體內(nèi)藥物分析復(fù)習(xí)題

一、簡述與常規(guī)藥物分析相比，體內(nèi)藥物分析有哪些特點。體內(nèi)藥物分析，是一門新興學(xué)科，是藥物分析的重要分支，也是現(xiàn)代藥學(xué)的創(chuàng)新、延伸和發(fā)展。體內(nèi)藥物分析意在通過多種分析手段，理解藥物在體內(nèi)的數(shù)量與質(zhì)量變化，獲得藥物動力學(xué)的多種參數(shù)、藥物在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化、代謝方式和途徑等信息。與常規(guī)藥物分析相比，體內(nèi)藥物分析有如下特點：1、干擾雜質(zhì)多，樣品一般需通過度離、凈化才能進行分析。2、樣品量少（ng/ml-ug/ml），不易重新獲得，在測定前需要濃縮、富集。3、藥物濃度低，對分析措施的敏捷度和專屬性規(guī)定高。4、規(guī)定較快提供成果（臨床用藥監(jiān)護，中毒解救等）5、要有可以進行復(fù)雜樣品分析的設(shè)備如GC-MS、HPLC等。6、工作量大，測定數(shù)據(jù)的處理和成果的闡明不太輕易。二、簡述常用生物樣本的種類及采集、儲存方式。簡述生物樣品測定前除蛋白質(zhì)的原因及常用措施。1、血液采集：待藥物在血液中分布均勻后取樣，從靜脈采血。制備：血漿(plasma)：全血+抗凝劑（肝素等）—離心—上清液（淡黃色）血清(serum)：全血靜置一段時間—離心—上清液（淡黃色）全血(wholeblood)：全血+抗凝劑（肝素等）—混合儲存：采血后雖然分離，不超過2h，分離后置于冰箱或冷凍柜中保留；若不予先分離，血凝后冰凍保留；短期4℃，長期-202、尿液：尿中藥物以原型、代謝物或綴合物形式存在。采集：自然排尿，常用涂蠟的一次性紙杯或玻璃杯制備：尿液加入合適的防腐劑于儲尿瓶儲存：重要成分是水、尿素、鹽類，易長細菌，短期可置4℃冷藏或加防腐劑，若保留時間長則需冷凍（-20℃3、唾液采集：漱口15min后，用插入漏斗的試管搜集口內(nèi)自然流出或經(jīng)舌在口內(nèi)攪動后流出的混合唾液采集時間至少10min制備：唾液除去泡沫部分—放置分層—離心—上清液。制備：唾液出去泡沫部分—放置分層—離心—上清液儲存：4℃如下保留冷凍的樣品測定期需解凍冷凍，最佳一次性測定完畢，不要反復(fù)冷凍--解凍--冷凍--解凍，以免藥物含量下降。樣品的貯存除了上述的冷凍貯存，還包括：1、加穩(wěn)定劑：酶克制劑：NaF，四氫尿苷，三氯醋酸；抗氧劑：維生素C等2、防腐劑、變化pH值尿樣中可加入的防腐劑有：甲苯、氯仿等或加無機酸、堿等調(diào)整尿液pH值。除蛋白質(zhì)的原因：1、使結(jié)合型藥物釋放出來，以測定總濃度。2、得到較“潔凈”的提取液，減少乳化。3、消除對測定的干擾。4、保護儀器，延長有效期限。常用去蛋白質(zhì)措施：1、蛋白質(zhì)沉淀法——生成不溶性鹽或鹽析和脫水作用。包括：加酸類、重金屬鹽、中性鹽和能與水混溶的有機溶劑等，如：三氯乙酸、高氯酸、Cu2+、硫酸銨、甲醇、乙腈等。2、組織酶消化法——蛋白水解酶，如胰蛋白酶、胃蛋白酶等。三、簡述體內(nèi)藥物分析措施確實證的內(nèi)容。論述定量限與檢測限的定義及區(qū)別、表達措施。分析措施的驗證，就是對藥物分析試驗所采用的分析措施與否完全到達了預(yù)期目的，或證明由分析措施誤差而導(dǎo)致試驗成果判斷錯誤的概率與否在容許范圍之內(nèi)，而進行的科學(xué)證明。分析措施的驗證以驗證參數(shù)表達：1、專屬性（Specificity）：專屬性是指在某些也許存在的組分如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、基質(zhì)等的存在下，對被分析物質(zhì)的精確可靠的測定。