電泳技術的臨床應用完整版課件

現代電泳技術的臨床應用Sebia廈門市第二醫(yī)院王友祥現代電泳技術的臨床應用Sebia廈門市第二醫(yī)院王友祥1使用范圍和檢測原理電泳技術就是利用在電場的作用下,由于待分離樣品中各種分子帶電性質以及分子本身大小,形狀等性質的差異,使帶電分子產生不同的遷移速度,從而對樣品進行分離,鑒定或提純的技術.在生化檢測中,主要用于分離各類蛋白分子.使用范圍和檢測原理電泳技術就是利用在電場的作用下,由于待分2發(fā)展歷程1809年俄國科學家列伊斯首先發(fā)現電泳現象1937年瑞典科學家Tiselius建立了界面電泳技術,并首次證明了血清是由白蛋白及α,β,γ球蛋白組成的因此獲得1948年諾貝爾化學獎.1950年后,區(qū)帶電泳從發(fā)展到成熟.1980年以來,毛細管電泳逐漸受到重視發(fā)展歷程1809年俄國科學家列伊斯首先發(fā)現電泳現象3常用的電泳技術濾紙電泳醋酸纖維素薄膜電泳凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳:瓊脂糖凝膠適用于蛋白質和核酸的電泳支持介質,成本低,結果易保存.聚丙烯酰胺凝膠電泳:最常用的定性分析蛋白質的電泳方法,特別是用于蛋白質純度檢測和測定蛋白質分子量,一般用于科研.毛細管電泳:經典電泳技術和現代微柱分離相結合的產物常用的電泳技術濾紙電泳4電泳技術的醫(yī)學應用蛋白質電泳分析是實驗室必備的檢測手段,可全面精確,描繪出患者蛋白質的全貌.對疾病的早期診斷,療效觀察及預后判斷具有非常重要的臨床價值.電泳技術的醫(yī)學應用蛋白質電泳分析是實驗室必備的檢測手段,可5蛋白的電泳檢測根據使用的染料或者是底物的不同，我們可以檢測到不同類型的蛋白:

血清蛋白 脂蛋白(運送脂類)

各種酶類 血紅蛋白蛋白的電泳檢測根據使用的染料或者是底物的不同，我們可以檢測到6電泳技術在臨檢中的應用急,慢性炎癥造血系統(tǒng)疾病:多發(fā)性骨髓瘤,巨免疫球蛋白血癥腎臟疾病肝臟疾病中樞神經系統(tǒng)疾病:多發(fā)性硬化癥遺傳性疾病:地中海貧血代謝性疾病:糖尿病心血管疾病:心梗,動脈粥樣硬化惡性腫瘤電泳技術在臨檢中的應用急,慢性炎癥遺傳性疾病:地中海貧血7正確解釋電泳結果

為臨床對疾病的判斷提供可靠參考正確解釋電泳結果

為臨床對疾病的判斷提供可靠參考8電泳技術的臨床應用完整版課件9gba2白蛋白a1:a1酸性糖蛋白,

a1抗胰蛋白酶:結合珠蛋白,

a2

巨球蛋白,

a脂蛋白,

銅藍蛋白:轉鐵蛋白,血液結合素,C3補體,b脂蛋白:免疫球蛋白血清蛋白電泳gba2白蛋白a1:a1酸性糖蛋白,a1抗胰蛋白酶:結10蛋白染色血清蛋白電泳后會呈現出5或者6條帶.染色后,每個條帶呈現出的不同程度的染色對應著各自的蛋白濃度.如何檢測染色程度:

需要使用光密度儀.蛋白染色血清蛋白電泳后會呈現出5或者6條帶.11正常的電泳圖譜正常的電泳圖譜12

出現單克隆免疫球蛋白的電泳圖譜出現單克隆免疫球蛋白的電泳圖譜13蛋白電泳檢測的不同步驟制備膠片,加樣,啟動電源,開始電泳,染色,脫色,結果檢測蛋白電泳檢測的不同步驟制備膠片,14血清蛋白電泳的目的是什么?檢測異常:

含量的變化:條帶中蛋白含量的增加或減少 性質的變化:異常條帶的出現血清蛋白電泳的目的是什么?檢測異常:15臨床意義將電泳作為常規(guī)檢測之一,基于蛋白含量的變化,有助于我們對以下疾病的篩查:

炎癥 營養(yǎng)不良 肺氣腫

臨床意義將電泳作為常規(guī)檢測之一,基于蛋白含量的變化,有助16臨床意義對異常條帶的篩查,有助于我們檢測下列疾病:

骨髓瘤 巨球蛋白血癥(Waldenstrom) 細菌和病毒感染 在這些情況下,必須要做其他輔助測試,比如說免疫固定,使用不同類型的抗血清對異常蛋白進行檢測.(對于后期治療有很重要的指導意義)

臨床意義對異常條帶的篩查,有助于我們檢測下列疾病:17電泳結果的臨床應用及常見電泳結果分析電泳檢測電泳結果的臨床應用及常見電泳結果分析電泳檢測18什么情況下必須進行電泳檢測?A/G比例變化血液沉降速度發(fā)生異常變化出現惡性疾病征兆在免疫球蛋白定量檢測中發(fā)現某一種免疫球蛋白出現大量異常增加什么情況下必須進行電泳檢測?A/G比例變化19電泳區(qū)帶分析電泳區(qū)帶分析20

雙白蛋白,或者一條寬峰,或者在白蛋白條帶出現附屬條帶可能是由以下原因造成:遺傳性雙白蛋暫時性的雙白蛋白血癥可能是由于藥物刺激導致的急性胰腺炎導致的雙白蛋白血癥:大量的胰酶的出現可以導致白蛋白降解白蛋白區(qū)帶雙白蛋白,或者一條寬峰,或者在白蛋白條帶出現附屬條帶可能是21雙白蛋白血癥

