促胃腸動(dòng)力藥物篩選-離體組織課件

促胃腸動(dòng)力藥物篩選—離體組織、器官水平藥物篩選武漢大學(xué)藥學(xué)院藥理系促胃腸動(dòng)力藥物篩選武漢大學(xué)藥學(xué)院11．了解離體器官試驗(yàn)特點(diǎn)及注意事項(xiàng)，掌握離體器官試驗(yàn)的基本技術(shù)。2．學(xué)習(xí)利用離體器官進(jìn)行藥物篩選的方法，觀察受試物對(duì)離體胃、腸平滑肌的影響。3．了解科研課題設(shè)計(jì)原則，科研課題立項(xiàng)需闡述的相關(guān)內(nèi)容。4．了解科研論文寫作規(guī)范（包括圖表制作技巧等）。5．掌握試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、處理方法。目的1．了解離體器官試驗(yàn)特點(diǎn)及注意事項(xiàng)，掌握離體器官試驗(yàn)的基本技2離體器官試驗(yàn)常用的離體器官有心臟、血管、腸段、子宮及神經(jīng)肌肉標(biāo)本，用離體標(biāo)本可比較直觀地觀測藥物的作用。不同的動(dòng)物標(biāo)本用于測定不同類的藥物作用。背景知識(shí)離體器官試驗(yàn)常用的離體器官有心臟、血管、腸段、子宮及神3

在離體器官法中，不同動(dòng)物的不同器官都要求最適宜的營養(yǎng)環(huán)境，因此各種動(dòng)物的人工生理溶液成份和配制都有區(qū)別。在離體器官研究中應(yīng)特別引起重視。背景知識(shí)滲透壓：要等滲，但不同動(dòng)物對(duì)同一物質(zhì)的等滲濃度要求不同。如生理鹽水溶液，冷血?jiǎng)游镉?.6～0.75%；溫血?jiǎng)游镉?.8%～0.9%。各種離子：一定比例的不同電解質(zhì)離子Na+、K+、Ca2+、Mg2+、H+、OH-等是維持組織器官功能所必須。組織器官不同，對(duì)生理溶液中離子的成份和濃度要求亦不同。pH影響：人工生理鹽水中pH一般要求為中性，對(duì)于哺乳動(dòng)物心臟冠狀動(dòng)脈，酸性生理深夜可使平滑肌松馳；堿性則可使節(jié)律加快，振幅縮小。其它條件：葡萄糖提供組織活動(dòng)所需能量，臨用時(shí)再加入，以防變質(zhì)；有的離體器官需要氧氣，如離體子宮、離體兔心、乳頭肌等。而離體腸管通以空氣就可以了。在離體器官法中，不同動(dòng)物的不同器官都要求最適宜的營養(yǎng)環(huán)4

世界衛(wèi)生組織調(diào)查表明，我國有80%的人患有不同程度胃腸病居世界首位。近年來，功能性胃腸病已受到廣泛的關(guān)注，如功能性消化不良、腸胃激綜合征、功能性便秘等，，西方國家人群患病率為5%～24%，每年花費(fèi)高額的醫(yī)療費(fèi)用，患者的生存質(zhì)量亦受到不同程度的影響。在最常見造成工作、學(xué)習(xí)缺勤的疾病中，腸易激綜合征的發(fā)病率僅次于普通感冒.目前主要采用解痙劑治療，但只能緩解腹痛，不能治療便秘。而緩瀉劑能緩解便秘，但不能緩解腹痛、腹脹，而且不能長期服用。因此，研究開發(fā)新的調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力的藥物有重要的社會(huì)效益和廣闊的市場前景。背景知識(shí)世界衛(wèi)生組織調(diào)查表明，我國有80%的人患有不同5背景知識(shí)甲氧氯普胺

第一代第二代多潘立酮

它可作用于胃腸道和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，兼有促動(dòng)力和止吐的功效。可增加食管下端括約肌的張力，使其壓力增加加強(qiáng)胃內(nèi)固體和液體的排空，還可協(xié)調(diào)胃竇和十二指腸運(yùn)動(dòng)，對(duì)腸道無明顯作用第三代西沙比利它對(duì)整個(gè)胃腸道包括從食管到肛門括約肌均有促動(dòng)力作用，能增強(qiáng)生理反應(yīng)，恢復(fù)正常的動(dòng)力模式。臨床常用促動(dòng)力藥