2、精確性(Accuracy)：精確性指的是真實值或承認的參照值與測量值之間相近程度。3、精密度(Precision)：精密度指的是規(guī)定條件下對同一勻質(zhì)樣品多次取樣進行一系列檢測成果的一致程度（離散程度）。精密度可以從三方面考慮：反復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。分析措施的精密度一般以測量法的變異性、原則偏差或變異系數(shù)來體現(xiàn)。4、反復(fù)性(Repeatability)：反復(fù)性是指在同樣的操作條件下較短時間間隔的精密度，也稱為日內(nèi)差(Intra-assayprecision)。5、中間精密度(IntermediatePrecision)：中間精密度指的是試驗室內(nèi)部條件變化（如：不一樣天、不一樣分析測試者、不一樣儀器等）狀況下的精密度。6、重現(xiàn)性（Reproducibility）：指不一樣試驗室之間的精密度，常用于合作試驗研究(collaborativestudies)中的措施學(xué)的原則化研究。7、檢測程度(Detectionlimit)：檢測程度指的是樣品中的被分析物質(zhì)可以被檢測到的最低量，一般無需定量。8、定量程度(Quantitationlimit)：某種分析措施的定量程度是指具有合適精確性和精密度的條件下，可以定量測定分析組分的最低限量。它是樣品中含量低的化合物定量分析的參數(shù)，尤其合用于雜質(zhì)和（或）降解產(chǎn)物的測定。9、線性(Linearity)：分析措施的線性是指所得檢測成果與樣品中被分析物的濃度（含量）成比例關(guān)系的性能。10、范圍(Range)：析措施的范圍是指在樣品中被分析物的較高濃度(量)和較低濃度(量)之間的區(qū)間、已證明區(qū)間內(nèi)具有合適的精確性、精密度、線性。11、耐用性(Robustness)：分析措施的耐用性是指試驗參數(shù)合適地發(fā)生細小變化時，測量能力保持不受影響，可用于闡明正常使用時的可靠性。定量限：是指樣品中被測物能被定量測定的最低量，其成果應(yīng)具有一定的精確度和精密度。檢測限：是指分析措施在規(guī)定的試驗條件下試樣中被測物可以被檢測出的最低量。區(qū)別：定量限所規(guī)定的最低濃度應(yīng)滿足一定的精密度和精確度的規(guī)定。定量限：信噪比3:1檢測限：信噪比10:1四、簡述基質(zhì)效應(yīng)產(chǎn)生的原因、影響、確認措施以及消除。原因：標本中除分析物以外的其他成分對分析物測定值的影響，引起基質(zhì)效應(yīng)的原因相稱復(fù)雜，波及試驗的多種部分：儀器設(shè)計、試劑構(gòu)成、措施原理，以及質(zhì)控物、定標物和PT材料的成分和處理技術(shù)。與原則樣品和QC樣品相比，生物樣品在進行液相色譜-電噴霧電離-質(zhì)譜法分析時，會產(chǎn)生明顯的基質(zhì)效應(yīng)。產(chǎn)生于生物樣品中的內(nèi)源性物質(zhì)、代謝產(chǎn)物或一同服用的其他藥物，因在色譜分析中與目的化合物分離不完全或未被檢測到而進入質(zhì)譜后產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)。影響：基質(zhì)效應(yīng)會使分析物的測定值發(fā)生變化，數(shù)值或偏大或偏小。而在生物樣品（以血漿為例）中，引起基質(zhì)效應(yīng)的重要是磷脂、膽固醇等內(nèi)源性物質(zhì)。他們隨同待測物從色譜柱上一起被洗脫出來，經(jīng)離子源氣化，進入質(zhì)譜進行檢測分析。