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文檔簡介
微生物什么是微生物呢?微生物:形體極小,結(jié)構(gòu)簡單,凡是肉眼看不見的生物。只有在光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡下才能看清楚的生物。微生物的類群3真菌界(單或多C):例如酵母菌、霉菌、真菌4單細胞動植物例如草履蟲、變形蟲,單C藻非細胞結(jié)構(gòu)1病毒細胞結(jié)構(gòu)原核細胞:2原核生物界(單C):細菌、藍藻、放線菌真核細胞:微生物的新陳代謝類型同化作用:自養(yǎng)型,異養(yǎng)型異化作用:需氧型,厭氧型,兼性厭氧型。自養(yǎng)需氧型:光合細菌(藍藻),硝化細菌等異養(yǎng)需氧型:醋桿菌,真菌,固氮菌等異養(yǎng)厭氧型:乳酸菌,假絲酵母菌等異養(yǎng)兼性厭氧型:酵母菌,大腸桿菌。微生物的作用絕大多數(shù)的微生物對人類無害,90%以上對人類有利。用途:食品發(fā)酵:酒,醋,醬,酸奶,泡菜,腐乳……制藥:生產(chǎn)抗生素:放線菌和霉菌,
生產(chǎn)酶制劑:治理環(huán)境污染:處理廢水,降解塑料……一、細菌結(jié)構(gòu)
細胞壁,細胞膜,細胞溶膠,擬核DNA,核糖體,質(zhì)粒,鞭毛等革蘭氏陰性,兼性厭氧,一般對人體無害,有些菌株有害,一旦進入泌尿系統(tǒng),都有危害。用途:基因工程受體菌。菌落:單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時,就會形成一個肉眼可見的,具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體,叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。
大腸桿菌菌落不同細菌菌落不同實驗一
大腸桿菌的培養(yǎng)
與分離實驗內(nèi)容:
1細菌培養(yǎng):將大腸桿菌接種到LB液體培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)。2細菌分離:將大腸桿菌從液體培養(yǎng)基中接種到LB固體培養(yǎng)基,形成單菌落。目的為了分離純化。實驗內(nèi)容:
1細菌培養(yǎng):用LB液體培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)大腸桿菌。2細菌分離:用LB固體培養(yǎng)基劃線分離,形成菌落。實驗過程Ⅰ準(zhǔn)備階段:1培養(yǎng)基配制(兩種),培養(yǎng)皿,培養(yǎng)用到的各種接種工具清洗,滅菌,2操作環(huán)境滅菌,3操作人員消毒Ⅱ操作階段:培養(yǎng)基成分(culturemedia)
按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。營養(yǎng)成分:碳源、氮源、生長因子、水和無機鹽。培養(yǎng)基成分細菌:真菌:“喜葷”,蛋白胨,牛肉膏,酵母提液,Nacl等“喜素”,無機物或蔗糖溶液配置的豆芽汁LB培養(yǎng)基的配方培養(yǎng)基成分各成分的量蛋白胨0.5g酵母提取物0.25gNaCl0.5gH2O加至50ml1配制培養(yǎng)基實驗準(zhǔn)備工作
碳源:酵母提取物和蛋白胨
氮源:蛋白胨Nacl的作用:維持滲透壓
培養(yǎng)基配置流程:
計算-稱量-溶解-定容-調(diào)ph--滅菌蛋白胨酵母提取物培養(yǎng)基的種類
按照物理性質(zhì)劃分培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基(加瓊脂)液體培養(yǎng)基
液體培養(yǎng)基能形成菌落,用途:微生物的分離、鑒定、保存、計數(shù)等主要用于擴大培養(yǎng)固體培養(yǎng)基瓊脂?紅藻中提取的多糖,在98℃以上熔化,44℃以下凝固,常溫下凝結(jié)成有彈性的凝膠。凝固劑
瓊脂濃度的多少決定了培養(yǎng)基的硬度。培養(yǎng)基配置步驟計算稱量:配固體培養(yǎng)基時還需加瓊脂溶化:加熱溶化,定容調(diào)節(jié)PH滅菌
細菌6.5-7.5中性偏堿真菌5.0-6.0中性偏酸培養(yǎng)工具的滅菌玻璃制品:試管、培養(yǎng)皿、三角瓶、移液管、玻璃刮刀塑料制品:取樣器槍頭金屬制品:接種環(huán),鑷子、棉花:用來制作棉花塞。棉花塞:透氣,又過濾細菌,不能用脫脂棉。高壓蒸汽滅菌法:儀器:高壓蒸汽滅菌鍋121℃1kg/cm215min計時:達到設(shè)定的壓力或溫度都開始計時使用步驟:先加熱排氣再達壓力后滅菌15min后關(guān)閉電源,冷卻,待鍋內(nèi)外壓力相同時才能打開。高壓蒸汽滅菌法
高壓蒸汽滅菌法為濕熱滅菌法,其優(yōu)點有三:
1、濕熱滅菌時菌體蛋白容易變性;
2、濕熱穿透力強;
3、水蒸汽變成水時可放出大量熱增強殺菌效果,因此,它是效果最好的滅菌方法。滅菌的方法1、高壓蒸汽滅菌(最常用)培養(yǎng)基,培養(yǎng)皿,無菌水,各種玻璃制品2、灼燒滅菌接種環(huán),玻璃刮刀(使用過程中),試管口等3、干熱滅菌(160-170℃下加熱1-2h。)金屬制品玻璃砂漏斗4.過濾滅菌法(不能高溫加熱的物質(zhì))儀器:G6玻璃紗漏斗物質(zhì):葡萄糖,尿素,抗生素等微生物培養(yǎng):無菌操作技術(shù)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵,無菌技術(shù)圍繞著如何避免雜菌的污染展開。超凈臺實驗準(zhǔn)備工作