雙白蛋白血癥22雙白蛋白血癥雙白蛋白血癥23電泳技術的臨床應用完整版課件24在下列情況下白蛋白會出現下降:

-

腎病綜合癥,蛋白流失,胃腸病:檢查尿蛋白

-淋巴細胞增生綜合征

-營養(yǎng)不良

-肝臟功能不全

-慢性炎癥

-嚴重燒傷

-血液稀釋在下列情況下白蛋白會出現下降:25在下列情況中白蛋白會出現增加: -脫水癥狀

-血液濃縮

-白蛋白注射在下列情況中白蛋白會出現增加:26Alpha1globulins(α1球蛋白區(qū)帶)將會在下列情況下出現下降:

-蛋白流失

-肝功能不全

-先天性抗胰蛋白酶缺乏癥出現兩個條帶:

-抗胰蛋白酶的不同基因型出現增加:

-炎癥癥狀Alpha1globulins(α1球蛋白區(qū)帶)將會在下27A1AT不同的基因型A1AT不同的基因型28A1AT等電聚焦電泳A1AT等電聚焦電泳29急性炎癥電泳圖譜急性炎癥電泳圖譜30Alpha2globulins(α2球蛋白區(qū)帶)下列情況中出現下降:

-肝功能不全 -血管內溶血Alpha2globulins(α2球蛋白區(qū)帶)31

出現兩個條帶: -溶血標本(結合珠蛋白-血紅蛋白復合體)

-結合珠蛋白不同基因型 -出現單克隆免疫球蛋白(帶有大量負電荷)

*Alpha2條帶在電泳圖譜中,是一個很特殊的條帶.因為這一條帶中含有五種蛋白:HDL,Haptoglobin,Alpha2Macroglobulin,CeruloplasminandGcglobulin.由于結合珠蛋白有不同的基因表現型,增加了這一條帶的復雜程度.結合珠蛋白非?？拷麬lpha1條帶;出現溶血時結合珠蛋白的遷移率會發(fā)生改變.同時,由于HDL的含量或者是存放過久的標本,HDL的遷移速度可能會更快.出現兩個條帶:32溶血的標本溶血的標本33出現在a2區(qū)域的單克隆免疫球蛋白出現在a2區(qū)域的單克隆免疫球蛋白34下列情況下Alpha2區(qū)域會出現增加現象:

-炎癥癥狀 -腎病綜合征 -出現游離輕鏈

下列情況下Alpha2區(qū)域會出現增加現象:35腎病綜合征腎病綜合征36電泳技術的臨床應用完整版課件37電泳技術的臨床應用完整版課件38Betaglobulins(β球蛋白區(qū)帶)在下列情況下會出現下降:

-肝功能不全

-C3長期缺乏或者C3代謝過快

(alsoinagingsample,C3denaturation,splittedinupto 4fractions:1betweena2andb, 1onb1,

1

onb2 and1ong)

Betaglobulins(β球蛋白區(qū)帶)39在下列情況下會出現兩個條帶:

-長期存放的標本或者是高膽固醇的標本,LDL有不同的遷移率;從而導致LDL電泳是偏移Beta位置

在下列情況下會出現兩個條帶:40

Beta球蛋白在下列情況下會出現增加現象:

-膽管阻塞

-腎病綜合征

-肝硬化

-缺鐵性貧血

-血球蛋白異常

-高脂蛋白血癥

-大量溶血

Beta球蛋白在下列情況下會出現增加現象:41β

脂蛋白β脂蛋白42酒精性肝硬化中的β-γ

橋酒精性肝硬化中的β-γ橋43電泳技術的臨床應用完整版課件44電泳技術的臨床應用完整版課件45電泳技術的臨床應用完整版課件46出現在b

區(qū)域的單克隆免疫球蛋白出現在b區(qū)域的單克隆免疫球蛋白47游離輕鏈病游離輕鏈病48Gammaglobulins(免疫球蛋白區(qū)帶)在下列情況中會出現下降現象:

-部分的或全部的免疫缺陷

-免疫抑制治療

-游離輕鏈病或非分泌型骨髓瘤Gammaglobulins(免疫球蛋白區(qū)帶)49電泳技術的臨床應用完整版課件50電泳技術的臨床應用完整版課件51低免疫球蛋白血癥低免疫球蛋白血癥52多克隆免疫球蛋白的增加:

-炎癥

-肝硬化

-亞急性和慢性感染檢測到其他條帶

-單克隆免疫球蛋白

-寡克隆免疫球蛋白

多克隆免疫球蛋白的增加: 53

高免疫球蛋白血癥 高免疫球蛋白血癥54血清蛋白021216－狼瘡病血清蛋白030127－酒精肝B-r橋血清蛋白021216－狼瘡病血清蛋白030127－酒精肝B-55

微量單克隆免疫球蛋白 微量單克隆免疫球蛋白56

大量單克隆免疫球蛋白 大量單克隆免疫球蛋白57

雙克隆免疫球蛋白 雙克隆免疫球蛋白58與下列各類疾病相關的寡克隆免疫球蛋白(多個條帶):-自身免疫病-先天性免疫缺陷癥-病毒感染

(CHepatitis,HIVdisease,CMV(巨細胞病毒),EBV,…)-免疫抑制治療與下列各類疾病相關的寡克隆免疫球蛋白(多個條帶):59Oligoclonalpattern(寡克隆免疫球蛋白)Oligoclonalpattern(寡克隆免疫球蛋白)60血清蛋白電泳是

M蛋白(MonoclonalProtein)多克隆(polyclonalProtein)

寡克隆(OligoclonalProtein)

