根系分泌物測定試驗(yàn)方案

根系分泌物測定試驗(yàn)方案以正交表L8（27）設(shè)計(jì)一個(gè)三因子試驗(yàn)，以1/5Hoagland溶液水培。三個(gè)因子分別為品種、氮素脅迫和水分脅迫，每個(gè)因子各設(shè)兩個(gè)水平。（1） 品種因子（A）：以美國先鋒公司的2對(duì)玉米品種（Bt玉米和相應(yīng)的非Bt玉米）共4個(gè)品種為材料，設(shè)水平1-Bt玉米；水平2—相應(yīng)的非Bt玉米。（2） 氮素因子（B）：設(shè)水平1—正常施氮；水平2—低氮脅迫（即不施加氮素營養(yǎng)）。（3） 干旱因子（C）：設(shè)水平1—正常水培；水平2—干旱脅迫（即加入PEG）。每盆3株，各處理組合種植2盆（即2次重復(fù)），在生育期的前中期取樣5次，測定根系分泌物中有機(jī)酸的含量（各品種24粒）。正交表處理號(hào)1列2列3列4列5列6列11111112111222312211241222215212121621221272211228221211二、 表頭設(shè)計(jì)列123456效應(yīng)ABAXBCAXCBXC三、根系分泌物收集方法：1.在太陽下收集根系分泌物7~8小時(shí)（用0.5mmol/LCaCL2液150ml收集，提高滲透壓，有利于根系分泌），紗布過濾。2.將根系分泌物濾液轉(zhuǎn)移至200ml燒杯中，于60°C水浴下放通風(fēng)櫥下風(fēng)干（一晚12hr可蒸干150ml）,同時(shí)處理陽離子樹脂AmberliteIR-120（PLUS）ion-exchangeresin,sodiumform（AldrichChemicalCompany,Inc.）（先用2000mlHCL洗，再用蒸餾水洗）。2ml0.5NHCL洗燒杯，轉(zhuǎn)移至10ml離心管。再用8ml蒸餾水洗燒杯，小漏斗過濾，轉(zhuǎn)移至離心管，0°C下保存或直接過陽離子樹脂。將離心管中的溶液過陽離子樹脂，再用5ml蒸餾水洗凈離心管，一樣過陽離子樹脂。收集過陽離子樹脂的溶液15ml，在通風(fēng)櫥下或利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干。用1ml流動(dòng)相（含0.5mmol/LTBA、pH2的KH2PO4）溶解根系分泌物的濃縮成分于離心管中。振蕩，使之充分溶解（其中TBA為四丁基硫酸氫銨，可適當(dāng)延長草酸的保留時(shí)間，有效消除分析中的干擾問題）。將溶解液過濾膜，轉(zhuǎn)移到離心管中（或12000g離心，取上清液待測）。HPLC分離檢測。四、 HPLC測定方法：溶劑系統(tǒng)：含0-10mmol/LTBA，pH2的0.5%KH2PO4水溶液檢測波長：220nm進(jìn)樣量：5Ml流速：1ml/min五、 具體處理組合—BI1N1W1—Bt1N1W2—Bt1N2W1—Bt1N2W2—Bt2N1W1—Bt2N1W27――Bt2N2W18——Bt2N2