臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)課件

臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)

11分析前的質(zhì)量控制要點(diǎn)有哪些？在選購全自動(dòng)生化分析儀時(shí),應(yīng)重點(diǎn)了解哪些基本知識(shí)?如何選擇校準(zhǔn)物質(zhì)?校準(zhǔn)方法?校準(zhǔn)頻率?全自動(dòng)生化分析儀常見的交叉污染的原因?22分析前的質(zhì)量控制要點(diǎn)有哪些?3分析前的質(zhì)量控制要點(diǎn)有哪些?3生化檢驗(yàn)過程的三階段I

分析前醫(yī)生接診，開檢驗(yàn)申請(qǐng)單患者準(zhǔn)備（生理特征、狀態(tài)）標(biāo)本采集、標(biāo)本運(yùn)送標(biāo)本處理

II分析中

標(biāo)本檢測

III分析后結(jié)果審核、報(bào)告發(fā)出對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的正確評(píng)價(jià)和解釋4生化檢驗(yàn)過程的三階段I分析前III分析后4分析前：是指從臨床醫(yī)生開出檢驗(yàn)單開始，到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)入分析檢驗(yàn)的這一段過程。包括檢驗(yàn)申請(qǐng)、患者準(zhǔn)備、原始樣品的采集、運(yùn)送和實(shí)驗(yàn)室預(yù)處理等步驟。5分析前：是指從臨床醫(yī)生開出檢驗(yàn)單開始，5一、實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)計(jì)分析前：68.2%分析中：13.3%分析后：18.5%~74%未對(duì)病人造成不良影響~19%造成對(duì)病人做進(jìn)一步的檢查~6.4%造成對(duì)病人的治療方案修改

——ClinicalChemistry1977,43(8):1348~13516一、實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)計(jì)分析前：68.2%6重要性分析前質(zhì)量管理是一個(gè)最薄弱的環(huán)節(jié)，影響檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量占60%以上從“檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)”的要求來看，檢驗(yàn)不能只考慮分析階段的質(zhì)量保證，還必須重視和參與分析前的質(zhì)量保證《分析前因素對(duì)臨床檢驗(yàn)結(jié)果影響》第3版人民衛(wèi)生出版社7重要性分析前質(zhì)量管理是一個(gè)最薄弱的環(huán)節(jié)，影響檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量占6第二章第十五條醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有分析前質(zhì)量保證措施制定患者準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、標(biāo)本儲(chǔ)存、標(biāo)本運(yùn)送、標(biāo)本接收等標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程目的：確保檢驗(yàn)前程序處于受控狀態(tài)衛(wèi)生部文件衛(wèi)生部關(guān)于印發(fā)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》的通知8第二章第十五條醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有分析前質(zhì)量保證措1、患者準(zhǔn)備控制的要點(diǎn)①不可變的生物因素：年齡、性別、種族等生理節(jié)律變化（日周期、月周期、妊娠、季節(jié)、海拔）②可變的生物因素：情緒、運(yùn)動(dòng)、飲食、飲酒、藥物③其他

如采取標(biāo)本時(shí)：體位、止血帶等91、患者準(zhǔn)備控制的要點(diǎn)①不可變的生物因素：91.患者準(zhǔn)備控制的要點(diǎn)

作好解釋工作

即向患者說明作該項(xiàng)檢驗(yàn)的目的及注意事項(xiàng)，消除在抽血時(shí)的恐懼和緊張。避免飲食、藥物的影響盡力爭取患者的協(xié)助

特別是餐后2h血糖或糖耐量實(shí)驗(yàn)，要告之方法、注意事項(xiàng)。101.患者準(zhǔn)備控制的要點(diǎn)

作好解釋工作即向患者說明2、血液標(biāo)本的采集112、血液標(biāo)本的采集11采血順序

血培養(yǎng)→凝血像→肝功免疫→急診生化→血常規(guī)→血沉

根據(jù)CLSIH3-A5文件12采血順序12

最佳采樣時(shí)間的選擇晨起空腹時(shí)或者禁食12h

能減少晝夜節(jié)律帶來的影響患者處于平靜狀態(tài)，減少由于運(yùn)動(dòng)帶來的影響減少飲食的影響易于與正常參考范圍作比較檢出陽性率最高的時(shí)間：如血培養(yǎng)對(duì)診斷最有價(jià)值的時(shí)間：如餐后2h血糖13最佳采樣時(shí)間的選擇晨起空腹時(shí)或者禁食12h13采集部位靜脈穿刺

