野生紅旗鉚釘菇培養(yǎng)基配方研究

野生紅旗鉚釘菇培養(yǎng)基配方研究

0紅外最優(yōu)設備及其制備紅景天是一門傘菌科的一門學科，俗稱松傘、松蘑菇和肉蘑菇。這是一種與油松林共生生物共生的細菌。在國內分布于遼、吉、黑、冀、滇、京,其味道鮮美,可治療神經性皮炎,具有很高的營養(yǎng)價值。近年隨著旅游業(yè)的發(fā)展和高強度的采收,血紅鉚釘菇野生資源與生存環(huán)境正在受到威脅和破壞。對于這樣一種共生菌,過去人們更多地是研究其對共生生物體抗逆境(包括抗病、抗干旱貧瘠等)以及促進生物體發(fā)育等方面的作用,而對于其本身資源的開發(fā)研究較少。對于其菌絲體的生長特性和培養(yǎng)基種類很少有研究報道。作者從連續(xù)2年分離出的野生子實體菌絲,詳細觀察了菌絲的生長特性,研究了鉚釘菇各級菌種的制作以及液體菌種的培養(yǎng)。以便為鉚釘菇的人工保育和半人工栽培提供技術支持。1材料和方法1.1試驗中的細菌菌種來自2006年和2007年延慶四海油松林地的野生血紅鉚釘菇子實體組織分離物,經觀察2年分離的菌種長勢和菌絲形態(tài)一致。1.2不同配方馬鈴薯vb1的培養(yǎng)1)PDA馬鈴薯200g,葡萄糖20g,瓊脂20g,水1000mL,2)PDA綜合培養(yǎng)基:PDA+KH2PO43.0g,MgSO4·7H2O1.5g,VB1微量,pH6.0,3)PDA+松針水(10%松針水浸液煮制馬鈴薯),4)PDA+5%麩皮(5%麩皮水煮液過濾煮制馬鈴薯),5)PDA+5%玉米粉(5%玉米粉浸出液過濾煮制馬鈴薯),6)PDA+10%腐熟糞草浸出液,7)PDA+10%油松林地土水浸液。在無菌條件下將鉚釘菇菌種先置于90mm直徑培養(yǎng)皿PDA培養(yǎng)基培養(yǎng),然后打成5mm直徑圓片,放于上述不同配方的培養(yǎng)皿中,每皿一片,置于25℃培養(yǎng)觀察。每個配方接種5個培養(yǎng)皿。培養(yǎng)試管斜面,取2支放入-18℃冰箱,3天后取出恢復培養(yǎng)。1.3水曲奇類型2,2,4;5%日本聚乙烯7.1)發(fā)酵玉米芯42%,棉子殼42%,麩皮15%,酵母浸粉0.2%,磷肥少許,2)棉子殼50%,木屑25%,麩皮10%,豆粉5%,過磷酸鈣4%,石灰1%,3)棉子殼65%,草炭土30%,玉米粉5%,酵母浸粉0.4%,4)松樹林地土40%,發(fā)酵玉米芯45%,麩皮10%,玉米粉5%,10%松針水,5)麥粒種:麥粒1000g水浸泡24h→煮透無白心→撈起控水→拌入蔗糖50g、碳酸鈣60g。將上述不同配方與水混勻(1:1.1～1.2)后,121℃滅菌2h,降至室溫接種。每個配方接種二級種10瓶(250mL),三級種10瓶。置于25℃培養(yǎng)。