葛根注射液抗心肌缺血作用藥理研究

郜清（1985-），女，江蘇南京人，主管藥師，從事藥品的調(diào)配工作。通訊作者：杜萍葛根注射液抗心肌缺血作用藥理研究郜清1（江蘇省中醫(yī)院，江蘇，南京，210029）顧燕2（江蘇睿博醫(yī)藥有限公司，江蘇，南京，211112）摘要：目的考察葛根注射液的抗心肌缺血作用。方法考察葛根注射液高中低劑量組對大鼠離體心臟左室峰壓（LVSP）、冠脈流量（CF）及大鼠離體心臟缺血再灌注后的LVSP、左室舒張期末壓（LVEDP）、心率（HR）、CF的影響。結(jié)果葛根注射液可升高大鼠離體心臟心肌收縮力及冠脈流量；對離體心臟缺血再灌注導(dǎo)致的LVSP和LVEDP的升高、心率及冠脈流量的降低均有對抗作用。結(jié)論葛根注射液具有抗心肌缺血的作用。關(guān)鍵詞：葛根注射液；大鼠；離體；抗心肌缺血PharmacologicalstudyonantimyocardialischemiaeffectofGegenInjectionGaoQing1(TheTraditionalChineseMedicineHospitalofJiangsuProvince,Nanjiang,Jiangsu,210029,China)GuYan2(JiangsuRuiBoPharmaceuticalCo.,Ltd.,Jiangsu,Nanjing,211112)Abstract:ObjectiveToinvestigatetheantimyocardialischemiaeffectofGegeninjection.MethodsDeterminethefirmlypressure(LVSP),coronaryflow(CF)ofratisolatedheartandLVSP,leftventricularenddiastolicpressure(LVEDP),heartrate(HR),CFofratisolatedheartwhichischemiaandreperfusioneffectofGegeninjectioninhigh,mediumandlowdosegroup.ResultsGegeninjectioncanincreasethemyocardialcontractilityandcoronaryflowinisolatedheartofrats.TheeffectofLVEDPandLVSPontheincreaseofheartrate,heartrateandcoronaryflowinisolatedheartischemiareperfusioninjury.ConclusionGegeninjectionhastheeffectofantimyocardialischemia.Keywords:Gegeninjection;rat;isolated;antimyocardialischemia葛根注射液由葛根提取純化制備而成，葛根中含有異黃酮類、葛根苷類、三萜皂苷等成分，具有擴張血管、改善微循環(huán)、保護缺血組織和抗組織缺血再灌注損傷、減少急性缺血梗死面積等多種作用。[1-4]臨床上葛根在心血管系統(tǒng)疾病治療中發(fā)揮了重要的作用。[5]本文通過葛根對大鼠離體心臟及大鼠離體心臟缺血再灌注的影響，考察其抗心肌缺血的作用。1.材料與方法1.1藥物葛根注射液，每支10ml，按生藥量計算為0.5g/ml，自制，批號：120201；丹參注射液，10ml/支，正大青春寶藥業(yè)有限公司，批號：12081121.2動物清潔級SD大鼠，由南京醫(yī)科大學(xué)提供。1.3試劑氯化鈉（NaCl）、氯化鉀（KCl）、氯化鈣（CaCl2）、磷酸二氫鉀（KH2PO4）、硫酸鎂（MgSO4?7H2O）、碳酸氫鈉（NaHCO3）、葡萄糖（Glucose）均為分析純。1.4儀器改良型Langendorff離體心臟灌流系統(tǒng)，4S離體血管灌流系統(tǒng)，Medlab-U/8c生物信號采集處理系統(tǒng)均購自南京美易科技有限公司；XYC型鼠斷頭器，淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司。1.5實驗方法1.5.1藥物及試液的配置K-H液配制方法：取NaCl6.92g，KCl0.35g，CaCl20.14g，KH2PO40.16g，MgSO4?7H2O0.29g，NaHCO32.1g，Glucose2.0g，采用新鮮蒸餾水配制成1L的溶液。配制時NaHCO3經(jīng)過充分的稀釋再加入已經(jīng)溶好的CaCl2中，邊加邊攪拌，以免產(chǎn)生混濁。含復(fù)方丹參注射液K-H液配制方法：取丹參注射液1ml，用K-H液配制成濃度為0.1%（v/v)為的溶液1L，為丹參注射液組。