采血部位:常選擇肘靜脈或頸靜脈應(yīng)該在非水腫,非炎癥部位采血同時(shí)不能在任何輸液的“下游”采血

電解質(zhì)(鈉、鉀、氯結(jié)果錯(cuò)誤）葡萄糖（葡萄糖濃度升高）輸血（血紅蛋白結(jié)果錯(cuò)誤）14采集部位靜脈穿刺14患者識(shí)別

標(biāo)本采集前應(yīng)核實(shí)患者身份口頭確認(rèn)、腕帶掃描問題：確認(rèn)患者姓名是由護(hù)士發(fā)問還是患者自報(bào)名字？？？15患者識(shí)別標(biāo)本采集前應(yīng)核實(shí)患者身份15避免溶血顯性溶血：當(dāng)血紅素等于或者大于300mg/L時(shí)能肉眼觀察到。非顯性溶血：肉眼觀察不到的溶血。16避免溶血顯性溶血：當(dāng)血紅素等于或者大于300mg/L時(shí)16溶血標(biāo)本

項(xiàng)目紅細(xì)胞/血漿溶血標(biāo)本/正常標(biāo)本

氯0.501.05

鉀22.7

1.91

磷0.78-2.64

鈣0.100.96ALT6.72.2AST40.03.59LDH180.0

8.04CK100

14.08Cr1.631.94UA0.550.50Glu0.820.91BUN0.821.1417溶血標(biāo)本項(xiàng)目抗凝劑的選擇及影響EDTA、NaF、草酸鹽等不能用于鈣離子測定含有K、Na離子的抗凝劑不能用于測定K、Na離子標(biāo)本的抗凝草酸鹽、氟化物不能用于酶法測定

草酸鹽可抑制Amy、Acp、LDH的活性氟化物可激活尿素酶、淀粉酶等凝血因子檢測用枸櫞酸鈉抗凝優(yōu)于草酸鹽18抗凝劑的選擇及影響EDTA、NaF、草酸鹽等不能用于鈣離子測3、標(biāo)本的唯一標(biāo)志性標(biāo)本容器的標(biāo)簽上至少應(yīng)注明下列內(nèi)容：

患者姓名及病歷號(hào)送檢科別及病床號(hào)送檢標(biāo)本名稱及量檢驗(yàn)項(xiàng)目采集標(biāo)本的時(shí)間唯一條碼號(hào)防止張冠李戴193、標(biāo)本的唯一標(biāo)志性標(biāo)本容器的標(biāo)簽上至少應(yīng)注明下列內(nèi)容：194、標(biāo)本的拒收下列情況可拒收（各臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有規(guī)定）

溶血、脂血嚴(yán)重者（視病情而定）抗凝血中有凝塊；該抗凝未加抗凝劑者血量不足（如血沉、PT等）不應(yīng)接觸空氣的接觸了空氣標(biāo)本采集與送檢時(shí)間間隔過長者該加防腐劑未加防腐劑者用錯(cuò)真空采血管者唯一性標(biāo)識(shí)錯(cuò)誤或不清楚者204、標(biāo)本的拒收下列情況可拒收（各臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有規(guī)定）20案例分析檢測項(xiàng)目結(jié)果參考范圍單位

鉀23.73.5-5.5mmol/LALP-240-120U/L

鈣0.302.10-2.60mmol/L其他項(xiàng)目正常21案例分析檢測項(xiàng)目結(jié)果原因護(hù)士采血用的真空管拿錯(cuò),用的EDTA-K3采的生化標(biāo)本，然后倒進(jìn)生化用管中。真空管含鉀；血漿中的鈣離子被熬合。

不二過，不諉過22原因護(hù)士采血用的真空管拿錯(cuò),用的EDTA-K3采的生化標(biāo)本，

在選購全自動(dòng)生化分析儀的時(shí)候，應(yīng)重點(diǎn)了解哪些基本知識(shí)？23在選購全自動(dòng)生化分析儀的時(shí)候，23一、自動(dòng)生化分析儀簡介概念：是將臨床化學(xué)分析過程中的加樣過程中的加樣、加試劑、混合、孵育反應(yīng)、檢測、結(jié)果計(jì)算、打印及實(shí)驗(yàn)后清洗等步驟進(jìn)行自動(dòng)化操作的儀器具有快速、簡便、靈敏、準(zhǔn)確、標(biāo)準(zhǔn)化、微量等特點(diǎn)24一、自動(dòng)生化分析儀簡介概念：是將臨床化學(xué)分析過程中的加樣過程自動(dòng)生化分析儀分類按反應(yīng)裝置的結(jié)構(gòu)：