的首選檢測項目血清蛋白電泳是61什么是M蛋白M蛋白疾病(Monoclonalgammapathies,MG)是由于單一克隆漿細胞無限增殖產生的均一單克隆蛋白(Monoclonal-proteins)所導致的一組疾病M蛋白疾病的“M”含義是Myeloma,Macroglobulinemia,Malignantlymphoma和MonoclonalGammapathies均以“M”開頭.M蛋白在電泳上表現為高而狹窄的尖峰.什么是M蛋白M蛋白疾病(Monoclonalgammapa62電泳技術的臨床應用完整版課件63表1646例M蛋白類型分類型別例數%IgG型骨髓瘤20531.73IgA型骨髓瘤9314.40IgM型骨髓瘤568.67IgD型骨髓瘤121.86重鏈病50.77輕鏈病21433.13半分子病10.157SIgM20.31BMG497.59雙M蛋白病81.24表1646例M蛋白類型分類64多發(fā)性骨髓瘤(MultipleMyeloma,MM)MM是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤,占整個惡性腫瘤的1%常見于中、老年人(50-70歲居多,40歲以下少見).以往對此病認識不足，漏診、誤診可達到70%以上.隨著壽命的延長對此病認識的提高病例數顯著增加.多發(fā)性骨髓瘤(MultipleMyeloma,MM)MM是65MM臨床表現特點骨痛,骨骼腫塊與病理性骨折,骨質疏松和溶骨現象貧血免疫功能低下,反復感染腎臟損害高鈣,高粘(血漿相對黏度6以上)高尿酸血癥表現MM的臨床表現多樣化,常常因此就診于骨科、腎臟內科等,延誤診治MM臨床表現特點骨痛,骨骼腫塊與病理性骨折,骨質疏松和溶骨現66多發(fā)性骨髓瘤的免疫學特征血中出現M蛋白,正常Ig水平明顯減低尿中出現M蛋白和輕鏈蛋白(BJP)骨髓中漿細胞明顯增加無免疫活性Ig導致免疫功能低下多發(fā)性骨髓瘤的免疫學特征血中出現M蛋白,正常Ig水平明顯減低67多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報告(骨盆)多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報告(骨盆)68多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報告多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報告69多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報告(顱骨)多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報告(顱骨)70臨床實例臨床實例71電泳技術的臨床應用完整版課件72電泳技術的臨床應用完整版課件73電泳技術的臨床應用完整版課件74意義未明的單克隆免疫球蛋白疾病:BenignMC在法國,在對獻血者進行檢測時,會檢測到0,15%比例的單克隆免疫球蛋白攜帶者.

在老齡人群中檢測到的攜帶者比例更高(80歲以上人群).在對60到99歲人群的檢測顯示,出現Ig的比例從2,6%上升至19,2%.(平均值=5%)MGUS意義未明的單克隆免疫球蛋白疾病:BenignMCMGUS75MGUS攜帶者特征:

-未出現臨床和影像學特征 -未出現不良反應,未檢測到血鈣升高,也未出現腎功能衰竭

-未見骨髓瘤的臨床特征 -單克隆免疫球蛋白<20g/l-其他免疫球蛋白都是正常的,同時在患者尿液中未檢測到本周氏蛋白 -單克隆免疫球蛋白的濃度隨著時間的推移未發(fā)生增加現象 -其他的免疫球蛋白的濃度也未隨時間推移而出現下降

在20%的情況中,MGUS將會轉化成惡性疾病(6-10years)MGUS攜帶者特征:在20%的情況中,MGUS76Kylereport顯示,通過對1384名含有MGUS的患者的20–35(average:22years)年的跟蹤監(jiān)測發(fā)現,24%的患者最終演變成惡性的淋巴細胞增生癥(multiplemyeloma,macroglobulinemia,amyloidosis,…).從檢測到單克隆免疫球蛋白,直到作出多發(fā)性骨髓瘤的診斷報告,這段時間是不定的,從2-29年(平均是10年左右).Kylereport顯示,通過對1384名含有MGUS的患77大量報告顯示,在下列情況中,發(fā)展成為惡性淋巴細胞增生疾病的可能性很小: -單克隆免疫球蛋白: IgG<15g/L IgA<10g/L IgM<5g/L -尿蛋白中未出現本周氏蛋白

-其他類型的免疫球蛋白未出現下降電泳技術的臨床應用完整版課件78寡克隆免疫球蛋白

由于藥物原因導致的免疫缺陷: -在器官或者骨移植之后 -自身免疫病:

(類風濕關節(jié)炎,干燥綜合征(66%),系統(tǒng)性紅斑狼瘡….)

由于細菌或病毒感染導致的免疫缺陷:

-病毒:HIV(63%),EBV,CMV,viralhepatitis,… -細菌,寄生蟲感染:

(腦膜炎,腦炎,…)寡克隆免疫球蛋白79在一些腫瘤中:(慢性淋巴細胞性白血病CLL:29%)

在5%正常群體中(MGUS)

在多發(fā)性硬化患者中:(CSF90%)在一些腫瘤中:(慢性淋巴細胞性白血病CLL:29%)80檢測結果闡述電泳的結果是以%的形式給出的,但是對于臨床診斷,結果必須要以濃度的形式給出g/L蛋白濃度出現異常時,必須要進行其它的補充檢測檢測結果闡述電泳的結果是以%的形式給出的,但是對于臨床診斷81患者的隨訪

首次被發(fā)現的患者:

如果檢測到的異常M蛋白峰值不多,同時其他免疫球蛋白的含量未發(fā)生變化,也沒有臨床癥狀,懷疑可能是MGUS,

第一年每4至6個月對患者經性隨訪,從第二年起,每年進行一次隨訪.患者的隨訪首次被發(fā)現的患者:82

已確診的患者:

如果電泳結果和先前檢測相同,利用異常峰值進行量化以便于檢測異常M蛋白的濃度是否發(fā)生變化.