含葛根注射液K-H液配制方法：分別取葛根注射液（生藥2g/ml）0.5ml、1ml、2ml，用K-H液配制為1L的溶液，制得藥物濃度分別為0.05%、0.1%、0.2%（v/v)，按生藥量計算濃度分別為1mg/ml，2mg/ml，4mg/ml，分別作為葛根注射液低中高劑量組Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組。1.5.2對正常大鼠離體心臟的影響清潔級SD大鼠50只，體重300～350g，隨機分為5組，每組10只。即為（1）正常對照組；（2）丹參注射液組，給藥濃度0.1%；（3）葛根注射液Ⅰ組，給藥濃度含葛根0.05％；（4）葛根注射液Ⅱ組，給藥濃度含葛根0.1％；（5）葛根注射液Ⅲ組，給藥濃度含葛根0.2％。大鼠斷頭處死，迅速取出心臟，心臟上連有約4mm主動脈，放入冷的K-H液中，擠凈心臟中的殘血，剪去心臟上連的結(jié)締組織，迅速將心臟懸掛于Langendorff離體心臟灌流系統(tǒng)中，用K-H液逆行灌注（K-H液保持高度60～70cm，溫度37±0.5℃，用95％O2和5%CO2飽和）。（1）組灌流30min，（2）～（5）組平衡灌流20min后按各組的濃度給藥10min。用充滿水的球囊插入左心室，Medlab-U/8c生物信號采集處理系統(tǒng)記錄左室峰壓（LVSP），定時收集流出的K-H液（即為冠脈流量CF）。記錄K-H液灌注達到平衡點及給藥后1、3、5、10min時的LVSP及CF，比較各組之間的差異。1.5.3對正常大鼠離體心臟缺血再灌注的影響清潔級SD大鼠60只，體重300～350g，隨機分為6組，每組10只。分組方法同1.5.2。大鼠斷頭處死，迅速取出心臟，心臟上連有約4mm主動脈，放入冷的K-H液中，擠凈心臟中的殘血，剪去心臟上連的結(jié)締組織，迅速將心臟懸掛于Langendorff離體心臟灌流系統(tǒng)中，用K-H液逆行灌注（K-H液保持高度60～70cm，溫度37±0.5℃，用95％O2和5%CO2飽和）。（1）組灌流120min，（2）組灌流30min，停灌30min后再復(fù)灌60min，（3）～（6）平衡20min后按各組的濃度給藥10min，停灌30min后復(fù)灌60min。用充滿水的球囊插入左心室，Medlab-U8c生物信號采集處理系統(tǒng)記錄左室峰壓（LVSP）、左室舒張期末壓（LVEDP）、心率（HR）等指標(biāo)，定時收集流出的K-H液（即為冠脈流量CF）。記錄K-H液停灌前、復(fù)灌后5、15、30、60min時離體心臟的LVSP、LVEDP、HR和冠脈流量，比較各組間的差異。1.6統(tǒng)計處理采用SPSS17.0進行數(shù)據(jù)分析。觀測資料主要為計量數(shù)據(jù)，均通過正態(tài)性檢驗，文中以MEAN±SD描述之。多組多時點資料的比較為兩因素重復(fù)測量方差分析，兩兩比較則為成組t檢驗（組間）和差值t檢驗（時點間）。顯著性水準(zhǔn)α=0.05。2.結(jié)果2.1對正常大鼠離體心臟的影響2.1.1對正常大鼠離體心臟LVSP的影響正常組大鼠離體心臟用K-H液灌流20min時均平衡，在20min到30min之間，LVSP無明顯變化。葛根注射液各給藥組在用K-H液灌流20min時均達到平衡，用含藥K-H液灌流后LVSP均抬高，在給藥后5min后略有下降。葛根注射液大劑量組對正常大鼠離體心臟的心肌收縮力具有增強作用。平衡點給藥后的LVSP資料及統(tǒng)計結(jié)果詳見表1。表1葛根注射液對正常大鼠離體心臟LVSP的影響（±S，單位mmHg）時點\組別A1：正常對照組A2：丹參組A3：葛根Ⅰ組A4：葛根Ⅱ組A5：葛根Ⅲ組T1：平衡點99.9±25.4100.0±27.698.7±29.899.8±27.2102.1±29.5T2：藥后3分100.9±26.4100.6±26.9108.1±30.1113.9±27.3128.8±28.4T3：藥后5分100.7±26.9100.9±24.5109.9±31.1116.2±28.8127.4±28.0T4：藥后10分100.4±26.2100.3±22.8108.1±30.4113.7±28.3123.6±28.4整體分析F，P(HF系數(shù):0.8264)組間比較1.001，0.417時點間比較13.906，0.000組×?xí)r點2.801，0.005組間比較t，PA1vsA2A1vsA3A1vsA4A1vsA5T10.004，0.9970.103，0.9190.015，0.9890.175，0.863T20.027，0.9790.565，0.5791.080，0.2942.275，0.035T30.017，0.9860.706，0.4891.249，0.2282.175，0.043T40.008，0.9940.605，0.5531.088，0.2911.902，0.073時點比較t，PA1A2A3A4A5T2vsT10.103，0.9200.056，0.9570.804，0.4421.277，0.2342.854，0.019T3vsT10.079，0.9390.110，0.9151.137，0.2851.416，0.1902.390，0.041T4vsT10.045，0.9650.032，0.9750.887，0.3981.197，0.2622.143，0.0612.1.2對正常大鼠離體心臟CF的影響葛根注射液各組在K-H液灌流達到平衡點后用含藥K-H液灌流的10min內(nèi)，冠脈流量顯著增加，經(jīng)整體分析，組間及時點間以及交互作用分組×?xí)r間，均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），兩兩組間比較及各時點和藥前比較，也多有顯著性差異（P＜0.05），詳細(xì)資料及統(tǒng)計結(jié)果見表2。