cyp3a4選擇性抑制劑對奧美啦唑體外對腸道首過效應的影響

cyp3a4選擇性抑制劑對奧美啦唑體外對腸道首過效應的影響

傳統(tǒng)觀點認為肝臟是第一個副作用的器官，但越來越多的研究表明，口腔藥物在吸收過程中可以代謝，產(chǎn)生腸道副作用（對于某些藥物，腸道是主要的代謝器官，但關(guān)于初始副作用的研究中存在的主要問題是肝臟和腸道不能量化藥物的代謝作用。本研究采用經(jīng)十二指腸(id)、門脈(ipv)以及外周靜脈(iv)置管方法,建立了腸道-血管通路(intestinalandvascularaccess-port,IVAP)模型并以奧美啦唑(omeprazole,OME)作為工具藥,探討了id、ipv及iv途徑下藥物體內(nèi)代謝動力學特點,定量評價肝臟和腸道首過效應對藥物生物利用度作用程度。另一方面,CYP酶系統(tǒng)被認為是參與藥物腸道代謝的主要酶系,其中CYP3A4含量及活性最高,是人小腸最主要的I相代謝酶,占小腸CYP總量70%以上,且臨床所用藥物60%~70%為CYP3A4底物。本研究采用CYP3A4選擇性抑制劑酮康唑(ketoconazole,Ket)預先抑制腸道CYP3A4活性,探討了酮康唑?qū)ME靜脈及口服藥動學過程的影響,以進一步研究腸道CYP3A4在藥物腸道首過效應中的作用。1模型建立及數(shù)據(jù)采集1.1藥品與試劑奧美拉唑(試驗藥物)、奧美拉唑?qū)φ掌酚蓳P州奧賽康藥業(yè)公司提供;酮康唑為西安楊森公司產(chǎn)品。1.2實驗動物♂新西蘭兔[許可證號:SCXK(皖)2007-001],平均體重2.80±0.39kg,由安徽長臨河公司提供。1.3實驗設計與樣本采集1.3.1IVAP動物模型的建立動物試驗前禁食12h,自由飲水。靜脈麻醉后,暴露胃右靜脈并置管,以避免門脈內(nèi)直接置管對其血流的影響。繼而進行十二指腸置管并縫合固定。術(shù)畢,兩導管末端均接肝素帽,皮下移行至背部。id和ipv導管分別給予5%高滲糖和125IU·ml-1肝素生理鹽水沖洗。耳動脈置管用于取動脈血樣。動物術(shù)后給予2wk恢復期,該IVAP動物模型經(jīng)歷2wk清洗期后可進行下輪實驗。1.3.2IVAP模型定量評價OME腸道首過效應6只IVAP模型兔,分別經(jīng)id(3.0mg·kg-1)、ipv(1.5mg·kg-1)及iv(1.5mg·kg-1)給予OME,于給藥前及給藥后2h內(nèi)取耳動脈2ml。離心(4000r·min-1×10min)后取上清液-80℃凍存,HPLC測定血藥濃度。以上各給藥途徑間均經(jīng)歷2wk清洗期。1.3.3腸道CYP3A4在OME腸道首過效應中作用研究采取自身交叉實驗方法,6只經(jīng)id、iv置管的新西蘭兔,經(jīng)id給予酮康唑60mg·kg-1,30min后經(jīng)再id給予OME3.0mg·kg-1;經(jīng)歷2wk清洗期后,經(jīng)id給予酮康唑60mg·kg-1,30min后再經(jīng)iv給予OME1.5mg·kg-1。其取血方法同“1.3.2”項。1.4數(shù)據(jù)處理血漿藥物濃度-時間曲線(C-t)下面積(AUC)、半衰期(T12)(Τ12)、清除率(CL)等參數(shù)采用DAS2.0藥動學軟件分析,達峰時間(Tmax)、峰濃度(Cmax)等采用實測值。絕對生物利用度(bioavailability,BA)、肝臟攝取率(hepaticextractionratio,Eh)、腸道攝取率(intestinalextractionratio,Ei)等由以下公式計算:BA=(AUCid/Doseid)/(AUCiv/Doseiv);Eh=1-AUCipv/AUCiv;Ei=1-AUCid/AUCipv.所有數(shù)據(jù)以xˉ±sxˉ±s表示,采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,采用t檢驗及單因素方差分析考察組間的差別。2結(jié)果2.1血藥濃度檢測id、ipv及iv給予OME后,其藥動學參數(shù)見Tab1。id給予3mg·kg-1OME,血藥濃度在15min以內(nèi)達到峰濃度,提示OME在兔腸道內(nèi)能快速吸收,但其AUC值顯著低于ipv1.5mg·kg-1和iv1.5mg·kg-1的AUC值(P<0.05)。ipv給予1.5mg·kg-1OME后,其AUC值顯著低于經(jīng)iv給予同劑量OME的AUC值。2.2根據(jù)計算公式，omeba、eh和ei分別為22.61%3.51%和35.71%71%4.38%和64.81%±3.85%。2.3id途徑omeiii藥動學參數(shù)酮康唑id預處理后,OMEC藥動學參數(shù)見Tab1。酮康唑id預處理后,能明顯增加id途徑OME血藥濃度,AUC和Cmax分別增加約4.8倍和5.4倍,CL/F明顯下降(P<0.05),由對照組15.32±1.12L·h-1·kg-1下降為3.25±0.29L·h-1·kg-1,而對OMEiv藥動學參數(shù)影響差異無顯著性。3iiiap兔模型有報道認為,肝移植患者無肝期,采取經(jīng)十二指腸給藥、門脈取血樣本的方法可以在人體內(nèi)直接預測藥物腸道首過效應,但該項技術(shù)難以大量推廣。門靜脈置管則可以測定吸收到門靜脈的藥物濃度,并可以定量分析肝臟和腸道攝取率,是一種量化腸道首過效應的重要方法。已有大鼠、狗及猴模型研究藥物腸道首過效應的文獻報道,但大鼠模型存活時間短以及狗和猴模型費用高等原因,使得這些模型的廣泛應用受到限制。兔腸道生理學特點、通透性及腸道代謝酶與人類相似,被廣泛用于臨床前藥物腸道通透性研究,且其費用低廉。為此,本研究建立了IVAP兔模型,該模型能夠進行自身交叉對照,避免藥物代謝酶多態(tài)性影響,且能夠反復使用、降低實驗成本。本研究中,我們應用IVAP模型對OME腸道首過效應進行定量分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),id給予OME,其血藥濃度在15min以內(nèi)達到峰濃度,表明OME在兔體內(nèi)能快速吸收,但其生物利用度只有22.61%,提示OME在兔體內(nèi)存在首過效應。id途徑AUC值明顯低于ipv相應劑量AUC值,表明OME經(jīng)腸道進入門脈前藥物量明顯減少,即發(fā)生腸道首過效應。并且根據(jù)肝臟和腸道萃取率分析,OME在兔體內(nèi)經(jīng)歷了肝臟和腸道代謝作用。本研究中,當腸道給予酮康唑預先抑制CYP3A4活性后,能增加id途徑下OME血藥濃度,藥動學參數(shù)AUC升高及清除率降低,但藥物濃度時間曲線的斜率未發(fā)現(xiàn)明顯改變,而酮康唑預處理過程對OME靜脈藥動學參數(shù)未產(chǎn)生明顯影響,提示肝臟CYP3A4活性未受