實驗3-線粒體和液泡系的

實驗三線粒體和液泡系的

超活染色與觀察一、實驗目的1、了解細胞和細胞器的超活染色技術。2、觀察動、植物活細胞內(nèi)線粒體、液泡的形態(tài)、數(shù)量和分布,了解植物細胞液泡系的發(fā)育過程。二、實驗原理

活體染色是指對生活有機體的細胞或組織能著色但又無毒害的一種染色方法。它的目的是顯示活細胞內(nèi)的某些結構，而不影響細胞的生命活動和產(chǎn)生任何物理、化學變化以致引起細胞的死亡?；钊炯夹g可用來研究生活狀態(tài)下的細胞形態(tài)結構和生理、病理狀態(tài)。根據(jù)所用染色劑的性質(zhì)和染色方法的不同，通常把活體染色分為體內(nèi)活染與體外活染兩類。體內(nèi)活染是以膠體狀的染料溶液注入動、植物體內(nèi)，染料的膠粒固定、堆積在細胞內(nèi)某些特殊結構里，達到易于識別的目的。體外活染又稱超活染色，它是由活的動、植物分離出部分細胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細胞的某種結構上而顯色?；铙w染色之所以能固定、堆積在細胞內(nèi)某些特殊的部分，主要是染料的“電化學”特性起重要作用。堿性染料的膠粒表面帶陽離子，酸性染料的膠粒表面帶有陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離子或陽離子，這樣，它們彼此就發(fā)生了吸引作用。但不是任何染料都可以作為活體染色劑之用，應選擇那些對細胞無毒性或毒性極小的染料，而且總要配成稀淡的溶液來使用。一般是以堿性染料最為適用，可能因為它具有溶解在類脂質(zhì)的特性，易于被細胞吸收，JanusgreenB和中性紅兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對于線粒體和液泡系的染色各有專一性。線粒體是細胞內(nèi)重要的細胞器，線粒體內(nèi)膜上分布有細胞色素氧化酶，該酶能使詹姆斯綠B保持在氧化狀態(tài)，呈現(xiàn)藍綠色從而使線粒體顯色，而細胞質(zhì)中的染料被還原成無色。液泡是細胞內(nèi)濃縮產(chǎn)物的主要場所，有十分重要的功能。中性紅是液泡的特殊染色劑，將液泡染成紅色。在活細胞中，細胞質(zhì)和細胞核不著色。如果細胞死亡，染料會彌散開來，使核著色。三、實驗用品（一）器材顯微鏡、恒溫水浴鍋、鑷子、刀片、載玻片、蓋玻片、吸管、牙簽、吸水紙等。（二）試劑1、Ringer溶液生理鹽水、緩沖液氯化鈉0.85g（變溫動物用0.65g）；氯化鉀0.25g；氯化鈣0.03g；蒸餾水100ml2、1/3000中性紅Ringer溶液棕色瓶備用。3．1/5000詹姆斯綠BRinger溶液最好現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充分氧化能力。

（三）材料人口腔上皮細胞洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細胞小麥幼根根尖四實驗方法(一)線粒體的超活染色與觀察詹納斯綠B能專一對線粒體進行超活染色，呈藍綠色。1、人口腔粘膜上皮細胞線粒體的超活染色觀察

載玻片→37℃水浴鍋的金屬板→滴兩滴詹納斯綠B染液牙簽→從口腔粘膜刮取上皮細胞→放入載玻片染液→染色10-15分鐘（注意不可使染液干燥,必要時可再加滴染液）

→蓋上蓋玻片用吸水紙吸去四周溢出的染液→觀察五、實驗結果在低倍鏡下，選擇平展的口腔上皮細胞，換高倍鏡進行觀察?？梢姳馄綘钌掀ぜ毎暮酥車|(zhì)中分布著一些被染成藍綠色的顆粒狀或短棒狀的結構，即線粒體。

線粒體2009年攝于新大生科院數(shù)碼互動顯微鏡室口腔頰部上皮細胞示線粒體2.洋蔥鱗莖表皮細胞線粒體的