表2葛根注射液對正常大鼠離體心臟CF的影響（±S，單位ml）時點\組別A1：正常對照組A2：丹參組A3：葛根Ⅰ組A4：葛根Ⅱ組A5：葛根Ⅲ組T1：藥前7.1±1.07.1±0.37.0±0.97.3±1.07.0±0.9T2：藥后3分7.2±1.08.4±0.68.0±0.98.5±1.28.7±0.7T3：藥后5分7.1±1.18.4±0.78.3±0.78.7±1.08.5±0.9T4：藥后10分7.2±0.98.5±0.78.0±0.98.6±1.18.8±0.7整體分析F，P(HF系數(shù):0.8061)組間比較3.150，0.023時點間比較132.170，0.000組×?xí)r點9.087，0.000組間比較t，PA1vsA2A1vsA3A1vsA4A1vsA5T10.047，0.9630.190，0.8520.453，0.6560.230，0.821T23.235，0.0051.861，0.0792.631，0.0173.831，0.001T33.174，0.0052.906，0.0093.440，0.0033.110，0.006T43.656，0.0021.962，0.0653.147，0.0064.436，0.000時點比較t，PA1A2A3A4A5T2vsT10.333，0.7478.439，0.0002.828，0.0202.811，0.0206.581，0.000T3vsT10.006，0.9966.282，0.0004.262，0.0023.272，0.0103.954，0.003T4vsT10.249，0.8096.514，0.0002.469，0.0363.236，0.0105.605，0.0002.2對正常大鼠離體心臟缺血再灌注的影響2.2.1對正常大鼠離體心臟缺血再灌注LVSP的影響整體分析知組間差異不顯著，僅時間及交互作用有統(tǒng)計學(xué)意義。兩兩比較并結(jié)合數(shù)據(jù)來看：模型組大鼠離體心臟復(fù)灌后LVSP顯著上升，然后逐漸下降，和正常組大鼠離體心臟的LVSP相比，在復(fù)灌后5min及復(fù)灌后15min，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。葛根注射液各組均可以降低復(fù)灌時LVSP的升高，但與模型組比較，無統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果詳見表3。表3葛根注射液對正常大鼠離體心臟缺血再灌注LVSP的影響（±S，單位mmHg）時點\組別A1：正常對照組A2：模型組A3：丹參組A4：葛根Ⅰ組A5葛根Ⅱ組A6葛根Ⅲ組T1：停灌前100.4±26.399.7±23.0104.2±27.2108.2±30.8113.9±28.3123.6±28.2T2：灌后5分98.0±31.3192.1±88.7149.0±46.1139.9±56.5179.0±46.9175.0±55.4T3灌后15分98.6±33.1162.8±65.1105.7±18.2120.4±32.6139.1±54.3121.1±29.5T4：灌后30分95.0±34.2110.1±32.8106.5±30.5110.4±20.3106.2±35.4125.7±50.9T5：灌后60分93.6±34.293.3±25.393.9±29.098.5±26.198.3±33.0126.9±68.0整體分析F，P(HF系數(shù):0.7132)組間比較1.760，0.137時點間比較41.201，0.000組×?xí)r點3.829，0.000組間比較t，PA1vsA2A1vsA3A1vsA4A1vsA5A1vsA6T10.067，0.9470.313，0.7580.606，0.5521.097，0.2871.895，0.074T23.161，0.0052.888，0.0102.051，0.0554.534，0.0003.822，0.001T32.780，0.0120.594，0.5601.486，0.1552.015，0.0591.608，0.125T41.011，0.3250.792，0.4381.225，0.2360.717，0.48253.000，0.131T50.024，0.9810.016