血涂片的制作和【-】課件

實驗三血涂片的制作和

血細胞的觀察、

計數(shù)、血型鑒定《普通生物學》——實驗三血涂片的制作和

血細胞的觀察、

1實驗目的掌握血涂片的制作，了解各種血細胞的結構特點掌握人體微量采血和用血細胞計數(shù)板進行細胞直接鏡檢計數(shù)的方法掌握ABO血型的鑒定方法實驗目的掌握血涂片的制作，了解各種血細胞的結構特點2材料和用品材料人血或兔血主要用品生物顯微鏡,采血針,雙凹載玻片,血細胞計數(shù)板紅細胞稀釋液（氯化鈉、硫酸鈉、氯化高汞）白細胞稀釋液（冰醋酸、龍膽紫）標準A、B血清瑞氏（Wright）染液材料和用品材料3實驗內容與方法

實驗內容與方法4（一）ABO血型鑒定1．實驗原理紅細胞膜上具有血型糖蛋白，作為抗原，也稱為凝集原；ABO血型就是根據(jù)紅細胞表面抗原來確定的，根據(jù)紅細胞上有或無A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型四種。血清中含有相應的特異性抗體稱為凝集素。凝集原和相應的凝集素特異性結合，使紅細胞凝集成團，進而引起紅細胞破裂，產生溶血。ABO血型鑒定的原理是利用紅細胞凝集試驗，將待測血液分別與已知含A抗體和B抗體的標準血清混合，觀察是否發(fā)生凝集現(xiàn)象，判斷待測血液紅細胞上有何種抗原，由此確定待測血液的血型。（一）ABO血型鑒定1．實驗原理5ABO血型分類ABO血型分類6ABO血型正反定型結果ABO血型正反定型結果7（一）ABO血型鑒定2．血型鑒定方法標記凹載玻片：左上角寫A，右上角寫B(tài)。分別吸取標準A血清和標準B血清各1滴滴于雙凹載玻片左端和右端。采血針刺破左手無名指尖，待血液出來后，用2支毛細滴管吸取血液，分別加入到玻片左、右兩側的血清內，并用牙簽攪拌，使標準血清與血液混勻。（切勿混用毛細滴管和牙簽?。┦殖植ＦD動數(shù)次，轉動時玻片應保持在一個水平面上，然后置室溫下5min后觀察結果。肉眼觀察：如果外觀略呈花邊狀或鋸齒狀，看上去有沉淀，則多為凝集；如果血滴呈均勻狀態(tài)，邊緣整齊，則多為不凝集。進一步在低倍鏡下觀察：在低倍鏡下，如果觀察到紅細胞凝集成團，或尚有少數(shù)游離細胞，則為凝集現(xiàn)象；如果紅細胞均為游離狀態(tài)，則為不凝集。根據(jù)鏡下所見有無凝集現(xiàn)象判定血型。（一）ABO血型鑒定2．血型鑒定方法8（二）血涂片的制作和血細胞的觀察1．血涂片的制作用酒精棉球擦拭消毒指尖，用采血針刺破指尖，從采血針眼處擠出綠豆大小血滴，用清潔玻片面的一端輕輕接觸血滴，使血滴附于玻片面上（注意勿觸及皮膚，否則血在玻片上就不能成滴）以左手拿該片的兩端，迅速用右手拿住另一載玻片的一端，在左手載玻片上由前向后接觸血滴，使兩載玻片約成45°角，輕輕移動，使血滴成一直線，然后由前向后推為一均勻的薄片涂片在空氣中干燥后置于染色架上，滴加瑞氏染色液，使涂片被染色液覆蓋染1分鐘后，再加等量的緩沖液于染色液上，浸染約5~8分鐘此時涂片表面呈現(xiàn)一層古銅色用蒸餾水迅速沖洗，見涂片呈粉紅色后，自然晾干（二）血涂片的制作和血細胞的觀察1．血涂片的制作9血涂片的制作和【-】課件10（二）血涂片的制作和血細胞的觀察2．血細胞觀察