1.4不同濃度pd+雙溶劑復合膠囊的制備1)PD培養(yǎng)基:馬鈴薯200g,葡萄糖20g,水1000mL,2)PD綜合培養(yǎng)基:馬鈴薯200g,葡萄糖20g,硫酸二氫鉀3g,MgSO4·7H2O1.5g,VB1微量20mg,水1000mL,3)天門冬酰氨1g,葡萄糖10g,磷酸二氫鉀1.0g,水1000mL,4)PD+松針水10%(100g松針1000mL水浸泡24h,取上清液),5)PD+玉米粉5%,6)PD+松土水10%,7)PD+麩皮5%,8)PD+酵母浸粉0.2%,9)PD+腐熟糞草浸出液10%每個配方接種4個250mL三角瓶中,每個三角瓶接種5個5mm直徑的血紅鉚釘菇菌絲圓片,25℃,150r/min,搖菌88h后,取50mL菌液離心,沉淀45℃烘干后稱重,每個處理4次重復。2結果與分析2.1培養(yǎng)基配方對全餅pda水平餅的生長結果25℃條件下,血紅鉚釘菇菌絲在PDA試管斜面上4～5天長滿,在-18℃冷凍3天后仍能恢復生長,菌絲具有很強的抗凍能力。在平皿上不同培養(yǎng)基配方3天即可長滿全皿。以PDA玉米粉培養(yǎng)基上長得最好,其菌絲滿皿時間最快,2天即長滿全皿,3天時菌絲濃白,氣生菌絲量中等;在PDA松針水和PDA牛糞的菌絲密度較稀疏,長勢最差;在其他4種培養(yǎng)基均能較好的生長,菌絲密度基本相同,從生長勢看,以PDA綜合>PDA>PDA麩皮>PDA林地土。見表1。2.2棉籽殼和玉米芯的添加比例對培養(yǎng)基的影響由表2可知,固體培養(yǎng)基配方以松林土(配方4))、棉籽殼配合玉米芯(配方1))是鉚釘菇固體培養(yǎng)的適宜培養(yǎng)基,12～13天長滿瓶,其菌絲濃白,料內菌絲健壯;棉籽殼添加草炭土(配方3))可以增加培養(yǎng)基的通透性,加快菌絲生長的速度,菌袋最早長滿,僅需要11天,但基料內菌絲稀薄,不夠健壯;棉子殼添加木屑(配方2))菌絲生長的速度最慢,需17～18天滿瓶,但菌絲緊密健壯。麥粒種(配方5))也是適宜的培養(yǎng)基。從成本綜合比較以棉籽殼配合玉米芯(配方1))較好。試驗中還采用了33×17cm塑料袋制作菌種,發(fā)現(xiàn)以棉籽殼為主料的配方菌棒堅硬,菌絲致密,而含有草炭的配方菌袋較軟,掰開菌絲觀察菌絲細弱。2.3不同配方地絲的及其菌球液體培養(yǎng)結果見表3,搖菌48h內,各配方液體菌絲均為大的菌球,以后出現(xiàn)小菌球。不同配方菌絲的濃密程度、形成菌球的形狀和顏色都有差異。在添加了松針、玉米粉、松林土、麩皮、酵母、糞草的配方中,菌絲都近似絮絲狀,多數(shù)菌絲稠密,而PD、PD綜合和以天門冬氨酸為主的配方中,菌絲都近似圓形。沒有加入PD的天門冬酰氨配方,在形成大菌絲球后,很少再出現(xiàn)小的菌球。從烘干后的菌絲干物重看,9種配方差異顯著,以含玉米粉配方的極顯著地高于其他配方,其次為含糞和酵母的液體配方。松針水、麩皮的配方也較高。而沒有添加PD的天門冬氨酸配方干物重最少,由此看出以PD為主的液體配方都適合血紅鉚釘菇菌絲的生長。3菌種生長及配方的確定有研究報道血紅鉚釘菇在以菇類子實體和玉米為主要成分的培養(yǎng)基上分離成功率達6.7%;這表明適當添加玉米粉可以促進血紅鉚釘菇菌絲體的生長,該實驗一級種和液體菌種的培養(yǎng)進一步證明了這一結論。液體培養(yǎng)表明血紅鉚釘菇在以PD為基礎的培養(yǎng)基上均能生長良好。在此基礎上添加酵母、玉米粉浸出液能使菌絲生長更加濃密、健壯。在固體培養(yǎng)基配方中以棉籽殼或松林土配合發(fā)酵玉米芯