，0.988226.300，0.7250.313，0.7581.384，0.183時點比較t，PA1A2A3A4A5A6T2vsT10.247，0.8114.438，0.0023.028，0.0142.215，0.0544.256，0.0023.221，0.010T3vsT10.167，0.8714.021，0.0030.184，0.8581.152，0.2791.476，0.1740.224，0.828T4vsT10.529，0.6091.125，0.2900.184，0.8580.201，0.8450.562，0.5880.140，0.892T5vsT10.596，0.5660.803，0.4430.847，0.4190.966，0.3591.205，0.2590.211，0.8372.2.2對正常大鼠離體心臟缺血再灌注LVEDP的影響整體分析知，組間和時間及其交互作用均顯著（P＜0.05）；兩兩比較并結(jié)合主要數(shù)據(jù)來看：模型組大鼠離體心臟復(fù)灌后LVEDP迅速升高，然后維持在較高水平，和正常對照組相比，具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。葛根注射液中、高劑量組均可對抗心臟缺血再灌注導(dǎo)致的LVEDP的升高，和模型組相比，差異多有顯著（P＜0.05）。結(jié)果詳見表4。表4葛根注射液對正常大鼠離體心臟缺血再灌注LVEDP的影響（±S，單位mmHg）時點\組別A1：正常對照組A2：模型組A3：丹參組A4：葛根Ⅰ組A5葛根Ⅱ組A6葛根Ⅲ組T1：停灌前5.7±2.07.1±2.45.9±1.25.6±2.98.0±2.86.8±2.5T2：灌后5分6.1±2.143.1±12.027.9±10.838.7±11.628.4±11.715.7±5.0T3灌后15分6.1±1.932.2±11.613.3±5.428.1±11.112.0±5.613.6±5.7T4：灌后30分6.1±1.926.0±9.413.3±4.225.2±10.413.3±5.113.9±5.8T5：灌后60分6.8±3.423.4±6.714.5±5.922.3±8.114.0±5.013.0±5.4整體分析F，P(HF系數(shù):0.4620)組間比較16.332，0.000時點間比較178.403，0.000組×?xí)r點17.040，0.000組間比較t，PA1vsA2A1vsA3A1vsA4A1vsA5A1vsA6T11.420，0.1730.270，0.7900.090，0.9292.102，0.0501.078，0.295T29.588，0.0006.283，0.0008.714，0.0005.947，0.0005.587，0.000T36.994，0.0003.972，0.0016.182，0.0003.151，0.0063.939，0.001T46.553，0.0004.927，0.0005.703，0.0004.192，0.00144.600，0.001T56.992，0.0003.569，0.00250.100，0.0003.755，0.0013.080，0.006時點比較t，PA1A2A3A4A5A6T2vsT10.578，0.57815.222，0.0008.592，0.00010.470，0.0007.558，0.0006.121，0.000T3vsT10.556，0.5928.872，0.0005.771，0.0008.919，0.0002.808，0.0203.880，0.004T4vsT10.476，0.6458.116，0.0008.524，0.0008.768，0.0003.298，0.0094.109，0.003T5vsT11.062，0.31610.166，0.0006.673，0.0008.077，0.0003.504，0.0073.850，0.0042.2.3對正常大鼠離體心臟缺血再灌注HR的影響整體分析結(jié)果同前。兩兩比較并結(jié)合數(shù)據(jù)來看，主要為：模型組大鼠離體心臟缺血再灌注后心率明顯減慢，和正常對照組相比，在復(fù)灌后5min及復(fù)灌后15min差異顯著（P＜0.05）。葛根注射液各組均可以對抗離體心臟缺血再灌注導(dǎo)致的心率降低，葛根低劑量組和模型組相比，差異顯著（P＜0.05）。結(jié)果詳見表5。