而就在液滴氣化、發(fā)生庫倫爆炸變成小液滴直至產(chǎn)生氣體離子的過程中，這些內(nèi)源性的物質(zhì)由于極性較大，會同待測物離子競相競爭液滴表面，從而導(dǎo)致待測物的離子化效率減少或增強，引起響應(yīng)減少或增高，這就產(chǎn)生所謂的基質(zhì)克制或基質(zhì)增強效應(yīng)基質(zhì)效應(yīng)確實認措施：1、原則曲線法2、柱后灌注法3、監(jiān)控法基質(zhì)效應(yīng)的消除：1、選擇合適的樣品制備措施——最有效。2、改善色譜分析條件3、優(yōu)化質(zhì)譜分析條件4、內(nèi)標的選擇五、比較比色法、紫外法、熒光法的異同點。1、比色法：以可見光作光源，比較溶液顏色深淺度以測定所具有色物質(zhì)濃度的措施。2、紫外法：可見光、紫外線照射某些物質(zhì)，重要是由于物質(zhì)分子中價電子能級躍遷對輻射的吸取，而產(chǎn)生化合物的可見紫外吸取光譜。3、熒光法：運用某些物質(zhì)被紫外光照射后所發(fā)生的能反應(yīng)出該物質(zhì)特性的熒光，可進行定性或定量分析的措施。相似點：1、都以朗伯-比爾定律(A＝εbc)為基礎(chǔ)。2、都屬于光譜分析法，操作簡便、迅速。3、定量措施采用原則曲線法和原則對照法。不一樣點：1、光源：比色法使用的是混色光源，紫外法使用的是單色光源。2、比色法使用的是色階和人的眼睛，相對誤差較大，紫外法和熒光法使用的是儀器和光電檢測器，相對誤差較小3、比色法重要是定性的，而紫外法和熒光法是定量、定性4、本質(zhì)：紫外法為吸取光譜；熒光法為發(fā)射光譜。5、敏捷度：熒光法10-10-10-1；紫外法10-4-106、選擇性：紫外和比色法一般；熒光高7、應(yīng)用：熒光法的應(yīng)用沒有紫外廣。六、紫外法詳細有哪些措施？基本原理怎樣？1、差示分光光度法原理：運用被測物在兩種不一樣溶液中吸取光譜發(fā)生了特性性變化，而共存干擾物在該兩種溶液中未引起光譜變化，測定兩種溶液的吸取度差值（ΔA值），根據(jù)ΔA與被測物濃度C的線性關(guān)系進行定量測定。應(yīng)用條件：必須使被測物在兩種溶液中以不一樣的化學(xué)形式存在，且兩種化學(xué)形式的吸取光譜應(yīng)有明顯差異。根據(jù)被測物理化性質(zhì)，可選擇不一樣的處理措施，除酸、堿外，還可用緩沖液、氧化劑等。但應(yīng)使被測物在一種溶液中以一種形式存在，光譜純度不低于99%。雙波長法：重要用于二元混合物或渾濁樣品的測定。原理：在l測處：A測=A樣＋A雜在l參處：A參=A’樣＋A’雜⊿A=A測—A參=（A樣＋A雜）—（A’樣＋A’雜）由于：A雜=A’雜因此：⊿A=A樣—A’樣，與干擾物無關(guān)。應(yīng)用條件：l測——被測物吸取峰附近l參——干擾物在l測處的等吸取點，即干擾物在此兩波長處A值相等導(dǎo)數(shù)光譜法原理：假如干擾吸取隨波長呈線性時，可用直線方程表達A混=E測·C測·L＋a＋bλ，對上述公式求導(dǎo)：dA混/dλ=dE測/dλ·C測·L＋b，干擾物質(zhì)的吸取由隨波長呈線性變成了常數(shù)。對于非線性干擾，可近似地用二次曲線表達A=E·C·L+t+uλ+wλ2，對上式求二階導(dǎo)數(shù)，可使雜質(zhì)干擾的二階曲線t+uλ+wλ2變成常數(shù)w，從而消除干擾。應(yīng)用條件：根據(jù)干擾物質(zhì)的吸取光譜圖形，選擇導(dǎo)數(shù)階數(shù)七、免疫分析的基本原理、基本條件是什么？常用免疫分析有哪幾種？互相間區(qū)別在哪些方面？免疫分析的基本原理是抗原-抗體的結(jié)合反應(yīng)，當(dāng)抗原碰到其對應(yīng)的特異抗體時產(chǎn)生一系列的抗原-抗體反應(yīng)，形成抗原-抗體結(jié)合物?；緱l件：特異性抗體、標識抗原、未標識抗原（即原則品）。