這種情況下的隨訪檢測,一定要選擇相同的技術方法.

如果隨訪結果顯示出現異常區(qū)帶,一定要進行免疫固定電泳確認這些異常蛋白的成分.已確診的患者:83電泳技術的臨床應用完整版課件84IgGl單克隆免疫球蛋白(近正極端)IgGl單克隆免疫球蛋白(近正極端)85IgG

k

單克隆免疫球蛋白,伴隨有k

型游離輕鏈本周氏蛋白檢測BENCEJONES蛋白檢測結果IgGk單克隆免疫球蛋白,伴隨有k型游離輕鏈本周氏86異常血清蛋白質電泳圖譜的分型及其特征血清蛋白質的圖譜類型

總蛋白Albα1α2βγ1.低蛋白血癥↓↓↓↓N↑N↓N↑2.腎病型↓↓↓↓↑↑↑不定3.肝硬化型↓N↑↓↓N↓N↓β-γ↑橋4.急性炎癥或急性時相反應癥N↓N↑↑N5.慢性炎癥型

↓↑↑↑6.彌漫性肝損害型↓N↓↓↑↓↑7.彌漫寬γ球蛋白血癥型↑↓N↑↑8.M蛋白血癥型

在α-γ區(qū)帶中出現M蛋白峰-M區(qū)帶峰9.高α2（β）球蛋白血癥↓↑↑↑10.妊娠型（高α型）↓N↓↑↑N11.蛋白質缺陷型個別區(qū)帶出現特征性缺乏異常血清蛋白質電泳圖譜的分型及其特征血清蛋白質的圖譜類型總87免疫固定電泳

結果分析指南

免疫固定電泳

結果分析指南88在血清蛋白電泳時,檢測到異常條帶的出現,或者是某一個條帶的蛋白出現異常增加

電泳結果顯示為低免疫球蛋白血癥,或者免疫球蛋白定量結果顯示可能是游離輕鏈病

尿蛋白檢測結果異常(檢測到單克隆游離輕鏈),查看患者是否做過血清蛋白電泳,如果有必要需要進行血清的免疫固定電泳

什么情況下必須要進行免疫固定電泳檢測?在血清蛋白電泳時,檢測到異常條帶的出現,或者是某一個條帶的89正常血清標本正常血清標本90電泳技術的臨床應用完整版課件91電泳技術的臨床應用完整版課件92IgGl單克隆免疫球蛋白(近負極端)IgGl單克隆免疫球蛋白(近負極端)93IgGl單克隆免疫球蛋白(近正極端)IgGl單克隆免疫球蛋白(近正極端)94IgG

k

單克隆免疫球蛋白,伴隨有k

型游離輕鏈本周氏蛋白檢測BENCEJONES蛋白檢測結果IgGk單克隆免疫球蛋白,伴隨有k型游離輕鏈本周氏95出現在a2區(qū)域的IgAl

出現在a2區(qū)域的IgAl96出現兩個異常蛋白帶:利用Beta巰基乙醇處理后,結果為IgA

l單克隆免疫球蛋白BME/Fluidiltreatment出現兩個異常蛋白帶:BME/Fluidil97BME/Fluidiltreatment檢測結果顯示為3個IgAl:利用Beta巰基乙醇處理后,結果為IgAl單克隆免疫球蛋白BME/Fluidil檢測結果顯示為3個IgAl:98IgA

k單克隆免疫球蛋白伴隨有k

型游離輕鏈characterizedonHYDRAGELBENCEJONESBJassayIgAk單克隆免疫球蛋白伴隨有k型游離輕鏈chara99IgM

k單克隆免疫球蛋白IgMk單克隆免疫球蛋白100在每一個電泳條帶上都能見到加樣點痕跡:使用BME處理在BME處理過以后,結果顯示為IgM

k單克隆免疫球蛋白BME/Fluidiltreatment在每一個電泳條帶上都能見到加樣點痕跡:在BME處理過以后,101寡克隆免疫球蛋白IgG(k+l)寡克隆免疫球蛋白IgG(k+l)102雙克隆免疫球蛋白IgG

k和

IgA

k雙克隆免疫球蛋白IgGk和IgAk103免疫固定結果顯示為單獨的

l

成分:需要使用抗

l游離輕鏈和/或抗IgD和IgE的抗血清確認

該結果為

l型游離輕鏈BJassaycharacterizedonHYDRAGELBENCEJONES免疫固定結果顯示為單獨的l成分:該結果為l型游離輕鏈B104免疫固定結果顯示為2個獨立的

l

成分:需要使用抗

l游離輕鏈和/或抗IgD和IgE的抗血清確認該結果為單克隆IgDl,并伴隨有

l游離輕鏈BJassaycharacterizedonHYDRAGELBENCEJONES免疫固定結果顯示為2個獨立的l成分:該結果為單克隆Ig105免疫固定結果確認:IgEl單克隆免疫球蛋白免疫固定結果顯示為單獨的

l成分:需要使用抗

l游離輕鏈和/或抗IgD和IgE的抗血清確認免疫固定結果確認:IgEl單克隆免疫球蛋白免疫固定106特殊病例特殊病例107在免疫球蛋白區(qū)域檢測到異常條帶,但是免疫固定檢測結果卻為陰性在使用抗-纖維蛋白原的抗血清結果顯示為陽性在免疫球蛋白區(qū)域檢測到異常條帶,但是免疫固定檢測結果卻為陰108電泳技術的臨床應用完整版課件109尿蛋白的電泳研究尿蛋白的電泳研究110腎單位的生理結構和各類生理蛋白1百萬個腎單位每天過濾180升的血漿，同時產生大約1.5升的尿液。腎小管的廢棄物排放最后形成的尿液含有1/3的白蛋白和2/3球蛋白腎小管重新吸收白蛋白轉鐵蛋白免疫球蛋白小分子蛋白腎小球過濾白蛋白轉鐵蛋白免疫球蛋白小分子蛋白小分子蛋白腎單位的生理結構和各類生理蛋白1百萬個腎單位每天過濾180升111尿蛋白:定義在生理學角度講，正常的人的尿蛋白量在50至120mg/24

h(大約在100mg/L)