制作良好的血涂片厚薄適宜，血膜分布均勻，呈粉紅色。選一厚薄適宜部位置顯微鏡下觀察。先用低倍鏡觀察全片，了解涂片染色、細胞分布情況，再用油鏡觀察(1)紅細胞數(shù)量最多，體積小而圓、均勻分布，呈紅色的圓盤狀，邊緣厚，著色較深，中央薄，著色較淺，無細胞核、細胞器，胞質內充滿血紅蛋白。(2)白細胞白細胞數(shù)量較紅細胞數(shù)量少，但胞體大，細胞核明顯，極易與紅細胞區(qū)別開。（二）血涂片的制作和血細胞的觀察2．血細胞觀察11嗜中性粒細胞是白細胞中較多的一種，約占白細胞總數(shù)50-70%。體積比紅細胞大，主要的特征是胞質中的特殊顆粒細小，分布均勻，著淡紫紅色。胞核著深紫紅色，一般分3—5葉，葉間以染色質絲相連。核分葉的多少與該細胞年齡有關，如核為桿狀，則為嗜中性粒細胞的幼稚型。嗜酸性粒細胞比中性粒細胞略大，數(shù)量少，約占7%以下。核常分兩葉，著紫藍色。主要特點是胞質內充滿粗大、圓形的顆粒，色鮮紅或桔紅。嗜堿性粒細胞數(shù)量很少，約占1%以下。在一般血涂片上不易找到，體積比上述2種白細胞稍小。胞質中分散著許多大小不一的深紫藍色顆粒。胞核形狀不定,圓形或分葉，也染成紫色，但染色略淺，一般都被顆粒遮蓋，形狀不清。嗜中性粒細胞是白細胞中較多的一種，約占白細胞總數(shù)50-712淋巴細胞數(shù)量較多，約占20%-40%，可見中、小型，淋巴細胞。其中小淋巴細胞最多,略大于紅細胞。核大而圓,幾乎占據(jù)整個細胞，染成深藍紫色。胞質極少，僅在核的一側出現(xiàn)一線狀天藍色或淡藍色的胞質。中淋巴細胞比紅細胞大，胞質較小淋巴細胞的稍多，著色較淺。核圓形或卵圓形，位于細胞中部，也染成深藍紫色。單核細胞數(shù)量少，約占2%-8%，是細胞中體積最大的一種，胞核呈腎形、馬蹄形，常在細胞一側，著色比淋巴細胞淺。血小板為形狀不規(guī)則的細胞小體，其周圍部分為淺藍色，中央有細小的紫色顆粒，常聚集成群，分布于紅細胞之間。高倍鏡下一般只能看到成堆的紫色顆粒，在油鏡下才能看到顆粒周圍的淺色胞質部分。淋巴細胞數(shù)量較多，約占20%-40%，可見中、小型，淋巴13血涂片的制作和【-】課件14（三）血細胞計數(shù)1．血細胞計數(shù)板的構造計數(shù)板是一塊特制的長方形厚玻璃板，板面的中部有4條直槽，內側兩槽中間有一條橫槽把中部隔成二長方形的平臺。平臺比整個玻璃板的平面低0.1mm，當放上蓋玻片后，平臺與蓋玻片之間距離（即高度）為0.1mm。平臺中心部分各以3mm長，3mm寬精確劃分為9個大方格，稱為計數(shù)室，每個大方格面積為1mm3，體積為0.1mm3。四角的大方格，又各分為16個中方格，適用于白細胞計數(shù)。中央的大方格則由雙線劃分為25個中方格，每個中方格面積為0.04mm3，體積為0.004mm3。每個中方格又各分成16個小方格，適用于紅細胞計數(shù)。（三）血細胞計數(shù)1．血細胞計數(shù)板的構造15