常用免疫分析有：放射免疫分析法,酶免疫分析法,化學(xué)發(fā)光免疫分析法,熒光免疫分析法。區(qū)別：標識物不一樣，由此采用的措施也不一樣。1、放射免疫分析是放射性同位素測定法與免疫反應(yīng)基本原理相結(jié)合的一種同位素分析技術(shù)。該法具有敏捷度高、特異性強、標識物輕易制備以及放射性強度輕易檢測等長處,尤其適合復(fù)雜樣品中微量或痕量物質(zhì)的分析。2、酶免疫分析的基本原理是在抗體或抗原分子上連接酶分子,進行免疫反應(yīng),免疫復(fù)合物上的酶將特定的底物轉(zhuǎn)化為特定的顏色,用分光光度計測定,由顏色的深淺確定待測物的量,其催化底物可與核素同樣起到信息放大作用,具有很高的敏捷度,檢測下限可到達ng甚至pg水平,有效期大大超過了125I標識物,并且能減少放射性廢物。3、化學(xué)發(fā)光免疫分析法：所需時間短、敏捷度高、線性范圍寬、對環(huán)境無污染,熒光免疫分析是以熒光物質(zhì)作為標識物與待測藥物結(jié)合,所形成的熒光標識藥物能與抗體發(fā)生免疫反應(yīng),引起熒光強度發(fā)生變化的一種分析措施。八、測定藥物與蛋白質(zhì)結(jié)合率的意義何在？測定期需注意什么問題？藥物血漿蛋白結(jié)合率一般是指在治療量時藥物結(jié)合的百分率，它是藥物代謝動力學(xué)的重要參數(shù)之一，是新藥臨床評價不可缺乏的指標。它影響藥物在體內(nèi)的分布、代謝與排泄，更重要的是它與藥物的藥理作用強度親密有關(guān)。血漿蛋白結(jié)合率高的藥物，雖然有高的血藥濃度，而發(fā)揮作用的游離藥物的濃度并不高，藥理作用就不一定強。因此，若沒有血漿蛋白結(jié)合方面的資料，就不也許評價血藥濃度的真實意義。影響藥物血漿蛋白結(jié)合率的重要原因有：藥物的化學(xué)構(gòu)造，血漿蛋白含量高下，某些生理，病理原因，合并用藥。物與血漿蛋白結(jié)合是疏松的和可逆的，按質(zhì)量作用定律常常處在動態(tài)平衡狀態(tài)。結(jié)合率可受藥物濃度、并用其他藥物以及病人的生理、病理而變化。因此，測定期需要注意以上問題。九、簡述生物運用度與生物等效性的概念和試驗措施。生物運用度（bioavailability，F(xiàn)）是指藥物被機體吸取進入體循環(huán)的相對量和速率。生物等效性（bioequivalency,BE）是指一種藥物的不一樣制劑在相似試驗條件下，予以相似的劑量，其吸取速度與程度沒有明顯差異。試驗措施：1、參數(shù)tm、Cm、AUC是三項基本參數(shù)。Tm用于評價吸取速度。Cm、AUC→F用于評價程度，要測準AUC，需測定7t1/2。2、試驗安排：受試者應(yīng)隨機分組，經(jīng)健康檢查，進行交叉試驗消除個體差異，數(shù)據(jù)才有可比性。3、取樣點間隔和數(shù)量：預(yù)試驗大概求出峰值，再設(shè)計取樣時間4、分析體液的選擇：血液最常用，k尿液：取樣輕易，但不也許獲得吸取瞬時速度，且尿中常含大量代謝產(chǎn)物，因此藥物重要以原形從尿排出者才合用。否則若線性代謝可測代謝物，此外尚有唾液。5、研究對象人體試驗成果是最權(quán)威的資料，新藥審批規(guī)定人，18-24例，但也常用動物狗、猴、豬較靠近人，家兔消化道生理與人相差大。十、簡述半衰期、表觀分布容積、清除率、藥-時曲線、AUC、穩(wěn)態(tài)血藥濃度、生物運用度的概念和含義。消除半衰期:血藥濃度下降二分之一所需時間，是決定給藥間隔時間的重要參數(shù)之一。表觀分布容積（Vd）:是指血藥濃度與體內(nèi)藥物量間的一種比值，Vd=A/C=體內(nèi)藥量/血藥濃度?？煞磻?yīng)藥物分布的廣泛程度或藥物與組織結(jié)合的程度。清除率(Cl):即單位時間內(nèi)多少容積血漿中