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實驗七污水中噬菌體的分離與效價測定

實驗?zāi)康恼莆帐删w分離的基本原理和方法學(xué)會觀察噬菌斑了解噬菌斑的效價測定方法大腸菌群的鑒定（EMB培養(yǎng)基上的典型菌落的革蘭氏染色）噬菌體是專性寄生物，必需寄生細(xì)菌才能繁殖，伴隨細(xì)菌的分布而分布，只要有細(xì)菌的地方，就有噬菌體噬菌體顆粒可以在環(huán)境中獨立存活，但不能繁殖噬菌體對宿主的寄生通常具有特異性溫和噬菌體和烈性噬菌體烈性噬菌體在液體中，可以使渾濁的菌液變?yōu)槌吻辶倚允删w在固體瓊脂平板，可以形成透明的噬菌斑利用噬菌體斑的特征可以分離、純化、效價滴定基本原理噬菌斑的形成

在固體瓊脂培養(yǎng)基上，噬菌體感染細(xì)菌后，在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行核酸和蛋白質(zhì)的生物合成，最后裝配成噬菌體完整的顆粒，通過裂解宿主細(xì)胞釋放出來，使感染的細(xì)菌不能生長，從而形成肉眼可以觀察到的透明或渾濁的空斑，稱為噬菌斑。如何進(jìn)行噬菌體的純化挑取單一清晰可見的單個噬菌斑，接種液體培養(yǎng)基，并加入相同指示菌，鋪平板,得噬菌斑重復(fù)多次，可以得到由一個噬菌體的后代形成的噬菌斑，即獲得了純化的噬菌斑。觀測噬菌斑的特征如何測定噬菌體的效價效價指1ml培養(yǎng)液中所含有活的噬菌體的數(shù)量采用雙層瓊脂平板法，進(jìn)行噬菌斑的計數(shù)，計量單位為pfu，即plaqueformingunit(噬菌斑形成單位）。獲得的噬菌體濾液作10倍的倍比遞減稀釋取每個稀釋度噬菌體0.1ml加入0.9ml的指示菌，混勻后，加入到上層瓊脂，傾注平皿，選擇30

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