主要的蛋白是白蛋白(少于30mg/L)病理上的腎功能疾?。寒斈虻鞍琢看笥?50mg/24

h

而此時，尿蛋白的成分也是不定的。尿蛋白:定義在生理學角度講，正常的人的尿蛋白量在50112導致尿蛋白含量增加的原因生理上的因素:間歇性的(站立過久,正餐以后,運動過后,壓力之下)腎前性:高血壓,發(fā)燒,心臟或肝臟功能衰退,…

蛋白濃度升高(尿蛋白含量過高)腎性:腎小球或腎小管受到損傷(或者兩個同時受到損傷)腎后性:泌尿系統(tǒng)出現損傷導致尿蛋白含量增加的原因生理上的因素:間歇性的(站立過113電泳技術的臨床應用完整版課件114腎前性的尿蛋白腎前性的尿蛋白115尿蛋白含量增加某一種蛋白含量出現異常升高，超出了腎小管對于這一蛋白的再吸收能力。原因自由輕鏈,主要是在單克隆免疫球蛋白疾病中beta2微球蛋白,淋巴組織增生綜合征溶菌酶,在一些急性髓細胞白血病血紅蛋白,在結合珠蛋白飽和后出現的溶血現象中血清粘蛋白,又稱為Alpha酸性糖蛋白，在支氣管癌患者中肌紅蛋白,在橫紋肌出現溶解患者中上述各類情況均可導致出現腎病

(尤其是含有自由輕鏈的本周氏尿蛋白)尿蛋白含量增加某一種蛋白含量出現異常升高，超出了腎小管對于116>67kDa<67kDa尿蛋白含量增加>67kDa<67kDa尿蛋白含量增加117腎性尿蛋白分析腎性尿蛋白分析118在HYDRAGEL5PROTEINURIE

凝膠上主要的尿蛋白的電泳條帶區(qū)域分析起源于腎小管的各類蛋白(分子量<67kDa)起源于腎小球的各類蛋白(分子量>67kDa)白蛋白(分子量:67kDa)a1-微球蛋白

(MW:33kDa)游離輕鏈

(MW

25kDa)轉鐵蛋白

(MW:80kDa)Cystatin(MW:11kDda)b2-微球蛋白

(MW:12kDa)溶菌酶

(MW:15kDa)視黃醇結合蛋白(MW:21kDa)游離輕鏈的二聚體(MW

50kDa)IgG(MW:160kDa)IgA(MW:165kDa)結合珠蛋白加樣位置a2-巨球蛋白

(MW:900kDa)注:(CystatinC),血清半胱氨酸蛋白酶抑制劑C在HYDRAGEL5PROTEINURIE凝膠上起源119腎小球過濾小分子蛋白,分子量小于67

kDa,被過濾到尿液中.其他決定各種蛋白被過濾的因素:分析形狀,帶電量,血漿濃度.還有一些血液動力學因素可影響蛋白的過濾.腎小球過濾小分子蛋白,分子量小于67

kDa,被過濾到120腎小球損傷經常出現于成人及兒童患者中,表現為尿蛋白含量出現增加現象

(大于1

g/24-h)原因糖尿病感染性損傷(細菌感染,乙肝患者,水痘,梅毒,單核白血球增多癥

,…)其他系統(tǒng)性疾病(自動免疫系統(tǒng),癌癥,…)中毒現象(重金屬,藥物中毒,…)此時,我們可以在尿蛋白中發(fā)現白蛋白和其他大分子量蛋白(大于67

kDa)。腎小球損傷經常出現于成人及兒童患者中,表現為尿蛋白含量出現121電泳技術的臨床應用完整版課件122臨床示例臨床示例123腎小管的再次吸收功能在腎小球中被過濾掉的小分子蛋白，分子量小于67

kDa,將會在腎小管內被重新吸收(內吞作用).

99%的在腎小球內被過濾的蛋白,都將會被重新吸收利用.

例如,

18

g/24-h白蛋白將會被過濾掉;

30

mg/L

白蛋白在人的尿液中被發(fā)現.

腎小管的再次吸收功能在腎小球中被過濾掉的小分子蛋白，分子量124腎小管損傷腎小管損傷將會改變其對小蛋白分子的重新吸收能力

(小于67

kDa的蛋白)通常是暫時性的,并且少于0.5

g/24-hours原因遺傳原因(Fanconi’ssyndrome)免疫球蛋白單克隆擴增(骨髓瘤)藥物作用(抗癌藥物)中毒現象(重金屬)白蛋白(<30%)及其它小分子蛋白(小于67

kDa)都將會在尿液中被找到.腎小管損傷腎小管損傷將會改變其對小蛋白分子的重新吸收能力(125電泳技術的臨床應用完整版課件126>67kDa<67kDa腎小管損傷<67kDa>67kDa>67kDa<67kDa腎小管損傷<67kDa>127>67kDa<67kDa混合性損傷>67kDa<67kDa混合性損傷128電泳技術的臨床應用完整版課件129臨床示例臨床示例130腎小球、腎小管均受損傷。臨床示例腎小球、腎小管均受損傷。臨床示例1315PROTEINURIE14.3KDa26.6KDa150KDa66KDa5PROTEINURIE14.3KDa26.6KDa1132電泳技術的臨床應用完整版課件133輕鏈病多表現為腎臟損害，極易誤診為慢性腎炎。我們認為輕鏈有3種形式出現在血清或尿中；一是正常的輕鏈過剩（Kappa和Lambda同時出現），多出現于慢性肝病，紅斑狼瘡等多克隆增殖中。二是伴隨輕鏈。三是單一輕鏈，血和尿中只出現單一增殖的大量輕鏈。輕鏈病多表現為腎臟損害，極易誤診為慢性腎炎。我們認為輕鏈有134電泳技術的臨床應用完整版課件135電泳技術的臨床應用完整版課件136關于本周氏蛋白的檢測進行血清蛋白電泳時,已經了解患者的血清蛋白電泳信息(血液中檢測到單克隆免疫球蛋白),

