲→膿汁標(biāo)本→普通平板（黃色）乙→膿汁標(biāo)本→普通平板丙→糞便標(biāo)本→伊紅美藍(lán)（紫色）丁→糞便標(biāo)本→伊紅美藍(lán)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第19頁試驗分組倆倆相對4人為一組,組號編在電源插座上。每組按從前到后,從左到右次序，分別編號為甲、乙、丙、丁。

甲乙

4丙丁甲乙

3丙丁甲乙

2丙丁甲乙

1丙丁甲乙

5丙丁甲乙

8丙丁甲乙

7丙丁甲乙

6丙丁甲乙

10丙丁甲乙

9丙丁

講臺醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第20頁接種環(huán)燒灼滅菌使用前，直接在酒精燈上燒灼滅菌，把環(huán)和金屬絲燒紅即可。使用后，先在火焰后面將把環(huán)上標(biāo)本烤干，再燒灼滅菌，以免標(biāo)本汽化，爆烈四濺，污染環(huán)境。金屬桿快速經(jīng)過火焰2～3次，殺滅表面微生物醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第21頁接種環(huán)直徑3mm環(huán)面垂直離開液面：快速3ul,慢速1ul。環(huán)面水平離開液面：快速6ul,慢速2ul。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第22頁醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第23頁醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第24頁接種環(huán)與平板接觸點和劃線方法？醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第25頁醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第26頁5～10mm2↓↙＞30條線平板劃線不少于150條線醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第27頁37℃培養(yǎng)24小時

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第28頁37℃培養(yǎng)24小時

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第29頁37℃培養(yǎng)24小時

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第30頁37℃培養(yǎng)24小時

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第31頁安全警告接種環(huán)接種平板一次，可產(chǎn)生幾十個微生物氣溶膠顆粒。氣溶膠粒徑＞100um沉降很快，＜50um在0.4s內(nèi)擴(kuò)散開，＜5um經(jīng)過呼吸道直接抵達(dá)肺泡。Pike博士對試驗室感染統(tǒng)計分析結(jié)果發(fā)覺，不明原因感染高達(dá)82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴(kuò)散引發(fā)。試驗時應(yīng)坐著，在酒精燈半徑20厘米范圍內(nèi)操作，保持平靜、有序，盡可能少說話、少走動，以免感染病原菌。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第32頁思索題為何取鏈球菌作為空氣衛(wèi)生指標(biāo)之一?為何金黃色葡萄球菌是醫(yī)院內(nèi)感染常見主要病原菌?為何接種環(huán)使用前后必須燒灼滅菌？忽略了有什么危害?做細(xì)菌培養(yǎng)時，平板為何要倒置?培養(yǎng)細(xì)菌慣用方法有哪些?從臨床標(biāo)本中分離病原菌，應(yīng)注意哪些事項?醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測專家講座第33頁試驗內(nèi)容空氣細(xì)菌學(xué)檢驗P38普通平板(1組1塊）手指皮膚細(xì)菌學(xué)檢驗P41普通平板(2人1塊→劃分8格）平板劃線分離法P8

甲，乙→膿汁標(biāo)本→普通平板(黃色，1人1塊）丙，丁→糞便標(biāo)本→伊紅美藍(lán)(紫色，1人1塊