便秘動(dòng)物模型的復(fù)制

便秘動(dòng)物模型的復(fù)制

目前，關(guān)于便秘動(dòng)物模型的研究報(bào)道有所增加，但報(bào)告的便秘模型僅模擬各種臨床便秘的特征。已有的研究表明,便秘動(dòng)物模型的研制常用小鼠,大鼠次之。大鼠、小鼠均具有易得、經(jīng)濟(jì)的優(yōu)點(diǎn),但小鼠耐受力較大鼠弱,不適宜長期造模給藥。觀察排便試驗(yàn)宜用小鼠,觀察腸道水吸收試驗(yàn)宜用大鼠,觀察胃腸運(yùn)動(dòng)則小鼠、大鼠均可。以下對當(dāng)前便秘動(dòng)物模型的復(fù)制方法進(jìn)行綜述及評價(jià),以期為研制新的便秘動(dòng)物模型提供參考。1大鼠便秘模型的構(gòu)建方法1.1連續(xù)多次灌胃對小鼠的2.活性炭組合的影響鄢順琴根據(jù)寒積中阻致腑氣不通的中醫(yī)理論,應(yīng)用質(zhì)量濃度為0.1?g/L的2?℃活性炭冰水按1?mL/只每天灌胃小鼠1次,連續(xù)3?d,結(jié)果模型小鼠出現(xiàn)首粒排便時(shí)間延遲、排便粒數(shù)減少等癥狀,與臨床寒積里實(shí)證的癥狀表現(xiàn)類似。該模型復(fù)制簡單,但應(yīng)注意活性炭冰水的濃度與溫度。1.2小鼠的急性毒性及組織病理學(xué)檢測該方法的原理是應(yīng)用自身糞便混懸液致小鼠急性細(xì)菌性腹膜炎,造成腸道動(dòng)力障礙致大便秘結(jié)。具體方法:將小鼠自身糞便少許磨碎,加生理鹽水制成0.1?g/L的混懸液,按1?mL/只每天灌胃給予1次,連續(xù)3?d。結(jié)果模型小鼠見豎毛、少動(dòng)、蜷曲蹲伏、不進(jìn)食,排便量明顯減少。解剖時(shí)可見腹腔內(nèi)有少量渾濁液體,腸管充血,表面有纖維素性沉積物附著,多數(shù)腸管充氣膨脹及部分腸管痙攣等表現(xiàn),與臨床陽明腑實(shí)證相似。該模型復(fù)制簡單,但應(yīng)注意自身糞便宜臨用現(xiàn)配。1.3小鼠體質(zhì)量變化該方法的原理是禁水不禁食,造成糞便形成時(shí)因缺水而燥結(jié)。具體方法為只喂飼小鼠大米,禁水,連續(xù)3?d。結(jié)果模型小鼠體質(zhì)量減輕,大便減少,糞便質(zhì)硬成珠狀,與中醫(yī)臨床陰液虧損型便秘的癥狀表現(xiàn)相似。該模型是目前便秘實(shí)驗(yàn)研究中應(yīng)用較多的一種,制備簡便,成功率高,但模型小鼠有時(shí)會出現(xiàn)無糞便現(xiàn)象。1.4動(dòng)物陰血壓60co甲狀腺素可加速機(jī)體代謝;利血平可耗竭機(jī)體內(nèi)的去甲腎上腺素,降低交感—腎上腺素能神經(jīng)的功能,使副交感神經(jīng)功能亢進(jìn);兩者并用可加速機(jī)體陰虛。60Co照射可損害血液系統(tǒng)致血流滯緩。以上三者并用可致動(dòng)物陰虛血瘀型便秘。蔡光先等采用每日灌胃給予小鼠甲狀腺素3?mg和利血平0.02?mg各1次,連續(xù)7?d,并于第6日時(shí)用60Co放療機(jī)以100?RAD(放射吸收量)進(jìn)行全身照射并禁水1?d,結(jié)果模型小鼠表現(xiàn)出體質(zhì)量下降、糞便干結(jié)、腸推進(jìn)率減慢等癥狀。1.5脾虛型便秘模型1.5.1推進(jìn)液壓大數(shù)據(jù)該方法的原理是飲食失節(jié)導(dǎo)致脾虛,脾虛氣血不足使腸道推進(jìn)無力致便秘。具體方法為每天按0.5?mL/只喂飼小鼠純度為100%的精煉豬油2次,連續(xù)8?d。結(jié)果模型小鼠表現(xiàn)出體質(zhì)量下降、糞便量少且以干硬為主等癥狀。1.5.2結(jié)果模型小鼠臨床模型根據(jù)“味過于酸,脾氣乃絕”、“欲令脾實(shí),食勿太酸”及“過寒傷陽”等中醫(yī)理論,王嵐等通過喂飼山西白醋和0?℃活性炭冰水復(fù)制小鼠陽虛便秘模型。具體方法:山西白醋首劑量按0.3?mL/只灌胃,以后每天按0.01?mL/g劑量灌胃,連續(xù)9?d;自第7天起,給醋的同時(shí)按0.04?mL/kg劑量分2次灌胃給予0.1?g/L的0?