不建議進行尿蛋白濃縮.當懷疑患者出現淀粉樣病變或者輕鏈沉淀病時(血清中未檢測到單克隆免疫球蛋白),這種情況下，需要濃縮尿蛋白確認是否出現了本周氏蛋白.濃縮還是不濃縮

?關于本周氏蛋白的檢測進行血清蛋白電泳時,已經了解患者的血清137BenceJonesprotein漿細胞增生癥影響血液中出現游離輕鏈尿液中出現起因結果腎小管損傷淀粉樣病變輕鏈沉淀病骨髓瘤巨球蛋白血癥CLL慢性白血病MGUS.....BenceJonesprotein漿細胞增生癥影響血液中138下列參數會影響本周氏蛋白的毒性:等電點(pI):

-WhenthepIis>6,theBenceJoneswillinteractstronglywiththeTamm-Horsfallprotein.

-IfthepIislow,therewillbelittleinteractionwithTHP.輕鏈形成的聚合體:-(polymerscanreachaMWof900kD).

輕鏈的初級結構:

-Theprimarystructureofthefreelightchainsisalsoinvolvedinthetoxicity.Thisisduetothevariableregionofthelightchain.下列參數會影響本周氏蛋白的毒性:等電點(pI):139尿液的檢測原則當血液中檢測到M蛋白時: -進行24H尿蛋白檢測 -電泳+IF/BJ -對異常峰進行鑒定 -對患者進行隨訪,目的是確認藥后療效和腎臟損傷程度尿液的檢測原則當血液中檢測到M蛋白時:140原尿檢測

(HR3Program)Hydragel15HR(高分辨試劑檢測)原尿檢測(HR3Program)Hydragel15141濃縮尿液檢測(HR2Program)Hydragel15HR(高分辨試劑檢測)濃縮尿液檢測(HR2Program)Hydragel1142HydragelBenceJones(本周氏蛋白檢測)HydragelBenceJones(本周氏蛋白檢測)143總的尿蛋白:0,3g/L腎小管型損傷檢測到:-微量白蛋白,-3個腎小管型小分子蛋白-多克隆的kandl

型輕鏈,沒有重鏈與之對應本周氏蛋白檢測陰性總的尿蛋白:0,3g/L腎小管型損傷檢測到:本周氏蛋白檢144重點:對患者定期隨訪檢測,便于及時掌握患者腎臟損傷程度

總結重點:對患者定期隨訪檢測,便于及時掌握患者腎臟損傷程度145電泳技術在同工酶分析方面的應用TheAssayandtheClinicalApplicationofIsoenzymes電泳技術在同工酶分析方面的應用TheAssayandt146同工酶的定義同工酶是以多種分子形式存在于機體的催化功能相同分子結構不同同工酶的定義同工酶是以多種分子形式存在于機體的147檢測同工酶的目的檢測同工酶活力比單測定酶的總活力更具有臟器特異性和高靈敏性等優(yōu)點,因而提高了臨床診斷價值早期診斷某些疾病,陽性率高,特異性強可以估計病情嚴重性和判斷預后檢測同工酶的目的檢測同工酶活力比單測定酶的總活力更具有臟器特148同工酶的命名國際化學聯合會(InternationalUnionofpureandAppliedChemistryIUPAC)建議:1、在命名同工酶時應采用規(guī)定的酶的名稱2、如同工酶電泳圖上各主要區(qū)帶旁還分出若干亞區(qū)帶時,可以用a,b,c,d注于主要區(qū)帶的右下方.3、經明確鑒定過的特異同工酶,可以附加諸如分子量,穩(wěn)定性,亞單位等參數.4、同工酶不應該用組織的分布來加以注解(如腦型，心肌型等)因為這類同工酶在別的生物機體中不一定存在于同一組織中。同工酶的命名國際化學聯合會(InternationalUn149目前廣泛應用于臨床檢測中的同工酶乳酸脫氫酶同工酶(Lactatedehydrogenase,LDH)肌酸激酶同工酶(Creatinekinase,CK)堿性磷酸酶同工酶(Alkalinephosphatase,ALP)天冬氨酸氨基轉移酶(Aspartatetransaminase,AST)γ-谷氨酰轉移酶(γ-glutamyltransferase,GGT)

-淀粉酶同工酶(

-Amylase,AMY)目前廣泛應用于臨床檢測中的同工酶乳酸脫氫酶同工酶(Lacta150同工酶的分析方法由于同工酶的一級結構(氨基酸序列)及高級結構(構象)的不同,因此,一種酶的各個同工酶在化學,物理化學,生物化學等方面的性質也就有所差異,這些差異就提供了分析和鑒定同工酶的理論基礎在研究同工酶的所有方法中，電泳法的使用最為廣泛。因為此法簡便、快速、分離效果良好，并且一般不會破壞酶的天然狀態(tài)同工酶的分析方法由于同工酶的一級結構(氨基酸序列)及高級結151乳酸脫氫酶同工酶(LDH)乳酸脫氫酶是能催化乳酸脫氫生成丙酮酸的酶每種LD同功酶都是由4個亞單位(肽鏈)組成的四聚物.這些亞單位中,有兩類分別專屬M(肌肉)和H(心臟). H4=LD1 H3M=LD2 H2M2=LD3 HM3=LD4 M4=LD5乳酸脫氫酶同工酶(LDH)乳酸脫氫酶是能催化乳酸脫氫生成丙酮152乳酸脫氫酶同工酶(LDH)組成與分布

LDH1～5H,M,MW140,000.

