家畜組織胚胎學(xué)緒論

家畜組織胚胎學(xué)第一章緒論第一節(jié)家畜組織胚胎學(xué)的研究?jī)?nèi)容和意義組織胚胎學(xué)包括組織學(xué)和胚胎學(xué)兩部分。組織學(xué)（histology）是研究動(dòng)物體微細(xì)結(jié)構(gòu)及功能的科學(xué)。動(dòng)物體是由各種器官系統(tǒng)構(gòu)成的，每個(gè)器官都包括幾種不同的組織，而每一種組織又是由細(xì)胞和細(xì)胞間質(zhì)構(gòu)成的。因此，組織學(xué)的研究?jī)?nèi)容包括細(xì)胞、基本組織和器官組織三個(gè)部分。胚胎學(xué)（embryology）是研究動(dòng)物個(gè)體胚胎發(fā)育的科學(xué)。胚胎學(xué)的研究?jī)?nèi)容包括配子發(fā)生、受精、卵裂、原腸胚和神經(jīng)胚形成、胎膜和胎盤(pán)以及器官發(fā)生等。組織胚胎學(xué)屬于動(dòng)物科學(xué)和醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)的專(zhuān)業(yè)基礎(chǔ)課。只有掌握了動(dòng)物的正常形態(tài)結(jié)構(gòu)和胚胎發(fā)育規(guī)律，才能進(jìn)一步了解動(dòng)物的生理活動(dòng)規(guī)律，并利用這些規(guī)律去合理地飼養(yǎng)、繁殖和改良動(dòng)物以及防治各種疾病。因此，學(xué)好組織學(xué)與胚胎學(xué)是學(xué)好生理學(xué)、繁殖學(xué)、飼養(yǎng)學(xué)、動(dòng)物生產(chǎn)學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)等課程所必不可少的基礎(chǔ)。第二節(jié)組織胚胎學(xué)研究方法及基本原理所有的組織胚胎學(xué)研究方法均需將有機(jī)體的器官和組織經(jīng)過(guò)特殊處理，再應(yīng)用各種顯微鏡進(jìn)行觀察研究后得出科學(xué)的結(jié)果。1.組織學(xué)制片技術(shù)一般是先把組織制成薄片，最常用的是石蠟切片，其制備方法是：①取材與固定：把新鮮組織放到甲醛溶液等固定液中，使蛋白質(zhì)等成分迅速凝固，盡可能保持其活體時(shí)的結(jié)構(gòu)狀態(tài)。②脫水與透明：為使石蠟浸入組織內(nèi)，把固定好的材料用乙醇逐級(jí)（70%-100%）脫水。用二甲苯或乙醚等石蠟溶劑使組織浸透，便于浸蠟。一、固定組織研究法③浸蠟與包埋：把組織放入融化（58-60℃）的石蠟中，進(jìn)行浸透和包埋成蠟塊，目的是使石蠟進(jìn)入細(xì)胞間隙和細(xì)胞內(nèi)，以增加組織的硬度，便于切片。④切片與貼片：將蠟塊用切片機(jī)切成5-10μm厚的組織切片，并鋪展粘到載玻片上。⑤染色與封固：把粘好的切片脫蠟后，用適當(dāng)?shù)娜玖线M(jìn)行染色。染色后，再經(jīng)脫水和透明，最后把組織用樹(shù)膠和蓋片封片。除了石蠟切片外，血液可以制成血涂片，疏松結(jié)締組織和腸系膜等薄層組織可制成鋪片，骨組織可制成磨片,然后固定和染色。

最常用的染色方法是蘇木精（hematoxylin）和伊紅（eosin）染色的染色方法，簡(jiǎn)稱(chēng)H.E.染色。蘇木精是堿性染液，可以使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)和細(xì)胞質(zhì)中的核糖體等成分染成藍(lán)紫色，故這些成分被說(shuō)成是嗜堿性著色的。伊紅是酸性染料，可使多數(shù)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)染成粉紅色，這些細(xì)胞質(zhì)被稱(chēng)為嗜酸性的。對(duì)堿性和酸性染料親和力都不強(qiáng)的結(jié)構(gòu)，稱(chēng)為嗜中性的。染色方法染色方法HE染色蘇木精伊紅嗜堿性結(jié)構(gòu)：細(xì)胞核粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)游離核糖體等嗜酸性結(jié)構(gòu)：細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)溶酶體、線粒體等細(xì)胞器膠原纖維等染色方法HE染色法以外的所有染色法，通常是為了顯示某些用HE染色法顯示不出的細(xì)胞和結(jié)構(gòu)。如：蘇丹法——顯示脂肪鍍銀法——顯示神經(jīng)細(xì)胞、嗜銀顆粒鐵蘇木素法——顯示心肌閏盤(pán)馬氏三色法——顯示胰島細(xì)胞甲苯胺藍(lán)法——顯示糖胺多糖

特殊染色鍍銀染色，顯示大腦皮質(zhì)神經(jīng)元氯化金染色，顯示運(yùn)動(dòng)終板Hemalum染色，顯示心肌纖維及閏盤(pán)2、組織化學(xué)技術(shù)組織化學(xué)(histochemistry)：