2滅菌和消毒無菌操作目的:為了避免被雜菌污染。1對實驗操作空間:超凈臺:紫外線滅菌,過濾風(fēng)桌面:酒精擦拭,酒精燈外焰附近操作2.操作者衣服和手進行:清潔和消毒,70%酒精3.避免已滅菌處理的材料用具和周圍物品的接觸消毒的方法1、100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法
70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、用70%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒4、氯氣、高錳酸鉀消毒……
(1)消毒:
利用化學(xué)或物理方法,殺死大部份致病微生物的過程。消毒與滅菌的區(qū)別
(2)滅菌:
滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。
以化學(xué)劑或物理方法消滅所有微生物,包括所有細菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒,而達到完全無菌的過程。實驗1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離超凈臺上紫外燈和過濾風(fēng)實驗過程:準(zhǔn)備階段:1培養(yǎng)基的配制,2滅菌和消毒操作階段:1倒平板:分裝固體培養(yǎng)基倒平板:將已滅菌的固體培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿的過程。
分裝培養(yǎng)基:1倒平板:
將滅菌后的固體培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿培養(yǎng)基冷卻到60度時倒入2培養(yǎng)基的分裝(試管,三角瓶,培養(yǎng)皿)倒入三角瓶和試管(漏斗法)1.培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到60℃左右時,才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度?問題討論
答:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時,就可以進行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰?
答:通過灼燒滅菌,防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。操作一:LB液體培養(yǎng):
擴大大腸桿菌數(shù)量條件:37℃,搖床上,振蕩培養(yǎng)2:接種①劃線分離法
平板劃線分離法
原理:接種環(huán)沾菌液后再固體培養(yǎng)基劃線,劃線過程中菌液逐漸減少,細菌也減少,最后,細菌間距離增大,培養(yǎng)后形成單菌落。問題討論
1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)?在劃線操作結(jié)束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎?為什么?
答:第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物;每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后,接種環(huán)上殘留的菌種。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán),能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種,避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種環(huán)之后,為什么要等其冷卻后再進行劃線?答:以免接種環(huán)溫度太高,殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時,為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線?
答:劃線后,線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少,每次從上一次劃線的末端開始,能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少,最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。稀釋涂布平板法1稀釋2涂布固體培養(yǎng)基:涂布分離形成的菌落3培養(yǎng):37℃恒溫培養(yǎng)
儀器:恒溫培養(yǎng)箱3.進行恒溫培養(yǎng)時,為什么要將平板倒置?
答:防止冷凝水低落影響菌落形成而達不到分離的目的。因此,恒溫培養(yǎng)時,培養(yǎng)皿必須倒置。分離純化大腸桿菌的方法兩種:稀釋涂布平板法和平板劃線法實驗1
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