中藥百合、烏藥、幟實(shí)、虎杖

最突出的特點(diǎn)在于標(biāo)本兼治，但作用機(jī)制不明確，組方尚缺少現(xiàn)代藥理學(xué)研究的支持。通過離體胃腸平滑肌試驗(yàn)，探討藥物作用機(jī)制、組方依據(jù)，為新藥提供線索。背景知識(shí)甲氧氯普胺第一代第二代多潘立酮它可作用于胃腸道加6教學(xué)試驗(yàn)安排

（一）教學(xué)分組在一個(gè)教學(xué)單元內(nèi)，根據(jù)學(xué)生人數(shù)，將學(xué)生分為8組，每組2～5人，并分成上下兩班，4組/班。（二）試驗(yàn)方案

1．上半班采用胃平滑肌作為試驗(yàn)材料，建議受試物：百合、或?yàn)跛?、或幟?shí)、或虎杖、或四藥合并的水提取物，也可采用各教學(xué)單位自行提取的物質(zhì)，用于篩選。西藥對(duì)照：胃復(fù)安、西沙必利。2．下半班采用腸平滑肌作為試驗(yàn)材料，建議受試物：百合、或?yàn)跛?、或幟?shí)、或虎杖、或四藥合并的水提取物，也可采用各教學(xué)單位自行提取的物質(zhì)，用于篩選。西藥對(duì)照：胃復(fù)安、西沙必利。教學(xué)試驗(yàn)安排（一）教學(xué)分組在一個(gè)教學(xué)單元內(nèi)，根據(jù)學(xué)生人數(shù)，7試驗(yàn)方法及步驟

（一）試驗(yàn)材料1．動(dòng)物：大鼠（220～280g/只），雄性。2．器材：恒溫平滑肌槽1臺(tái)、通氣泵1個(gè)、鐵支架1個(gè)、止水夾2個(gè)，生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，張力換能器，1ml注射器4個(gè)，培養(yǎng)皿1個(gè)，50ml燒杯1個(gè)，組織剪、眼科剪各1把，止血鉗兩個(gè)，鑷子兩個(gè)，絲線若干，移液器一個(gè)，砝碼一個(gè)。3．試劑：臺(tái)氏液。4．受試藥：0.5%胃復(fù)安溶液；0.1%西沙必利溶液；20%百合水提取物；10%烏藥水提取物；15%幟實(shí)水提取物；15%虎杖水提取物；15%四藥合并的水提取物。試驗(yàn)方法及步驟（一）試驗(yàn)材料1．動(dòng)物：大鼠（220～2808試驗(yàn)方法及步驟

（二）試驗(yàn)步驟1．對(duì)大鼠離體胃平滑肌正常張力的影響試驗(yàn)。（1）制備胃肌條標(biāo)本：斷頭處死，立即剖取胃底部浸泡于臺(tái)氏液液中，制備成“Z”型，長約2.5cm、寬約0.4cm的胃肌條標(biāo)本。（2）沖洗浴槽，并在其中加入臺(tái)氏液30ml（標(biāo)線處），加熱，維持水溫在37℃～38℃。調(diào)節(jié)通氣泵，緩慢通入氣泡，并調(diào)節(jié)1～2個(gè)氣泡/秒。（3）取標(biāo)本，兩端對(duì)角處用絲線結(jié)扎。一端掛在通氣鉤上，放入浴槽，另一端從張力換能器的彈簧片小孔中穿出并掛上1g砝碼（給予負(fù)荷），打開計(jì)算機(jī)，進(jìn)入生物信號(hào)采集系統(tǒng)，選擇“張力通道”，觀察活動(dòng)曲線。待其平衡后，用絲線將掛砝碼的絲線牢牢固定于彈簧片上，除去砝碼。（4）待標(biāo)本在浴槽內(nèi)穩(wěn)定10min左右，記錄一段正常活動(dòng)曲線，然后用注射器依次向浴槽中滴加藥液0.2ml。每加一組藥時(shí)立即標(biāo)記，并觀察、記錄2min頻率及收縮幅度。每次藥物作用后，用溫暖的臺(tái)氏液沖洗2～3次，待張力恢復(fù)基線（約5min）后再試驗(yàn)其他藥物。（5）停止記錄曲線，保存數(shù)據(jù)。斷電斷氣，取出回腸，沖洗浴槽。試驗(yàn)方法及步驟（二）試驗(yàn)步驟1．對(duì)大鼠離體胃平滑肌正常張力9試驗(yàn)方法及步驟

