巴特妥藥物的提取方法及藥物釋放研究

巴特妥藥物的提取方法及藥物釋放研究

1睡眠質(zhì)量的影響巴比妥酸是一種鎮(zhèn)靜劑和鎮(zhèn)靜劑。它會(huì)導(dǎo)致幾乎正常的睡眠，主要是由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制。如果大量藥物，也會(huì)抑制循環(huán)系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)。過(guò)量的藥物容易導(dǎo)致急性死亡。一般來(lái)說(shuō)，服用后大約10小時(shí)。長(zhǎng)期服用會(huì)導(dǎo)致藥物積累和死亡。許多國(guó)家嚴(yán)禁將巴比妥藥物用于人類，也禁止其作為飼料添加劑，獸藥臨床規(guī)定了巴比妥藥物的休藥期，防止動(dòng)物體內(nèi)該類藥物蓄積濃度過(guò)高而影響食用者安全。2樣本前處理方法2.1酶解纖維素ph體液中的巴比妥藥物提取方法主要有三種：NaOH堿解，pH12時(shí)使藥物轉(zhuǎn)化為鈉鹽進(jìn)入水相，水相再調(diào)節(jié)pH3.0～3.5，用有機(jī)溶劑萃取凈化；或β-葡萄糖酸苷酶磷酸緩沖溶液（pH6.5）于37℃酶解，使結(jié)合的和軛合的藥物釋放，酶解必須針對(duì)藥物的種類選擇適當(dāng)?shù)乃饷福换蛳驑颖局兄苯蛹尤肓姿峋彌_溶液調(diào)pH，水樣直接上SPE柱凈化。組織樣本一般選用甲醇作提取劑，提取方法有勻漿提取法、超聲波輔助提取、超臨界流體萃取、索氏提取和振蕩提取。2.2樣品篩選2.2.1spe和洗脫溶劑柱層析常用吸附劑為X-5樹脂，是一種新型大孔高分子樹脂，具有吸附量大、傳質(zhì)速度快、適用面廣的特點(diǎn)；對(duì)酸性、中性、堿性藥物都有較高的吸附率；樣品處理速度快，雜質(zhì)干擾少，在鎮(zhèn)靜安眠藥物的多殘留分析中廣泛應(yīng)用。SPE常用反相C18柱，如BondElutCertifySPE柱，常用洗脫劑為正己烷-乙酸己酯（LauraA.Adam,1998）。GDX-403固相萃取小柱是另一種常用的SPE柱（劉翠玲,1994）。2.2.2gc-ms法SMPE是在一根極細(xì)的纖維（如聚丙烯酸酯PA、聚乙二醇/二乙烯基苯CW/DVB等）上涂上吸附劑做成探針。探針插入液體或處于頂空狀態(tài)，經(jīng)過(guò)一定的平衡時(shí)間，探針吸附一定量的被測(cè)組分。將探針插入GC進(jìn)樣口，在高溫下被測(cè)組分被分解吸附，直接進(jìn)行GC檢測(cè)。BradJ.Hall等使用CW/DVB成功從尿樣中提取巴比妥藥物，并用GC-MS測(cè)定，LOD為1ng/ml。SMPE與LLE相比具有操作簡(jiǎn)便、提取速度快，減少有機(jī)溶劑的用量的優(yōu)點(diǎn)。與SPE相比SPME可以重復(fù)使用，不存在穿漏、堵塞等問(wèn)題。但SPME纖維沒有選擇性，用沉浸法提取樣本時(shí)，有大量的干擾物質(zhì)被同時(shí)提取，降低了測(cè)定的特異性和靈敏度。U.Staerk采用高溫SPME技術(shù)克服了這一缺點(diǎn)，在一個(gè)密封的小瓶中利用高溫（200℃）將藥物提取液加熱，使藥物揮發(fā)以蒸氣形式存在，采用頂空技術(shù)提取藥物，并在SPME的纖維上涂有衍生化試劑乙酸酐-吡啶，直接進(jìn)行GC-MS分析，司可巴比妥、苯巴比妥在Scan掃描模式下LOD為0.5μg/ml。