2023年動物肝臟中DNA的提取及檢測實驗報告

年動物肝臟中DNA的提取及檢測實驗報告:..代后期,查加夫〔〕發(fā)覺不同物種的堿基組成不同,但其中的腺嘌呤數(shù)等于其胸腺嘧啶數(shù)〔=〕,鳥嘌呤數(shù)等于胞嘧啶數(shù)〔=〕,因而嘌呤數(shù)之和等于嘧啶數(shù)之和,一般用幾個層次描繪的結(jié)構(gòu)。

濃鹽法從動物組織中提取核酸和蛋白質(zhì)在生物體中常以核蛋白〔〕的形式存在,其中能溶于水及高濃度鹽溶液,,而那么可溶于低鹽溶液,因此可利用不同濃度的溶液將其從樣品中分別抽提出來。

將抽提得到的用處理可將其別離和蛋白質(zhì),用***仿-異戊醇將蛋白質(zhì)沉淀除去可得上清,參與冷乙醇即可將其呈纖維狀析出。

肝臟細胞肝臟是由肝細胞組成,肝細胞微小,肉眼看不到,必需通過顯微鏡才能看到。

人肝約有25億個肝細胞,5000個肝細胞組成一個肝小葉,因此人肝的肝小葉總數(shù)約有50萬個。

肝細胞為多角形,直徑約為20-30加微米,有6-8個面,不同的生理條件下大小有差異,如饑餓時肝細胞體積變大。

每個肝細胞外表可分為竇狀隙面、肝細胞面和膽小管面三種。

肝細胞里面含有許很多多簡單的微小結(jié)構(gòu):如肝細胞核、肝細胞質(zhì)、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體、高爾基氏體、微粒體及飲液泡等組成。

二、試驗?zāi)康?..、試驗原理核酸和蛋白質(zhì)在生物體中常以核蛋白〔〕的形式存在,其中能溶于水及高濃度鹽溶液,,而那么可溶于低鹽溶液,因此可利用不同濃度的溶液將其從樣品中分別抽提出來。

將抽提得到的用處理可將其別離和蛋白質(zhì),用***仿-異戊醇將蛋白質(zhì)沉淀除去可得上清,參與冷乙醇即可將其呈纖維狀析出。

四、試驗器材和材料試劑試驗器材:①勻漿器②量筒③離心機④離心管⑤試管⑥吸管⑦恒溫水浴鍋試驗材料:①豬肝:..試驗試劑:①-〔〕②95%乙醇〔.〕③固體〔.〕④5%溶液〔5定容至100〕⑤***仿:〔異戊醇〕20:1的混合液五、①稱取肯定質(zhì)量的豬肝,-〔已完成〕。

①量取肝糜4于10毫升離心管,在4000下離心10,沉淀中再參與8緩沖液于4000離心5;②棄上清,取沉淀;③將沉淀用10檸檬酸鈉緩沖液完全洗入潔凈的小燒杯、參與5***仿-異戊醇混合液、1,振蕩30〔保鮮膜封口〕;④緩慢參與固體〔〕,使其最終濃度為1;⑤將溶液分裝到2個10毫升離心管中,在4000離心5,取上清水相;⑥在上述水相溶液中分別加等體積冷95%乙醇,邊加邊用玻棒漸漸朝一個方向攪動,將纏繞在玻棒上的凝膠狀物用濾紙吸去多余的:..乙醇,即得粗品;⑦用8蒸餾水溶解粗品于10離心管中。

,混勻,于60℃恒溫水浴鍋45,冷卻后,在595波長下于分光光度計比色測定,以吸光度對濃度作圖,制作標準曲線。

.***,,參:..,混勻。

然后精確?????參與二苯***,混勻,于60℃恒溫水浴鍋45,冷卻后,595波長下于分光光度計比色測定,依據(jù)所測的吸光度對比標準曲線求得的質(zhì)量〔〕。