連續(xù)流動(dòng)式、離心式、分立式、干片式按自動(dòng)化程度

全自動(dòng)型、半自動(dòng)型按同時(shí)可測項(xiàng)目

單通道、多通道按儀器的復(fù)雜程度及功能

小型、中型、大型25自動(dòng)生化分析儀分類按反應(yīng)裝置的結(jié)構(gòu)：25生化分析儀的常用技術(shù)光譜分析技術(shù)

a.免疫比濁法

b.紫外可見分光光度法

終點(diǎn)分析法、連續(xù)監(jiān)測法

c.反射光度法26生化分析儀的常用技術(shù)光譜分析技術(shù)26紫外可見分光光度法概念：是利用某些物質(zhì)的分子吸收200-800nm光譜區(qū)的輻射來進(jìn)行分析測定的方法?？梢娮贤夤獾姆秶?/p>

紫外光的范圍：200——400nm

可見光的范圍：400——760nm27紫外可見分光光度法概念：是利用某些物質(zhì)的分子吸收200-8光吸收的基本定律：朗伯比爾定律定義：當(dāng)一束平行單色光垂直同過某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時(shí)，其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度C及吸收層厚度b成正比。用途：化學(xué)法及酶學(xué)終點(diǎn)法的測定。

A=-logT=K×b×cA：為吸光度

K：摩爾吸光系數(shù)

b:液層厚度（光徑）

c:吸收物質(zhì)的濃度28光吸收的基本定律：朗伯比爾定律定義：當(dāng)一束平行單色光垂直同過透射比濁法在光源的光路方向上測量透射光強(qiáng)度與人射光強(qiáng)度的比值和膠體溶液中質(zhì)點(diǎn)間的關(guān)系稱為透射比濁法29透射比濁法29比色分析：反應(yīng)類型直接測量：

具有特征性的吸收峰，不經(jīng)任何反應(yīng)直接在指定波長測量單一反應(yīng)：待測反應(yīng)本身有特征性吸收峰的底物或產(chǎn)物量的變化偶聯(lián)反應(yīng)：底物或產(chǎn)物無特征性吸收峰，需經(jīng)過其他反應(yīng)生成有特征性吸收峰測量的化合物。這種反應(yīng)稱為指示反應(yīng)30比色分析：反應(yīng)類型直接測量：30比色分析：干擾因素溶血：血紅蛋白及其它內(nèi)容物的釋放黃疸：影響光度測量脂血：干擾光度測量，污損管路31比色分析：干擾因素溶血：血紅蛋白及其它內(nèi)容物的釋放31二、指示反應(yīng)及波長常見的指示反應(yīng)