2.2.3衍生化試劑法SBSE是一種新的從水樣（如血、尿）中提取富集有機(jī)物的樣本處理技術(shù)，原理是在一個(gè)玻璃棒上涂有一層聚二甲基硅氧烷（PDMS）樹脂，吸附水樣中的有機(jī)物。將玻棒與水樣以及衍生化試劑一同攪拌一段時(shí)間，取出玻棒，吸干水分，用適宜的有機(jī)溶劑洗脫靶標(biāo)分析物，進(jìn)行分析。對(duì)于揮發(fā)性或半揮發(fā)性的藥物，采用熱解吸（TD）技術(shù)，使SBSE與GC-MS或HPLC-MS聯(lián)用進(jìn)行在線分析。B.Tienpont等首先將SBSE-TD-GC-MS技術(shù)在測(cè)尿中巴比妥藥物時(shí)使用，乙酸酐作衍生化試劑，在Scan模式下LOD值為1μg/L,LOQ值為5μg/L。SIM模式下LOD值為10ng/L。2.2.4高效、應(yīng)用好SFE是利用超臨界流體（如超臨界CO2）作溶劑提取混合物中可溶性組分的一種前處理技術(shù)。具有速度快、效率高、選擇性好、應(yīng)用范圍廣、無(wú)毒不污染環(huán)境等優(yōu)點(diǎn)。利用超臨界CO2作溶劑，萃取溫度45℃，壓力550MPa下，GC直接測(cè)定了動(dòng)物胃、肝臟中的巴比妥藥物，提取率達(dá)89.98%，整個(gè)分析時(shí)間為40min（徐遠(yuǎn)清,2002）。3測(cè)量3.1檢測(cè)nd和fid的靈敏度巴比妥藥物極性較弱，熔點(diǎn)低，加熱易揮發(fā)，可用氣相色譜檢測(cè)。巴比妥藥物含有氮元素，NPD和FID均能檢測(cè)，NPD的靈敏度較高，LOD值在10～100ng/ml;FID的LOD值為10～400ng/ml。GC在安眠鎮(zhèn)靜藥物的多類別多殘留分析中發(fā)揮了重要作用，同時(shí)分離分析藥物達(dá)26種之多（霍秀敏,1994）。3.2衍生化藥物的檢測(cè)MS作為GC檢測(cè)器可以同時(shí)完成對(duì)巴比妥藥物的定性確證和定量分析。測(cè)巴比妥藥物，質(zhì)譜的電離方式有化學(xué)電離源（CI）或電子轟擊源（EI），內(nèi)標(biāo)法定量LOD值一般10ng/ml。巴比妥、戊巴比妥和異戊巴比妥的質(zhì)譜圖很類似，需要用色譜保留時(shí)間進(jìn)行區(qū)分。硫噴妥等藥物在GC分離時(shí)發(fā)生分解，分解產(chǎn)物產(chǎn)生與巴比妥相同的質(zhì)譜圖，需要GC與GC-MS綜合分析確定藥物成分。巴比妥藥物凈化后可直接用GC測(cè)定。但巴比妥藥物的丙二酰脲環(huán)結(jié)構(gòu)氮上有二個(gè)氫，采用衍生化技術(shù)可減小藥物的極性，提高靈敏度和分離效果，得到更好的峰形，提高定性定量的準(zhǔn)確性。巴比妥藥物的檢測(cè)限為10～30ng/ml，甲基化后降低為0.1～10ng/ml，常用的衍生化方法有甲基化、?；凸柰榛?。甲基化：巴比妥藥物甲基化后得到1,3-二甲基巴比妥藥物。常用的甲基化試劑是CH3I，丙酮介質(zhì)中加入K2CO3和CH3I,60℃下衍生1h?；驓溲趸募卒@（TMAH），在DMSO介質(zhì)中靜止反應(yīng)2min,TMAH又稱瞬時(shí)甲基化試劑（Ulla-Malja,1994）。乙?；喊捅韧姿幬锏沫h(huán)結(jié)構(gòu)氮上的活潑氫可被乙?