連錢(qián)草提取物抗豚鼠離體回腸平滑肌的實(shí)驗(yàn)研究

連錢(qián)草提取物抗豚鼠離體回腸平滑肌的實(shí)驗(yàn)研究

連草是嘴唇科植物的活血丹glechoma（nakai）kubar。干燥的完整草具有潤(rùn)濕、解毒、散瘀、止血的功能。主治尿路感染、疳積、黃疳、感冒、肺癰、咳嗽、小兒驚風(fēng)、跌打扭傷、骨折、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。我國(guó)大部分省(區(qū))有栽培。在湖北省民間常用于腹瀉的治療,具有較好的療效。為了探討連錢(qián)草治療腹瀉的作用機(jī)理,本研究觀察了連錢(qián)草提取物對(duì)豚鼠離體回腸平滑肌的影響,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。1材料表面1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康豚鼠,體重250~350g,♀♂兼用,由湖北省衛(wèi)生防疫站動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。1.2連錢(qián)草醇提物的制備鹽酸異丙嗪(江蘇省金壇市制藥廠生產(chǎn),批號(hào)9902042),硫酸阿托品注射液(徐州萊恩藥業(yè)有限公司生產(chǎn),批號(hào)20020625),鹽酸腎上腺素注射液(武漢諾佳藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn),批號(hào)20011001)。連錢(qián)草為自行采集,并經(jīng)湖北中醫(yī)學(xué)院中藥鑒定教研室陳家春教授鑒定。(1)連錢(qián)草水提物的制備:取適量連錢(qián)草干品,加蒸餾水浸泡30min后加熱煮沸,開(kāi)始用強(qiáng)火,沸騰后改用文火,30min。攪拌,趁熱過(guò)濾,藥渣再加蒸餾水同法煮沸后30min過(guò)濾,合并濾液,水浴濃縮至100%(含生藥1g/ml)備用。(2)連錢(qián)草醇提物的制備:取連錢(qián)草干品適量,加95%的乙醇于圓底燒瓶中,浸泡6h后水浴加熱回流1h,趁熱過(guò)濾,藥渣再用75%乙醇加熱回流1h,過(guò)濾,合并濾液。減壓回收乙醇濃縮至100%(含生藥100g/100ml)備用。1.3j501型超級(jí)升溫水浴鍋LMS-2B二道生理記錄儀(成都儀器廠):YJ501型超級(jí)恒溫水浴鍋(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠);Bs200s電子天平(Sartorins公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。2方法和結(jié)果2.1剖腹分離、純化健康豚鼠,(體重300±50g)雌雄不限。用木錘敲擊動(dòng)物頭部致昏,立即剖腹取出回腸,小心分離去粘膜組織,隨后用臺(tái)氏液將腸內(nèi)容物洗凈,并將腸管分剪成1~2cm長(zhǎng)的小段,置于20℃臺(tái)氏液中備用。2.2有關(guān)海豚回族肌肉的函數(shù)2.2.1連錢(qián)草水提物對(duì)lms-2m腸道活動(dòng)力的影響將上述備用的回腸標(biāo)本,置于盛有10ml的Tyrode′s液的麥?zhǔn)显〔蹆?nèi),通入O2,恒溫(38±0.5)℃,張力負(fù)荷1g,平衡30min,用LMS-2B二道生理記錄儀描記運(yùn)動(dòng)曲線(xiàn),穩(wěn)定后加入不同濃度的連錢(qián)草水提物,觀察給藥前后回腸運(yùn)動(dòng)的收縮幅度、頻率、張力的變化,比較給藥前后的腸道活動(dòng)力(腸道活動(dòng)力=平均強(qiáng)度×頻率,單位:g/min),結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)(見(jiàn)表1)。由表1可見(jiàn),不同濃度的連錢(qián)草水提物(0.1mg/ml,0.2mg/ml,0.3mg/ml)對(duì)豚鼠離體回腸平滑肌具有顯著的興奮作用。2.2.2連錢(qián)草醇提物對(duì)小鼠腸道活動(dòng)力的影響將上述備用的回腸標(biāo)本,置于盛有10ml的Tyrode′s液的麥?zhǔn)显〔蹆?nèi),通入O2,恒溫(38±0.5)℃,張力負(fù)荷1g,平衡30min,用LMS-2B二道生理記錄儀描記運(yùn)動(dòng)曲線(xiàn),穩(wěn)定后加入不同濃度的連錢(qián)草醇提物,觀察給藥前后回腸運(yùn)動(dòng)的收縮幅度、頻率、張力的變化,比較給藥前后的腸道活動(dòng)力,結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn),不同濃度的連錢(qián)草醇提物(0.05mg/ml,0.1mg/ml,0.2mg/ml,0.3mg/ml)均能顯著抑制豚鼠離體回腸平滑肌的活動(dòng)。2.3有關(guān)各方在動(dòng)物腸道平滑肌中的受體作用2.3.1腸道活動(dòng)力的測(cè)定—連錢(qián)草水提物對(duì)豚鼠回腸平滑肌細(xì)胞受體的作用:將上述備用的回腸標(biāo)本,置于盛有10ml的Tyrode′s液的麥?zhǔn)显〔蹆?nèi),通入O2,恒溫(38±0.5)℃,張力負(fù)荷1g,平衡30min,用LMS-2B二道生理記錄儀描記運(yùn)動(dòng)曲線(xiàn),穩(wěn)定后加入阿托品、鹽酸異丙嗪等各類(lèi)拮抗劑,待其穩(wěn)定后加入連錢(qián)草水提物,觀察兩次給藥前后回腸運(yùn)動(dòng)的變化,比較給藥前后的腸道活動(dòng)力,結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3。由表3可見(jiàn),連錢(qián)草水提物能顯著拮抗阿托品和腎上腺素對(duì)離體豚鼠回腸平滑肌細(xì)胞受體的抑制作用(**P<0.01),而不能拮抗鹽酸異丙嗪的抑制作用。2.3.2腸道活動(dòng)力的測(cè)定將上述備用的回腸標(biāo)本,置于盛有10ml的Tyrode′s液的麥?zhǔn)显〔蹆?nèi),通入O2,恒溫(38±0.5)℃,張力負(fù)荷1g,平衡30min,用LMS-2B二道生理記錄儀描記運(yùn)動(dòng)曲線(xiàn),穩(wěn)定后加入乙酰膽堿、組胺和BaCl2等各類(lèi)激動(dòng)劑,待其穩(wěn)定后加入連錢(qián)草醇提物,觀察兩次給藥前后回腸運(yùn)動(dòng)的變化,比較給藥前后的腸道活動(dòng)力,結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果可見(jiàn),連錢(qián)草醇提物能夠顯著拮抗乙酰膽堿、組胺BaCl2對(duì)離體豚鼠回腸平滑肌細(xì)胞受體的激動(dòng)作用(P<0.001)。3連錢(qián)草醇提物現(xiàn)已證明,胃腸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)由交感神經(jīng)、副交感神經(jīng)系統(tǒng)控制。目前研究認(rèn)為胃腸道上主要存在膽堿能M受體、腎上腺素α和β受體、組胺受體、5-HT受體及多種胃腸激素受體。本研究發(fā)現(xiàn)連錢(qián)草水提物能明顯拮抗阿托品與腎上腺素對(duì)豚鼠離體回腸平滑肌的抑制作用,不能拮抗鹽酸異丙嗪的抑制作用,而連錢(qián)草醇提物能明顯的拮抗組胺、乙酰膽堿和BaC