脫氫酶系統(tǒng)（ALT、AST、LDH、CK）

NADH或NADPH作底物或產(chǎn)物用340nm/405nm

硝基苯衍生物系統(tǒng)（ALP、GGT、AMY）

硝基苯衍生物的用405/476nm

過氧化物酶系統(tǒng)（GIU、UA、CHO/HDL/LDL）

Trinder反應(yīng)多用520/600nm,550/660nm32二、指示反應(yīng)及波長常見的指示反應(yīng)32三、生化分析的檢測方法

終點(diǎn)分析法：一點(diǎn)終點(diǎn)法，兩點(diǎn)終點(diǎn)分析法

固定時(shí)間法

連續(xù)監(jiān)測法：兩點(diǎn)速率法，多點(diǎn)速率法33三、生化分析的檢測方法331、終點(diǎn)法一點(diǎn)終點(diǎn)法：當(dāng)待測物質(zhì)與試劑的反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)，測定吸光度，計(jì)算待測物的濃度優(yōu)點(diǎn)：吸光度穩(wěn)定，對(duì)溫度、時(shí)間和顯色劑用量要求不高不足：反應(yīng)時(shí)間長測定項(xiàng)目：TP、Alb、Mg341、終點(diǎn)法一點(diǎn)終點(diǎn)法：當(dāng)待測物質(zhì)與試劑的反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)，測定1、終點(diǎn)法兩點(diǎn)終點(diǎn)法：在被測物質(zhì)反應(yīng)或指示反應(yīng)尚未開始時(shí)，選擇第一個(gè)吸光度，在反應(yīng)到達(dá)平衡時(shí)選擇第二個(gè)吸光度，此兩點(diǎn)吸光度之差用于計(jì)算結(jié)果。能減少溶血、黃疸和脂濁等造成的干擾測定項(xiàng)目：TP、Alb、Mg351、終點(diǎn)法兩點(diǎn)終點(diǎn)法：352、固定時(shí)間法指在時(shí)間—吸光度曲線上取尚在反應(yīng)中的兩點(diǎn)間的差值來計(jì)算結(jié)果。此兩點(diǎn)即不是反應(yīng)的起點(diǎn)也不是終點(diǎn)。該分析方法有助于解決某些反應(yīng)的非特異性問題測定項(xiàng)目：Crea苦味酸法362、固定時(shí)間法指在時(shí)間—吸光度曲線上取尚在反應(yīng)中的兩點(diǎn)間的差3、動(dòng)力法（連續(xù)監(jiān)測法）動(dòng)力學(xué)法：在零級(jí)反應(yīng)期連續(xù)測定酶促反應(yīng)過程中的底物或產(chǎn)物量的變化，求出酶反應(yīng)初速度，間接計(jì)算出酶活力濃度主要用于酶活性及其代謝產(chǎn)物的測定測定結(jié)果較終點(diǎn)法準(zhǔn)確不需要終止反應(yīng)373、動(dòng)力法（連續(xù)監(jiān)測法）動(dòng)力學(xué)法：在零級(jí)反應(yīng)期連續(xù)測定酶促反四、自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)

樣品及運(yùn)送系統(tǒng)試劑系統(tǒng)檢測系統(tǒng)清洗及管路系統(tǒng)微機(jī)管理系統(tǒng)38四、自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)樣品及運(yùn)送系統(tǒng)38如何選擇校準(zhǔn)物質(zhì)？

校準(zhǔn)方法？

校準(zhǔn)頻率？

39如何選擇校準(zhǔn)物質(zhì)？

校準(zhǔn)方法？

校準(zhǔn)頻率？

39校準(zhǔn)的定義校準(zhǔn)是一個(gè)測試和調(diào)整儀器、試劑或檢測系統(tǒng)以提供檢驗(yàn)反應(yīng)和所測物質(zhì)之間的已知關(guān)系的過程校準(zhǔn)決定在規(guī)定范圍內(nèi)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性40校準(zhǔn)的定義校準(zhǔn)是一個(gè)測試和調(diào)整儀器、試劑或檢測系統(tǒng)以提供40校準(zhǔn)物質(zhì)的選擇傳統(tǒng)的臨床檢驗(yàn)，要使檢驗(yàn)結(jié)果可靠或有依據(jù)，往往有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品為了克服純標(biāo)準(zhǔn)液和患者樣品間的基體差異，20年前開始引用具有與患者樣品基質(zhì)相似的校準(zhǔn)品替代標(biāo)準(zhǔn)品，用于日常工作

什么是校準(zhǔn)品？41校準(zhǔn)物質(zhì)的選擇傳統(tǒng)的臨床檢驗(yàn)，要使檢驗(yàn)結(jié)果可靠或有依據(jù)，往往校準(zhǔn)物質(zhì)的選擇SFDA批準(zhǔn)生產(chǎn)和注冊(cè)登記的儀器、試劑和檢測系統(tǒng)

實(shí)驗(yàn)室使用制造商規(guī)定的校準(zhǔn)品當(dāng)使用SFDA未審批的方法時(shí)

選擇合適的（配套的）標(biāo)準(zhǔn)品/校準(zhǔn)品如有可能，校準(zhǔn)品應(yīng)能溯源到參考方法或參考物質(zhì)42校準(zhǔn)物質(zhì)的選擇SFDA批準(zhǔn)生產(chǎn)和注冊(cè)登記的儀器、試劑和檢測系校準(zhǔn)頻率根據(jù)檢測項(xiàng)目方法和試劑的穩(wěn)定性不同而定每日校準(zhǔn)CO2ISE