LDH1,2:心肌,腎,紅細胞

LDH3:肺,脾,胰,甲狀腺,腎上腺,淋巴結

LDH4,5:骨骼肌,肝

LDHx:睪丸,精子檢測方法--------瓊脂糖電泳法

原理:以瓊脂糖膠作為介質,LDH可分離出五種同工酶區(qū)帶,根據其電泳遷移率的快慢,將遷移最快的命名為LDH1,依次為LDH2,LDH3,LDH4和LDH5,最后顯色,掃描確定其百分率.參考值LDH128.4±5.3%LDH241.0±5.0%LDH319.0±4.0%LDH46.6±3.5%LDH54.6±3.0%乳酸脫氫酶同工酶(LDH)組成與分布

153電泳技術的臨床應用完整版課件154臨床意義LDH1和LDH2升高：見于急性心肌梗塞(LDH1／LDH2>1)、病毒性心肌炎、風濕性心肌炎和克山病LDH5和LDH4升高：

(1)急性肝炎：LDH5明顯升高，LDH4輕度增高；

(2)急性肝萎縮：LDH5和LDH4都明顯升高；

(3)慢性肝炎，肝硬化：LDH5輕度升高；

(4)骨骼肌急性損傷、皮肌炎：LDH5和LDH4都升高；

(5)前列腺癌：LDH5升高，LDH5／LDH1>1LDH的五種同工酶都升高：見于胃癌、結腸癌和胰腺癌.臨床意義LDH1和LDH2升高：155肌酸激酶同工酶（ISO-CK）

肌酸激酶(CK)同工酶的組成

CK是由M和B兩種亞單位組成的二聚體,在細胞質內質內共有三種同工酶：CK-MM,CK-MB和CK-BB。在細胞線粒體內還有另一種同工酶，稱為CK-Mt。這幾種同工酶的分子量雖然相同，但免疫特性不同，電泳遷移率也不同。肌酸激酶同工酶（ISO-CK）肌酸激酶(CK)156

肌酸激酶(CK)同工酶的組成

(廣泛存在于各類組織中,與ATP形成有關)

骨骼肌:主要為CK-MM,不含CK-BB,僅有少量CK-MB（＜3％）

心肌:主要為CK-MM,CK-MB占CK總量的14％-42％

腦組織以及其中含平滑肌器官:幾乎全部是CK-BB，它同時也是人胚胎中CK的主要存在形式。

MacroCKTypeICKBBApplicationpointCKMBCKMMMacroCKTypeII腦組織及其它平滑肌:CK-BB0%心肌細胞:CK-MB0~3%骨骼肌細胞:CK-MM97~100%CK-MB的陽性決定水平為5%

肌酸激酶(CK)同工酶的組成

(廣泛存在于各類組織中,與A157

免疫抑制法測定

原理：用羊抗CK-M抗體與病人血清共同溫育，血清中的CK-M亞單位全部被抑制，測定剩余的非M-CK活性，即代表CK-BB和CK-MB中的B亞基，也包括CK-Mt

活性，由于正常人和心臟，肌肉疾患病人血清中CK-BB和CK-Mt的含量極低，故一般忽略不計，此時測得的非M-CK活性實際上代表CK-MB中的B亞基活性，乘以2即為CK-MB活性。

免疫抑制法測定

原理：用羊抗CK-M抗體與158電泳技術的臨床應用完整版課件159CK同工酶的臨床意義

1．急性心肌梗塞

（1）CK總活性在急性心肌梗塞后的4小時便開始升高，至20-30小時達高峰，3-5天后下降至基礎水平。此酶為診斷心肌梗塞的一個極靈敏指標。

4小時20-30小時3-5天CK同工酶的臨床意義

1．急性心肌梗塞

（1）160（2）CK-MB主要存在于心肌細胞內，急性心肌梗塞后先于CK總活力1-2小時升高，12-20小時達峰值，如無并發(fā)癥3天后回復至正常水平，如果胸痛病人患者在48小時內CK-MB尚在正常水平活力不足總CK的2%，即可排除急性心肌梗塞的診斷

若已下降的CK-MB再度上升，提示可能有新

的心肌梗塞發(fā)生。

1-2小時12-20小時3天后（2）CK-MB主要存在于心肌細胞內，急性心肌梗塞后先于CK161（1）肌營養(yǎng)不良

骨骼肌中富含CK，以CK-MM為主，故各型肌營養(yǎng)不良均可引起CK活力升高，發(fā)病年齡越早，予后也越差。其中半數以上可檢出CK-MB，（CK-MB/CK＜5%)而心電圖都無陽性發(fā)現，說明并非心肌受累。

（2）肌肉創(chuàng)傷及肌肉注射

肌肉創(chuàng)傷可使CK活力升高，無CK-MB出現，CK-MM是骨骼肌損傷的特異指標。肌肉注射青霉素，利血平，腎上腺素等藥物期間，約有1/3的病人在12-48小時內總CK活力升高，一般可持續(xù)3-6天，檢測CK同工酶，可見主要是CK-MM占優(yōu)勢，提示這是肌肉創(chuàng)傷所至。