℃活性炭冰水,連續(xù)3?d。結(jié)果模型小鼠表現(xiàn)出腹脹、體質(zhì)量減輕、首粒排便時(shí)間延遲、排便粒數(shù)減少、腸推進(jìn)率減慢等癥狀,與臨床陽虛便秘的某些癥狀相似。該模型復(fù)制簡便,但模型復(fù)制過程中小鼠的死亡率較高,模型自然恢復(fù)較快。1.5.3游泳教育方法根據(jù)勞倦傷脾、勞則氣耗、飲食失常損傷脾胃及缺水引起腸道缺少水分致便秘等中醫(yī)理論,鄭學(xué)寶等采用隔日飲食加每天游泳2次(每次5?min),連續(xù)15?d;并于第13天起禁水只喂大米,持續(xù)3?d。結(jié)果模型小鼠出現(xiàn)皮松毛豎、缺乏光澤,消瘦,首粒排便時(shí)間延遲,糞便干結(jié)且粒數(shù)減少,腸推進(jìn)率減慢,結(jié)腸粘膜肥大細(xì)胞密度降低等一系列表現(xiàn),與臨床脾虛便秘的部分癥狀相符。1.6藥物便秘的模型1.6.1小鼠致臟器排汗許紹衡應(yīng)用硫糖鋁附著在胃腸粘膜表面減少胃腸液體滲出,使胃腸道內(nèi)液體減少,胃腸運(yùn)動(dòng)減慢致便秘這一性質(zhì)復(fù)制便秘模型。具體方法為將含質(zhì)量比為33.55%的硫糖鋁配制成質(zhì)量濃度為0.5?g/L的溶液,每天按1?mL/只灌胃小鼠1次,連續(xù)2?d,第3天劑量減半,結(jié)果模型小鼠出現(xiàn)首粒排便時(shí)間延長,4?h內(nèi)排便粒數(shù)減少等表現(xiàn)。本方法適用于瀉下藥物藥效的研究。1.6.2灌胃給予dc萬錦州等根據(jù)復(fù)方地芬諾酯(DC)具有收斂、促使大腸過分吸水引起腸蠕動(dòng)減緩,使動(dòng)物不排便或少排便的這一性質(zhì)復(fù)制便秘模型。具體方法為將小鼠禁食12?h后,按50?mg/kg一次灌胃給予DC,結(jié)果模型小鼠排便粒數(shù)顯著減少。該模型屬于非特異性便秘模型,采用一次性給藥,不影響動(dòng)物的生理功能,與臨床便秘癥狀相似,是目前便秘實(shí)驗(yàn)研究中應(yīng)用較多的模型之一。1.6.3小鼠糞便模型檢測許海塵等根據(jù)嗎啡可通過中樞與外周阿片受體結(jié)合,使機(jī)體腸道推進(jìn)減弱及排便數(shù)量減少這一作用機(jī)制復(fù)制便秘模型。具體方法為小鼠每日按2.5?mg/kg皮下注射鹽酸嗎啡1次,連續(xù)45?d。結(jié)果模型小鼠糞便質(zhì)量減輕,腸推進(jìn)率減慢,結(jié)腸c-kit陽性細(xì)胞數(shù)減少。該模型與臨床慢傳輸型便秘(STC)的病理特征相似,適合研究與阿片受體相關(guān)的STC的發(fā)生機(jī)制。2大鼠便秘模型的構(gòu)建方法2.1大鼠的糞便干燥王朝暉等應(yīng)用限水法復(fù)制便秘模型。具體方法為連續(xù)5?d測大鼠的日飲水量,取均值作為日飲水量;第1、2天給1/6的日飲水量,第3天至第6天給1/3的日飲水量,給水時(shí)間固定為上午8時(shí)和晚上10時(shí),結(jié)果模型大鼠出現(xiàn)糞便干燥如豌豆樣圓珠狀表現(xiàn)。同時(shí)還應(yīng)用胃腸運(yùn)動(dòng)抑制劑洛派丁胺和限水+洛派丁胺做對照,與限水法致大鼠便秘模型進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)限水+洛派丁胺組大鼠出現(xiàn)便秘,而單用洛派丁胺組大鼠未出現(xiàn)便秘。2.2灌胃對大鼠糞便的影響具體造模方法為0℃~4?℃冰水按2?mL/只每天灌胃給予大鼠1次,連續(xù)14?d,并恢復(fù)觀察14?d。結(jié)果:造模期間,模型大鼠在灌胃后3?h內(nèi)和灌胃后3~24?h內(nèi)排泄的糞便粒數(shù)和糞便含水量明顯減少;恢復(fù)期,其3~24?h內(nèi)排泄的糞便粒數(shù)和糞便含水量一直呈減少趨勢,其腸道對擴(kuò)張刺激的敏感性降低,回盲部和結(jié)腸部肥大細(xì)胞數(shù)和5-羥色胺陽性細(xì)胞面積均增多。