162．血細胞計數(shù)（1）兔血稀釋1.5ml塑料離心管：0.38ml白細胞稀釋液放入小試管內+0.02ml兔血5ml塑料離心管：3.98ml紅細胞稀釋液＋0.02ml兔血血液應加入試管底部，滴入計數(shù)室前試管搖振1-2min。將蓋玻片放在計數(shù)板正中，用白色小號Tip頭吸取搖勻的稀釋血液，將一小滴血液滴在蓋玻片邊緣的玻片上，使稀釋血液借毛細管現(xiàn)象而自動流入計數(shù)室內。如滴入過多，溢出并流入兩側深槽內，使蓋玻片浮起，體積改變，會影響計數(shù)結果，需用濾紙片把多余的溶液吸出，以深槽內沒有溶液為宜。如滴入溶液過少，經多次充液，易造成氣泡，應洗凈計數(shù)室，干燥后重做。紅細胞和白細胞的計數(shù)，各使用一計數(shù)室。血液稀釋液滴入計數(shù)室后，須靜置2-3min，然后在低倍顯微鏡下計數(shù)。2．血細胞計數(shù)（1）兔血稀釋172．血細胞計數(shù)（2）計數(shù)計數(shù)白細胞時，數(shù)四角4個大方格的白細胞總數(shù)計數(shù)紅細胞時，數(shù)中央大方格的四角的4個中方格和中央的一個中方格（共5個中方格）的紅細胞總數(shù)計數(shù)時應循一定的路徑，對橫跨刻度上的血細胞，依照“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”的原則進行計數(shù)。計數(shù)白細胞時，如發(fā)現(xiàn)各大格的白細胞數(shù)目相差8個以上；計數(shù)紅細胞時，如各中方格的紅細胞數(shù)目相差20個以上，表示血細胞分布不均勻，必須把稀釋液搖勻后重新計數(shù)。2．血細胞計數(shù)（2）計數(shù)182．血細胞計數(shù)（3）計算

細胞數(shù)＝計數(shù)板相應方格內細胞總數(shù)×稀釋倍數(shù)×1/計數(shù)室總體積

白細胞數(shù)＝4個大方格內數(shù)得白細胞總數(shù)×20倍×1/1×1×0.1×4mm3，即乘以50，即得每mm3血內的白細胞總數(shù)

紅細胞數(shù)＝中央大方格中的5個中方格內數(shù)得的紅細胞總數(shù)×200倍×1/0.2×0.2×0.1×5mm3，即乘以10，000，即得每mm3血內紅細胞總數(shù)按目前臨床上血細胞計數(shù)采用的通用單位，將以上所獲每毫升血液中所含血細胞數(shù)量換算為各血細胞在每升血液中的數(shù)量2．血細胞計數(shù)（3）計算192．血細胞計數(shù)（4）清洗血細胞計數(shù)板