2．對(duì)大鼠離體胃平滑肌正常張力的影響試驗(yàn)。打開腹腔，找到回盲部，在離其2～3cm的回腸處剪斷，取出回腸，置于盛有臺(tái)氏液的培養(yǎng)皿中，沿腸壁分離并剪去腸系膜，將腸管剪成數(shù)段，輕輕沖出腸內(nèi)容物，最后將腸管剪成2～3cm的小段備用。加樣順序與操作同上。試驗(yàn)方法及步驟2．對(duì)大鼠離體胃平滑肌正常張力的影響試驗(yàn)。打10試驗(yàn)結(jié)果的原始記錄

給藥前1min內(nèi)的平均值給藥后第1min內(nèi)的平均值給藥后第2min內(nèi)的平均值頻率振幅頻率振幅頻率振幅0.5%胃復(fù)安溶液0.1%西沙必利溶液

20%百合水提物10%烏藥水提物

15%幟實(shí)水提物15%虎杖水提物15%四藥合并水提物表1藥物對(duì)大鼠胃或腸平滑肌作用測定原始數(shù)據(jù)

試驗(yàn)結(jié)果的原始記錄給藥前給藥后給藥后頻率振幅頻率振幅頻率振11結(jié)果處理

上下班分別收集4組試驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算平均值及標(biāo)準(zhǔn)差，根據(jù)擬研究題目，設(shè)計(jì)表格，并與給藥前相比，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)差異檢驗(yàn)。示范表格如下。促進(jìn)率（%）=（給藥后值-給藥前值）/給藥前值×100%收縮頻率促進(jìn)率（%）1min2min1min2min0.5%胃復(fù)安溶液0.1%西沙必利溶液20%百合水提物10%烏藥水提物15%幟實(shí)水提物15%虎杖水提物15%四藥水提物表2受試物對(duì)大鼠胃或腸平滑肌收縮頻率的影響（χ±SD，n=4）

結(jié)果處理上下班分別收集4組試驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算平均值及標(biāo)準(zhǔn)差，根12試驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容及格式要求

（一）題目根據(jù)你的理解或興趣，可將報(bào)告題目擬定為：1．“胃復(fù)安、西沙必利對(duì)胃腸平滑肌作用特征比較”或2．“中藥促胃腸動(dòng)力藥篩選及組方依據(jù)研究”或3．“中、西藥促胃腸動(dòng)力作用特征研究”或4．自定。（二）研究背景及意義根據(jù)選擇的題目，說明研究背景、立題依據(jù)、研究意義。（三）試驗(yàn)方法根據(jù)選擇的題目，描述試驗(yàn)方法（剔除不必要的試驗(yàn)方法）。（四）試驗(yàn)結(jié)果根據(jù)選擇的題目，選擇所需的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，以圖或表的形式描述結(jié)果。（五）討論分析結(jié)果，引用相關(guān)文獻(xiàn)，并進(jìn)行充分討論。試驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容及格式要求（一）題目13注意事項(xiàng)

1．沖洗和分離腸管時(shí)動(dòng)作應(yīng)輕柔，盡量避免牽拉腸管。2．標(biāo)本制備好后，放在盛有溫暖臺(tái)氏液的培養(yǎng)皿中保存，以免影響標(biāo)本的反應(yīng)性。在整個(gè)操作過程中，盡量使腸段在溫暖的臺(tái)氏液而不是在空氣中。3．腸管兩端穿線時(shí)，切勿將腸管縫死，只需穿過一層腸壁，靠端的位置恰到好處。4．通氣時(shí)使氣泡呈小米粒大小均勻上升，水泡不宜過多或過少。5．將腸管放入裕管時(shí)，注意腸管和連線都不要觸及管壁；在用砝碼標(biāo)定后，調(diào)節(jié)連線松緊度，用線系牢，并且線應(yīng)垂直桌面，加