基因表達載體構(gòu)建_第1頁
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文檔簡介

二基因表達載體的構(gòu)建思考與討論：1基因載體必須具備的基本條件是什么？2基因工程可做載體的結(jié)構(gòu)有那些？最常使用的載體是什么？3請圖示大腸桿菌質(zhì)粒結(jié)構(gòu)。4從蘇云金芽孢桿菌細胞DNA分子中提取得到Bt毒蛋白基因能否直接進入普通棉細胞中？如果把目的基因人工注射到普通棉細胞中，那么該基因在棉細胞中會穩(wěn)定存在，復(fù)制和表達嗎？5假如你是一個基因工程操作者，若使目的基因進入棉細胞，并能在棉細胞中遺傳和表達，你應(yīng)當采取什么辦法？你能說出其中的理由嗎？（一）基因表達載體的構(gòu)建2請你定義：基因表達載體構(gòu)建之含義？1基因工程操作中，構(gòu)建基因表達載體之目的是什么？

將目的基因、啟動子和終止子科學(xué)按裝在經(jīng)修飾和改造完備的載體之上。確保目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在、復(fù)制、遺傳和表達，使其發(fā)揮作用。3基因表達載體之基本組成是什么？（1）結(jié)構(gòu)基因——即提取的目的基因核苷酸序列，負責編碼目標蛋白質(zhì)。（2）啟動子——位于編碼蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)基因之首一段殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，RNA聚合酶的識別部位和結(jié)合部位。（3）終止子——位于編碼蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)基因末端一段特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，具有終止基因轉(zhuǎn)錄過程的作用。（4）復(fù)制原點——能夠自我復(fù)制保證目的基因在受體細胞中復(fù)制遺傳和表達。（5）遺傳標記基因——檢測受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。請你以質(zhì)粒作載體構(gòu)建基因表達載體之模式圖基因表達載體基因表達載體啟動子復(fù)制原點終止子插入目的基因遺傳標記基因4建構(gòu)基因表達載體方法（2）用同種限制酶切割目標DNA分子，截取目的基因，使其產(chǎn)生與質(zhì)粒相同的末端。（1）用某種限制酶如EcoRI限制酶，在基因插入位點切割質(zhì)粒，使質(zhì)粒出現(xiàn)一個切口，露出兩個黏性末端。（3）依據(jù)目的基因表達的特點和位置，用限制酶切割受體細胞相應(yīng)的控制元件——啟動子和終止子。（4）用限制酶將啟動子和終止子與目的基因連接起來，成為一個整體。（5）將目的基因插入質(zhì)粒切口處，用E?coliDNA連接酶把基因與質(zhì)粒縫合起來

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