該模型在生理、病理、生化指標(biāo)方面的變化與臨床便秘型腸易激綜合征類似,且模型復(fù)制簡單,為適合研究便秘型腸易激綜合征發(fā)病機(jī)制的模型。2.3灌胃給予0.d具體造模方法:山西白醋首劑量按5?mL/只灌胃,以后每天按3?mL/只灌胃1次,第7天起,給醋的同時(shí)按每5?mg/kg劑量灌胃給予0?℃活性炭冰水,連續(xù)3?d。結(jié)果模型大鼠出現(xiàn)毛發(fā)蓬松、倦怠蜷縮、體質(zhì)量減輕、首粒排便時(shí)間延遲、排便粒數(shù)減少等癥狀,而且腸推進(jìn)率減慢及胃腸激素、腸神經(jīng)遞質(zhì)分泌紊亂,與臨床陽虛便秘證的某些癥狀相似。該模自然恢復(fù)較快,模型動(dòng)物的排便時(shí)間和排便粒數(shù)受環(huán)境溫度的影響較大。2.4藥物便秘的模型2.4.1大鼠結(jié)腸解剖次碳酸鉍有收斂和積墜作用,可造成大便干涸并滯留于結(jié)腸內(nèi)。具體方法為用體積分?jǐn)?shù)為75%的次碳酸鉍水糊狀液按10?mL/只灌胃大鼠,2次/d,連續(xù)4?d,第5天起給予相同體積的水,第6天處死。解剖時(shí)可見模型大鼠結(jié)腸高度擴(kuò)張,腸腔內(nèi)有成形的較干糞塊積滯;肺泡內(nèi)巨噬細(xì)胞數(shù)量減少,肺泡有病理改變。該模型與臨床因燥屎內(nèi)結(jié)阻塞大腸,腑氣不通,肺氣上逆的表現(xiàn)相似,適合于“肺與大腸相表里”的本質(zhì)研究。2.4.2大鼠腸道肌間神經(jīng)纖維分布復(fù)方苯乙哌啶可直接作用于腸道平滑肌,使腸蠕動(dòng)減弱致便秘。劉海峰等將復(fù)方苯乙哌啶按8?mg/kg混入飼料中,連續(xù)喂養(yǎng)大鼠4個(gè)月。結(jié)果模型大鼠首粒排便時(shí)間延遲;結(jié)腸慢波收縮頻率減慢,振幅增大或強(qiáng)弱不等;結(jié)腸肌間神經(jīng)叢血管活性腸肽(VIP)能神經(jīng)元數(shù)量減少,節(jié)間束細(xì)小,節(jié)間束內(nèi)神經(jīng)纖維分布稀疏;結(jié)腸肌間神經(jīng)叢P物質(zhì)(SP)能神經(jīng)節(jié)增大,神經(jīng)束增粗,神經(jīng)元和神經(jīng)纖維增多。該模型與臨床STC的癥狀表現(xiàn)相似,適合于STC發(fā)病機(jī)制的研究,但造模時(shí)間較長。2.4.3模型大鼠腹瀉作用的模型見表1具體方法為用含有大黃粗粉的干飼料喂大鼠,首次給藥劑量為300?mg·kg-1·d-1,以后每日按300?mg遞增,達(dá)到腹瀉劑量時(shí),大黃劑量為900?mg·kg-1·d-1,維持此劑量至稀便消失,再按300?mg·kg-1·d-1遞增,如此循環(huán)并維持腹瀉作用飼養(yǎng)3個(gè)半月。結(jié)果模型大鼠出現(xiàn)便秘,結(jié)腸慢波頻率減慢、振幅降低,小腸和結(jié)腸中VIP神經(jīng)元含量降低,結(jié)腸中mu阿片受體和kappa阿片受體的最大結(jié)合數(shù)顯著增加等,是目前研究STC的常用模型。但造模時(shí)間長,且長期服用大黃本身可導(dǎo)致結(jié)腸神經(jīng)系統(tǒng)病變,該模型更適合于臨床因長期服用瀉劑導(dǎo)致結(jié)腸型便秘機(jī)制的研究。2.5大鼠腸道感染吳先哲等應(yīng)用直腸縮窄手術(shù)法復(fù)制大鼠便秘模型。具體方法為將大鼠麻醉后,開腹暴露直腸,10號絲線經(jīng)腹壁從距肛門1~1.5?cm處采用“8”字型從直腸下方繞過再經(jīng)腹壁引出,絲線引入點(diǎn)和引出點(diǎn)在腹壁相距約0.5?cm,在引出的絲線內(nèi)套入直徑為0.5?cm的鐵絲打結(jié),退出鐵絲后,直腸被部分縮窄并懸吊于腹壁,關(guān)閉腹腔。結(jié)果模型大鼠出現(xiàn)無排便,直腸結(jié)扎線以上密集地存積了堅(jiān)硬的糞便,腸管輕度擴(kuò)張,血漿中內(nèi)皮素(ET)和血清中腫瘤壞死因子α(TNF-α)的含量顯著升高等表現(xiàn),與臨床出口梗阻性便秘患者的某些癥狀相似。綜上所述,當(dāng)前復(fù)制便秘