=12100%:的質(zhì)量分數(shù)〔%〕1:樣液中測得的的質(zhì)量〔〕2:樣液中所含樣品的質(zhì)量〔〕六、.***.:..=12100%得:=%那么100豬肝中含量為:100=、、、***仿-異戊醇、、檸檬酸鈉分別有:..什么作用答:①檸檬酸的鈉鹽在試驗中既充當酶的抑制劑,也是緩沖溶液;②是外表活性劑,可以讓蛋白質(zhì)與分開;③***仿是有機溶劑,可以使蛋白質(zhì)聚集沉淀,便于別離出去;④異戊醇是消泡劑,可以削減泡沫的發(fā)生;⑤***仿-異戊醇的作用是使蛋白質(zhì)變性、膜溶解;⑥固體溶解使得試液成為高濃度的鹽溶液,在這樣的環(huán)境中核蛋白能溶解,核蛋白那么溶解度很低,可以利用這一性質(zhì)別離兩種核酸。

八、,因此,通常選用細胞核含量比例大的生活組織作為提取制備的材料,小牛胸腺組織中細胞核比例較大,因而含量豐富,同時其脫氧核苷酸酶活性較低,制備過程中被降解的可能性相對較低,所以是制備的良好材料,但其來源較困難,脾臟或肝臟易獲得,也是試驗室制備常用的材料,本試驗用新奇肝臟作為試驗材料。

,須實行以下措施:整個過程必需在低溫下進行,可參與某些物質(zhì)抑制核酸酶的活性,如檸檬酸鈉、、等,是抑制核酸酶的活性最好的抑制劑。

:..,常常采納的有:***仿-異丙醇法、苯酚法、去垢劑法等,他們均能使蛋白質(zhì)變性和核蛋白解聚,并釋放出核酸。

,對稱放置的離心管必需用天平調(diào)平衡。

,如研磨過程、攪拌過程等。

九、試驗結(jié)果誤差分析及爭論經(jīng)過對本次試驗結(jié)果進行分析,,在上網(wǎng)查閱相關(guān)資料后發(fā)覺:豬肝中含量與本次試驗實際操作測量得出的結(jié)果大致相互吻合。

由此可知,本次試驗結(jié)果是相比照擬勝利的,較為粗略地測量出豬肝中的含量,并且較為嫻熟地把握了濃鹽法從動物組織中提取的原理與技術(shù),根本到達了本次試驗的目的。

但是本次試驗結(jié)果只是粗略測量,并未到達精確測量豬肝中的含量,且試驗數(shù)據(jù)較理論值偏低,這是由于某些誤差導致,在試驗過程中些許因素可能會導致試驗結(jié)果數(shù)據(jù)有偏差,經(jīng)分析得出以下幾點:①在稱取豬肝后參與檸檬酸鈉緩沖液進行研磨的過程中,由于豬肝組織外表較滑不易磨碎,且研磨至最終照舊有小局部豬肝組織塊殘留,因此可能導致豬肝中提取不充分,致使試驗數(shù)據(jù)較理論值偏低;②研磨過程中,可能由于操作不當,導致局部液體濺出,因此可:..能使得提取液中局部損失,導致試驗數(shù)據(jù)偏低;③在粗提取操作中,頻繁地將提取液轉(zhuǎn)移至各個儀器內(nèi),可能有微小局部提取液未倒凈,殘留在儀器壁上損耗掉,導致試驗誤差;④在使用移液槍的過程中,可能由于操作不當或移液槍常常錯誤使用,消失儀器誤差,導致吸取的樣液不精確,消失試驗誤差;⑤在水相中參與乙醇析出時,不是全部均析出,有小局部照舊融在溶液,導致提取出的含量偏低;⑥標準曲線制作過程中消失些許誤差;總的來講,本次試驗結(jié)果是相比照擬勝利的,較為粗略地測量出豬肝中的含量,并且較為嫻熟地把握了濃鹽法