蓋玻片及計數(shù)板用過之后，必須立即用水沖洗，但不可用硬物刷洗。計數(shù)板晾干或吹風機吹干后，應鏡檢計數(shù)室是否干凈，如不干凈必須重復洗至干凈為止。2．血細胞計數(shù)（4）清洗血細胞計數(shù)板20作業(yè)與思考1.將血細胞計數(shù)實驗結果填入下表：2．根據(jù)實驗體會，分析影響血細胞計數(shù)準確性有哪些因素？3．受試者的ABO血型屬于哪一型？試述判斷依據(jù)。作業(yè)與思考1.將血細胞計數(shù)實驗結果填入下表：21!mSdJ4A(rXiOaF1w$nTfK6B)tYkPbG2y%pUgM7D-uZlRcI3z*qWhN9E0v!mSeJ5A(sXjOaF1x$oTfL6C)tYkQbH2y&pVgM7D+u#lRdI4z*rWiN9E0w!nSeK5B(sXjPaG1x%oUfL6C-tZkQcH3y&pVhM8D+v#mRdJ4A*rG2x%pUgL7D-uZlQcI3z&qWhN8E+v!mSdJ5A(rXiOaF1w$oTfK6C)tYkPbH2y%pVgM7D-u#lRcI4z*qWhN9E0v!nSeJ5A(sXjOaG1x$oUfL6C)tZkQbH3y&pVgM8D+u#mRdI4z*rWiN9F0w!nSeK5B(sYjPaG2x%oUfL7C-tZlQcH3y&qVhM8E+v#E0v!mSeJ5A(sXjOaF1x$oTfL6C)tYkQbH2y&pVgM8D+u#lRdI4z*rWiN9E0w!nSeK5B(sXjPaG1x%oUfL6C-tZkQcH3y&qVhM8D+v#mRdJ4A*rWiO9F0w$nTeK5B)sYjPbG2x%oUgL7C-uZlQcI3z&qVhN8E+v!mSdJ4A(rXiOaF1w$nTfK6B)tYkPbG2y%pUgM7D-uJ5B(sXjOaG1x$oUfL6C)tZkQbH3y&pVgM8D+u#mRdI4z*rWiN9F0w!nTeK5B(sYjPaG2x%oUfL7C-tZlQcH3y&qVhM8E+v#mRdJ4A*rXiO9F1w$nTeK6B)sYkPbG2x%pUgL7D-uZlQcI3z&qWhN8E+v!mSdJ5A(rXjOaF1w$oTfK6C)tYkPtZkQcH3y&qVhM8D+v#mRdJ4A*rWiO9F0w$nTeK5B)sYjPbG2x%oUgL7C-uZlQcI3z&qVhN8E+v!mSdJ4A(rXiOaF1w$nTfK6B)tYkPbG2y%pUgM7D-u#lRcI3z*qWhN9E0v!mSeJ5A(sXjOaF1x$oTfL6C)tYkQbH2y&pVgM8D+u#lRdI4z*rWiN9E0w!nSeK5lQcH3y&qVhM8E+v#mSdJ4A*rXiO9F1w$nTeK6B)sYkPbG2x%pUgL7D-uZlQcI3z&qWhN8E0v!mSdJ5A(rXjOaF1w$oTfK6C)tYkPbH2y%pVgM7D-u#lRcI4z*qWhN9E0v!nSeJ5B(sXjOaG1x$oUlRcI4z*qWiN9E0w!nSeJ5B(sXjPaG1x$oUfL6C-tZkQbH3y&pVhM8D+u#mRdI4A*rWiO9F0w!nTeK5B)sYjPaG2x%oUgL7C-tZlQcH3z&qVhM8E+v#mSdJ4A(rXiO9F1w$nTfK6B)sYkPbG2y%pUgL7D-uZ5A(sXjOaF1x$oTfL6C)tZkQbH2y&pVgM8D+u#lRdI4z*rWiN9E0w!nSeK5B(sXjPaG1x%oUfL7C-tZkQcH3y&qVhM8D+v#mRdJ4A*rWiO9F0w$nTeK5B)sYjPbG2x%pUgL7C-uZlQcI3z&qVhN8E+v!mSdJ4A(rXiOaF1w$nTfK6B)cI4z*qWiN9E0v!nSeJ5B(sXjOaG1x$oUfL6C)tZkQbH3y&pVgM8D+u#mRdI4A*rWiN9F0w!nTeK5B(sYjPaG2x%oUfL7C-tZlQcH3y&qVhM8E+v#mSdJ4A*rXiO9F1w$nTeK6B)sYkPbG2x%pUgL7D-uZlQcI3z&qWhN8E0N9E0w!nSeK5B(sYjPaG1x%oUfL7C-tZkQcH3y&qVhM8D+v#mRdJ4A*rWiO9F0w$nTeK6B)sYjPbG2x%pUgL7C-uZlQcI3z&qVhN8E+v!mSdJ4A(rXiOaF1w$oTfK6B)tYkPbH2y%pUgM7D-u#lRcI3z*qWhN9E0vL6C)tZkQbH3y&pV4A(rXiOaF1w$oTfK6B)tYkPbH2y%pUgM7D-u#lRcI3z*qWhN9E0v!mSeJ5A(sXjOaG1x$oTfL6C)tZkQbH2y&pVgM8D+u#lRdI4z*rWA(rXiO9F1w$nTfK6B)sYkPbG2y%pUgL7D-uZlRcI3z*qWhN8E0v!mSeJ5A(rXjOaF1x$oTfK6C)tYkQbH2y%pVgM7D+u#lRdI4z*qWiN9E0w