表5葛根注射液對正常大鼠離體心臟缺血再灌注HR的影響（±S，單位beats/min）時點\組別A1：正常對照組A2：模型組A3：丹參組A4：葛根Ⅰ組A5葛根Ⅱ組A6葛根Ⅲ組T1：停灌前280.8±53.5235.4±76.6262.0±28.2282.3±60.1296.3±44.1278.9±43.4T2：灌后5分275.6±55.282.4±28.7123.5±46.2115.5±49.7106.2±42.8129.6±57.6T3灌后15分275.2±57.4149.7±59.4239.2±63.6252.2±67.5237.2±90.1240.4±65.3T4：灌后30分273.2±55.9171.4±73.7228.9±57.6241.6±60.5269.0±57.3251.0±41.8T5：灌后60分267.9±55.1183.9±58.2219.5±56.0235.0±52.4250.6±48.9234.5±51.0整體分析F，P(HF系數(shù):0.6953)組間比較4.650，0.001時點間比較227.908，0.000組×?xí)r點11.496，0.000組間比較t，PA1vsA2A1vsA3A1vsA4A1vsA5A1vsA6T11.536，0.1420.983，0.3380.062，0.9510.709，0.4870.087，0.931T29.812，0.0006.677，0.0006.813，0.0007.669，0.0005.788，0.000T34.802，0.0001.329，0.2000.819，0.4231.123，0.2761.264，0.223T43.479，0.0031.746，0.0981.214，0.2400.164，0.872129.800，0.329T53.316，0.0041.948，0.06750.300，0.1890.741，0.4681.408，0.176時點比較t，PA1A2A3A4A5A6T2vsT10.241，0.8157.557，0.00010.794，0.0007.488，0.00013.104，0.0007.774，0.000T3vsT10.254，0.8053.857，0.0041.501，0.1671.158，0.2772.052，0.0701.788，0.107T4vsT10.385，0.7092.679，0.0252.187，0.0572.025，0.0741.231，0.2501.739，0.116T5vsT10.567，0.5851.867，0.0953.102，0.0131.974，0.0802.501，0.0342.379，0.0412.2.4對正常大鼠離體心臟缺血再灌注CF的影響整體分析結(jié)果同上。兩兩比較結(jié)果主要為：模型對照組大鼠離體心臟復(fù)灌后冠脈流量逐漸降低，在復(fù)灌15min以后和正常對照組相比差異顯著（P＜0.05）。葛根注射液各組在停灌時冠脈流量均顯著高于模型對照組（P＜0.05）；缺血再灌注后，葛根注射液各組冠脈流量均顯著高于模型組（P＜0.05），表明葛根注射液對抗缺血再灌注后冠脈流量的降低。結(jié)果詳見表6。表6葛根注射液對正常大鼠離體心臟缺血再灌注CF的影響（±S，單位ml）時點\組別A1：正常對照組A2：模型組A3：丹參組A4：葛根Ⅰ組A5葛根Ⅱ組A6葛根Ⅲ組T1：停灌前7.2±0.97.2±0.68.5±0.78.0±0.98.6±1.18.8±0.7T2：灌后5分7.0±0.96.5±2.06.8±1.06.4±1.06.7±1.17.1±0.9T3灌后15分6.8±0.94.8±1.06.1±1.15.1±1.26.0±1.16.3±0.6T4：灌后30分6.7±0.94.3±0.85.4±1.14.8±1.25.3±1.06.1±0.8T5：灌后60分6.3±1.03.2±0.84.6±1.64.1±0.94.4±1.04.8±0.8整體分析F，P(HF系數(shù):0.7737)組間比較4.676，0.001時點間比較297.560，0.000組×?xí)r點8.160，0.000組間比較t，PA1vsA2A1vsA3A1vsA4A1vsA5A1vsA6T10.000，1.0003.649，0.0021.982，0.0633.087，0.0064.367，0.000T20.707，0.4890.417，0.6811.369，0.1880.667，0.5130.247，0.807T34.822，0.0001.576，0.1323.533，0.0021.807，0.0881.560，0.136T46.368，0.0002.912，0.0094.090，0.0013.297，0.0048.900，0.118T57.705，0.0002.855，0.0117.600，0.0004.289，0.0003.766，0.001時點比較t，PA1A2A3A4A5A6T2vsT10.503，0.6271.663，0.1315.231，0.0014.129，0.0034.124，0.0034.949，0.001T3vsT11.063，0.3157.197，0.0006.976，0.0007.159，0.0005.689，0.00011.692，0.000T4vsT11.420，0.18912.325，0.0007.908，0.0009.656，0.0008.149，0.0009.831，0.000T5vsT12.418，0.03915.594，0.0009.482，0.00011.876，0.00010.590，0.00014.762，0.000討論葛根經(jīng)