每周校準(zhǔn)試劑不穩(wěn)定的特殊項(xiàng)目每月校準(zhǔn)大部分生化項(xiàng)目（21天左右）每兩月校準(zhǔn)特殊項(xiàng)目

所有項(xiàng)目至少每六個(gè)月校準(zhǔn)一次43校準(zhǔn)頻率根據(jù)檢測項(xiàng)目方法和試劑的穩(wěn)定性不同而定43如有下列情況發(fā)生時(shí)，必須進(jìn)行校準(zhǔn)改變?cè)噭┑姆N類，或者批號(hào)改變儀器或者檢測系統(tǒng)進(jìn)行了一次大的預(yù)防性維護(hù)不或者更換了重要部件質(zhì)控反映出異常的趨勢或偏移，或者超出了實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的接受限，采取一般性糾正措施后，不能識(shí)別和糾正問題時(shí)44如有下列情況發(fā)生時(shí)，必須進(jìn)行校準(zhǔn)改變?cè)噭┑姆N類，或者批號(hào)改變校準(zhǔn)方法

K因數(shù)法（一點(diǎn)線形法）兩點(diǎn)線性多點(diǎn)線性（非線性法）45校準(zhǔn)方法451、K因數(shù)法（一點(diǎn)法）由空白液的標(biāo)準(zhǔn)（C1）和通過公式計(jì)算得出的K因數(shù)制成的曲線K因數(shù)法測定C1（試劑空白）的吸光度時(shí)，先輸入K值再計(jì)算濃度值：

CX=（AX—B）+C1分析項(xiàng)目：適用各種酶活性的測定461、K因數(shù)法（一點(diǎn)法）由空白液的標(biāo)準(zhǔn)（C1）和通過公式計(jì)算得2、兩點(diǎn)線性法由空白液和含有一定濃度標(biāo)準(zhǔn)液的標(biāo)準(zhǔn)（2）的兩點(diǎn)吸光度繪制的曲線此法適用所有的分析方法包括1點(diǎn)法、2點(diǎn)速率法和速率法分析項(xiàng)目：TP、ALB、TC、TG、Urea、Crea等472、兩點(diǎn)線性法由空白液和含有一定濃度標(biāo)準(zhǔn)液的標(biāo)準(zhǔn)（2）473、非線性法可以使用3~6種濃度標(biāo)準(zhǔn)物，在選定波長測定出各自的吸光度，利用濃度和吸光度之間的關(guān)系繪制成非線性標(biāo)準(zhǔn)曲線測定（C1—Cn標(biāo)準(zhǔn)液）的吸光度B—An。儀器采用Logit-Log進(jìn)行擬合式的計(jì)算出曲線各常數(shù)分析項(xiàng)目：常為免疫項(xiàng)目，CRP、ASO、RF等483、非線性法可以使用3~6種濃度標(biāo)準(zhǔn)物，在選定波長測定出各自全自動(dòng)生化分析儀常見交叉污染的原因？49全自動(dòng)生化分析儀常見交叉污染的原因？49比色分析：交叉污染測試項(xiàng)目A試劑針，比色杯等試劑和樣品成分殘留干擾下一個(gè)測試項(xiàng)目B50比色分析：交叉污染測試項(xiàng)目A50交叉污染的原因①多項(xiàng)目，多樣本處理

②處理能力的提高（高速化）

共有化①樣本針②試劑針③比色杯④攪拌棒交叉污染51交叉污染的原因51交叉污染的原因①不正確的清洗方法或清洗能力下降（日常維護(hù)欠缺，儀器老化）

②生化儀內(nèi)污垢的積聚③測試順序安排不當(dāng)52交叉污染的原因①不正確的清洗方法或清洗能力下降52試劑攜帶交叉污染

Amy試劑鈣

ALP試劑鎂、鈣鎂試劑鐵含磷酸鹽的緩沖液磷膽固醇試劑膽汁酸

過氧化物酶反應(yīng)系統(tǒng)的項(xiàng)目不能排列在一起，有交叉污染53試劑攜帶交叉污染Amy試劑消除交叉污染的方法

測試順序的合理設(shè)置

試劑組成測試原理原因

合理設(shè)置測試順序避免交叉污染設(shè)置11.ALP設(shè)置21.LDH2.ALT2.ALP3.LDH污染?。?.ALT

ALTKIT中含有LDH54消除交叉污染的方法測試