!nSeJ5B(sXjPaG1x$oUfL6C-tZkQbH3y&pVhM8D+v#mRdI4A*rG2x%pUgL7C-uZlQcI3z&qVhN8E+v!mSdJ5A(rXiOaF1w$oTfK6B)tYkPbH2y%pUgM7D-u#lRcI3z*qWhN9E0v!nSeJ5A(sXjOaG1x$oTfL6C)tZkQbH2y&pVgM8D+u#lRdI4z*rWiN9E0w!nSeK5B(sYjPsYkPbG2y%pUgM7D-uZlRcI3z*qWhN8E0v!mSeJ5A(rXjOaF1x$oTfK6C)tYkQbH2y&pVgMPbG2y%pUgM7D-uZlRcI3z*qWhN8E0v!mSeJ5A(rXjOaF1x$oTfK6C)tYkQbH2y&pVgM7D+u#lRdI4z*qWiN9E0w!F1w$nTeK6B)sYkPbG2x%pUgL7D-uZlQcI3z&qWhN8E0v!mSdJ5A(rXjOaF1w$oTfK6C)tYkPbH2y%pVgM7D-u#lRcI4z*qWiN9E0v!nSeJ5B(sXjOaG1x$oUfL6CRdI4A*rWiO9F0w$nTeK5B)sYjPbG2x%oUgL7C-uZlQcH3z&qVhN8E+v#mSdJ4A(rXiO9F1w$nTfK6B)tYkPbG2y%pUgM7D-uZlRcI3z*qWhN8E0v!mSeJ5A(rXjOaF1x$oTfL6C)tYkQbH2y&p3z&qVhM8E+v#mSdJ4A*rXiO9F1w$nTeK6B)sYkPbG2xRdI4z*rWiN9E0w!nSeK5B(sYjPaG1x%oUfL7C-tZkQcH3y&qVhM8D+v#mRdJ4A*rWiO9F0w$nTeK6B)sYjPbG2x%pUgL7C-uZlQcrXjOaF1w$oTfK6C)tYkPbH2y%pVgM7D+u#lRcI4z*qWiN9E0v!nSeJ5B(sXjOaG1x$oUfL6C)tZkQbH3y&pVhM8D+u#mRdI4A*rWiN9F0w!nTeK5B(sYjPaG2x%oUfL7C-tZlQcH3z&qVh*qWhN9E0v!nSeJ5A(sXjOaG1x$oTfL6C)tZkQbH2y&pVgM8D+u#lRdI4z*rWiN9F0w!nSeK5B(sYjPaG1x%oUfL7C-tZkQcH3y&qVhM8D+vOaF1x$oTfK6C)tYkQbH2y%pVgM7D+u#lRdI4z*qWiN9E0w!nSeJ5B(sXjPaG1x$oUfL6C-tZkQbH3y&pVhM8D+v#mRdI4A*rWiO9F0w!nTeuZlQcI3z&qVhN8E+v!mSdJ4A(rXiOaF1w$oTfK6B)tYkPbH2y%pUgM7D-u#lRcI3z*qWhN9E0v!mSeJ5A(sXjOaG1x$oTfL6C)tZkQbH2y&pVgM8D+u#lRdI4z*rWiN9E0w!nSw$nTfK6B)sYkPbG2y%pUgM7D-uZlRcI3z*qWhN8E0v!mSeJ5A(rXjOaF1x$oTfK6C)tYkQbv#mRdJ4A*rXiO9F1w$nTeK6B)sYkPbG2x%pUgL7D-uZlQcI3z&qF1x$oTfK6C)tYkQbH2y&pVgM7D+u#lRdI4z*qWiN9E0w!nSeJ5B(sXjPaG1x$oUfL6C-tZkQcH3y&pVhM8D+v#mRdI4A*rWiO9F0w!nTeK5B)sYjPaG2x%oUgL7CSdJ5A(rXiOaF1w$oTfK6B)tYkPbH2y%pUgM7D-u#lRcI3z*qWhN9E0v!nSeJ5A(sXjOaG1x$oTfL6C)tZkQbH2y&pVgM8D+u#lRdI4z*rWiN9F0weJ5A(sXjOaF1x$oTfL6C)tYkQbH2y&pVgM8D+u#lRdI4z*rWiN9E0w!nSeK5B(sXjPaG1x%oUfL6C-tZkQcH3y&qVhM8D+v#mRdJ4APbG2x%pUgL7D-uZlQcI3z&qWhN8E0v!mSdJ5A(rXjOaF1w$oTfK6C)tYkPbH2y%pVgM7D-u#lRcI4z*qWhN9E0v!nSeJ5B(sXjOaG1x$oUfL6C)tZkQbH3y&pVgw!nTeK5B)sYjPbG2x%oUgL7C-uZlQcH3z&qVhN8E+v#qWhN9E0v!mSeJ5A(sXjOaYjPaG2x%oUgL7C-tZlQcH3z&qVhM8E+v#mSdJ4A(rXiO9F1w$nTfK6B)sYkPbG2y%pUgL7D-uZlRcI3z&qWhN8E0v!mSeJ5A(rXjOaF1x$oTfK6C)tI4z*rWiN9E0w!nSeK5B(sXjPaG1x%oUfL7C-tZkQcH3y&qVhM8D+v#mRdJ4A*rWiO9F0w$nTeK5B)sYjPbG2x%pUgL7C-uZlQcI3z&qVhN8E+v!mSdJ$oUfL6C-tZkQbH3y&pVhM8D+u#mRdI4A*rWiO9F0w!nTeK5B)sYj