通過(guò)化學(xué)或物理反應(yīng)原理顯示組織或細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分，通常是使其形成有色終末產(chǎn)物，以便在鏡下觀察，可進(jìn)行定位和定量。1．一般組織化學(xué)術(shù)是利用化學(xué)試劑與組織內(nèi)的某些物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，在局部形成能夠在顯微鏡下觀察到的沉淀物。例如，過(guò)碘酸雪夫氏反應(yīng)（periodicacidchiff’sreaction,PAS反應(yīng)）的基本原理是通過(guò)過(guò)碘酸的氧化作用，使多糖生成醛基，后者與雪夫氏試劑中的無(wú)色堿性品紅反應(yīng)，在反應(yīng)部位形成紫紅色沉淀，從而證明細(xì)胞內(nèi)含有糖原或粘多糖成分。

HIO4Shiff試劑多糖醛紫紅色沉淀物（氧化）（堿性品紅）組織化學(xué)術(shù)PAS反應(yīng)，顯示小腸上皮杯狀細(xì)胞的粘原顆粒組織化學(xué)術(shù)⒉免疫組織化學(xué)術(shù)（immunocytochemistry)

利用組織化學(xué)技術(shù)的原理，再結(jié)合免疫學(xué)方法，則為免疫細(xì)胞化學(xué)術(shù)。主要的檢測(cè)對(duì)象為肽和蛋白質(zhì)。組織化學(xué)術(shù)免疫組織化學(xué)，顯示胰島B細(xì)胞組織化學(xué)術(shù)⒊原位雜交術(shù)（insituhybridization)

為核酸（DNA和RNA）組織化學(xué)術(shù)。用帶有標(biāo)記物的已知堿基順序的核酸探針，與細(xì)胞內(nèi)待測(cè)的核酸結(jié)合（雜交），從而在原位顯示該核酸。原位雜交，顯示臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的心房鈉尿肽陽(yáng)性組織化學(xué)術(shù)活體組織研究法二、其它研究方法自學(xué)細(xì)胞培養(yǎng)術(shù)細(xì)胞融合組織工程術(shù)細(xì)胞電泳新的研究方法

放射自顯影術(shù)圖像分析術(shù)流式細(xì)胞術(shù)光學(xué)顯微鏡（lightmicroscopeLM）電子顯微鏡（electronmicroscopeEM）三、顯微鏡一．光學(xué)顯微鏡光鏡普通光學(xué)顯微鏡（lightmicroscope）的分辨率為0.2μm，可放大1000倍左右，能觀察組織和細(xì)胞的一般結(jié)構(gòu)。分辨率是指能夠分辨兩顆粒之間的最小距離。顯微鏡下常用的長(zhǎng)度單位在光鏡下所見(jiàn)的組織和細(xì)胞的結(jié)構(gòu)叫做一般微細(xì)結(jié)構(gòu)，而在電鏡下所見(jiàn)的結(jié)構(gòu)則稱(chēng)之為超微結(jié)構(gòu)。在光鏡和電鏡下進(jìn)行觀察時(shí)，常用的計(jì)量單位有：1μm（微米，micrometer）=1/1000mm（毫米，millimeter）1nm（納米，nanometer）=1/1000μm1pm（皮米）＝1/1000nm光鏡光學(xué)顯微鏡的分類(lèi)1、生物顯微鏡2、熒光顯微鏡3、相差顯微鏡4、暗視野顯微鏡5、偏光顯微鏡6、激光共聚焦顯微鏡光鏡光鏡光鏡大鼠附睪上皮細(xì)胞微絲（肌動(dòng)蛋白）及細(xì)胞核光鏡二電子顯微鏡技術(shù)常用的電鏡有透射電鏡和掃描電鏡兩種。與光鏡比較，電鏡的基本原理是以電子束代替光線，以電磁透鏡代替光學(xué)透鏡。電鏡透射電鏡（TEM）的分辨率已達(dá)到0.2nm左右，可放大幾萬(wàn)到幾十萬(wàn)倍。其工作原理是，電子束透過(guò)樣品后，投射到熒光屏上，形成物像。由于電子易散射和被物體吸收，所以必須制備超薄切片（90-100nm）。電鏡樣品的制備過(guò)程：取小材料塊（1mm3以?xún)?nèi)）用戊二醛和鋨酸雙重固定→環(huán)氧樹(shù)脂包埋→超薄切片機(jī)切片→鉛鈾重金屬電子染色→電鏡觀察。被金屬鹽所染的部位，因透過(guò)的電子束少而在熒光屏上顯得暗，稱(chēng)為電子密度高，反之則稱(chēng)為電子密度低。透射電鏡電鏡電鏡掃描電鏡（SEM） 是用極細(xì)的電子束在樣品表面進(jìn)行掃描并用特定的探測(cè)器收集所發(fā)生的二次電子，形成電信號(hào)傳送到顯像管，在熒光屏上顯現(xiàn)出物體表面的立體圖象。掃描電鏡的樣品制備方法： 將較大的組織塊用戊二醛和鋨酸雙重固定，經(jīng)脫水和干燥后，再于樣品表面上噴涂一薄層金，以增加二次電子數(shù)。電鏡電鏡電鏡電鏡技術(shù)細(xì)胞側(cè)面的緊密連接電鏡技術(shù)

脾紅髓第三節(jié)家畜組織胚胎學(xué)的研究方法學(xué)習(xí)組胚的思維方式1.理論聯(lián)系實(shí)際2.形態(tài)聯(lián)系機(jī)能3.