；Ｔ谶拎ご嬖谙?，與乙酸酐在70℃反應(yīng)5min即可；或在K2CO3存在下，與乙酸酐常溫下靜止20min；或在乙醇：吡啶（2:1,V/V）條件下，與三氯乙酸（ECF）混勻，超聲15min。硅烷基化：巴比妥藥物的二酰脲結(jié)構(gòu)中有可烯醇化的酮基（鄰位氮原子有氫原子），易形成硅烷烯醇醚衍生物。硅烷基化試劑為BSTFA和TMS，在吡啶介質(zhì)中，靜止10min即可吹干進(jìn)行GC分析（Pocci,-R.,1992）。MSTFA是另一種常用的硅烷基化試劑。高靈敏度是殘留分析追求的永遠(yuǎn)主題。M.W.JvanHout首先將大體積進(jìn)樣技術(shù)（LVTs）和程序升溫汽化技術(shù)（PTV）用于巴比妥類藥物的殘留分析，進(jìn)樣量為50～100μl，建立了血中苯巴比妥、司可巴比妥等的GC-MS、GC-FID檢測(cè)方法，其中GC-FID的LOD值為5～10ng/ml,GC-MS的LOD值為250pg/ml。與一般的分流/不分流進(jìn)樣（1μl）相比靈敏度提高了50倍。3.3lod檢測(cè)柱和檢測(cè)波長(zhǎng)巴比妥的HPLC測(cè)定方法可在水相中進(jìn)行，樣品不需衍生處理。采用反相HPLC測(cè)定，測(cè)定常用的色譜柱是C18柱，檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器（UV），檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，一般以磷酸鹽緩沖溶液（PH3.5～7.8）-乙腈或甲醇-水作流動(dòng)相，內(nèi)標(biāo)法定量LOD最低可達(dá)0.35μg/ml。二極管陣列檢測(cè)器（DAD）和電化學(xué)檢測(cè)器（MartinD.Rose,1992）的檢測(cè)限較UV檢測(cè)器低。3.4藥物分離和高效分離巴比妥藥物的HPLC-MS測(cè)定多采用電噴霧電離ESI和大氣壓化學(xué)電離APCI,LOD值在20ng/ml左右。TimothyW.Ryan利用粒子束接口技術(shù)，EI/CI電離方式分析了12種巴比妥藥物，并用EI譜庫(kù)檢索，確證了藥物結(jié)構(gòu)，證明用HPLC-MS對(duì)巴比妥可以較好的定性。Hideko用磷酸鹽緩沖溶液-乙腈作流動(dòng)相，利用柱分離技術(shù)在樣本進(jìn)入MS前除去磷酸鹽緩沖溶液，提高分離效率，同時(shí)檢測(cè)苯二氮卓、巴比妥、吩噻嗪三類鎮(zhèn)靜藥物。膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳、膠束液相色譜、高效毛細(xì)管電泳、酶聯(lián)免疫以及光度法在巴比妥藥物的殘留分析中均有報(bào)道，但尚處于發(fā)展階段。4檢測(cè)前處理技術(shù)的研究對(duì)巴比妥藥物殘留檢測(cè)分析方法的研究，可以監(jiān)測(cè)動(dòng)物飼料、動(dòng)物疾病治療等濫用藥物的情況，保障食用者的安全。但在以下幾個(gè)方面還需加大研究力度：第一，動(dòng)物食品及組織中巴比妥藥物的檢測(cè)和復(fù)雜的前處理技術(shù)研究；第二，動(dòng)物食品中巴比妥藥物的檢測(cè)研究，（動(dòng)物食品中巴比妥藥物的檢測(cè)還沒有象其他藥物如氯霉素、瘦肉精一樣形成具體的