2．神經肌肉系統(tǒng)疾?。?）肌營養(yǎng)不良

骨骼肌中富含CK，以CK-MM為1623.巨CK的臨床評價-巨CK1巨CK1

是一種同工酶(抗體)與自身抗體的復合物最多的是CK-BB與IgG或IgA的復合物.也有少數為CK-MM與IgG的復合物。CK-BB-IgG或IgA。老年人、風濕和心臟病、肌炎患者。在做冠脈造影的患者中巨CK1的發(fā)生率13.8％，認為至少部分起源于血管壁。3例低血鉀性肌病婦女。1例急性橫紋肌溶解，肌肉內肉堿棕櫚酰轉移酶缺乏。認為巨CK1與自身免疫性疾病無明顯聯系。3.巨CK的臨床評價-巨CK11633.巨CK的臨床評價-巨CK2巨CK2是一種低聚的線粒體CK，又稱CK-Mt，存在于細胞線粒體膜上，當線粒體崩解時，線粒體的小碎片進入血液，使CK-Mt成低聚狀態(tài)。眾多文獻認為巨CK2不會在健康人血中出現，它與惡性腫瘤密切相關，可作為腫瘤的標志物。原發(fā)性肺癌巨CK2檢出率為56.8%。肺癌組CEA(人癌胚抗原)測定的陽性率40.0%。手術切除后巨CK2轉為陰性，提示將巨CK2和CEA聯合檢測，用于檢出肺癌有無周圍淋巴結轉移具有價值。巨CK2亦可為胃腸道惡性腫瘤的標志物，13例結腸癌患者，手術前有9例血清出現巨CK2；21例結腸癌或胃癌轉移的患者中16例檢出巨CK2。3.巨CK的臨床評價-巨CK2巨CK2是一種低聚的線粒體164MMMBBBMacroCK1MMMBBBMacroCK11654.CK-BB《急性顱腦損傷患者血清CK—BB監(jiān)測的臨床意義》華西醫(yī)學－1997年12月2期何永生，葉長寧，四川省人民醫(yī)院神經外科

目的；探討急性顱腦損傷患者血清ＣＫ－ＢＢ活性及動態(tài)變化的臨床意義。方法：逐日監(jiān)測５０例急性腦傷患者血清ＣＫ－ＢＢ活性，與臨床指標對比評價其臨床價值，并分析其變化規(guī)律與治療轉歸，預后的關系，結果：血清ＣＫ－ＢＢ在傷后早期升高，且與傷情成正比相關，ＣＫ－ＢＢ較快恢復正常是治療有效、無并發(fā)癥和預后良好的標志。4.CK-BB《急性顱腦損傷患者血清CK—BB監(jiān)測的臨床意166急性顱腦損傷患者血清CK—BB監(jiān)測的臨床意義華西醫(yī)學－1997年12月2期何永生，葉長寧，四川省人民醫(yī)院神經外科

目的：探討急性顱腦損傷患者血清ＣＫ－ＢＢ活性及動態(tài)變化的臨床意義。方法：逐日監(jiān)測５０例急性腦傷患者血清ＣＫ－ＢＢ活性，與臨床指標對比評價其臨床價值，并分析其變化規(guī)律與治療轉歸，預后的關系，結果：血清ＣＫ－ＢＢ在傷后早期升高，且與傷情成正比相關，ＣＫ－ＢＢ較快恢復正常是治療有效、無并發(fā)癥和預后良好的標志。急性顱腦損傷患者血清CK—BB監(jiān)測的臨床意義167動態(tài)監(jiān)測缺氧缺血性腦病患兒血清CK-BB的臨床意義中國誤診學雜志－2002年

第2卷第12期鄭紅英

目的：探討缺氧缺血性腦病(HIE)新生兒血清腦型肌酸激酶同工酶(CK-BB)和心型肌酸激酶同工酶(CK-MB)的活性變化,以了解CK-BB和CK-MB對HIE患兒的檢測價值.方法：在出生后1～3d檢測HIE患兒CK、CK-BB、CK-MB活性,與正常新生兒作對比,分析各項指標與病情、轉歸、預后的關系.結果：中度、重度HIE患兒血清CK-BB、CK與正常新生兒相比有顯著性升高;重度組CK-MB比正常組顯著升高.CK-BB活性迅速下降者,治療有效,預后良好;CK-BB活力持續(xù)升高,患兒預后差,CK-MB升高患兒常伴有心肌功能損害.結論：血清CK-BB是診斷HIE的可靠、特異性指標,動態(tài)監(jiān)測新生兒CK-BB、CK-MB活性對病情估計、判斷療效及預后評估有重要價值.動態(tài)監(jiān)測缺氧缺血性腦病患兒血清CK-BB的臨床意義168羊水Ⅲ°混濁新生兒肌酸磷酸激酶同功酶改變及臨床意義

當代醫(yī)學，2007年6月傅發(fā)展，浙江省蒲江縣人民醫(yī)院目的

探討羊水Ⅲ°混濁新生兒肌酸磷酸激酶及其同功酶的改變及意義。方法

24例羊水Ⅲ°混濁新生兒暫無心腦肺等臟器并發(fā)癥作為實驗組，24例正常新生兒作為對照組，出生后48小時內測定CK、CK-MB、CK-BB。

結果

兩組差異有顯著性（P＜0.01）。結論

CK-BB主要存在于腦部神經細胞和星形膠質細胞的胞漿中，只有在神經元和膠質細胞受損時才釋放到細胞外。由于宮內缺氧導致血腦屏障功能受損，因而大量CK-BB通過血腦屏障進入血液循環(huán)，使血清中水平升高。CK-BB在血中表達水平越高，持續(xù)時間越長，表明腦損害病情越重，因其有較高的特異性與靈敏性，在腦缺氧損害時，CK-BB可作為早期診斷、病情估計及判斷預后的評價指標。

羊水Ⅲ°混濁新生兒肌酸磷酸激酶同功酶改變及臨床意義當代醫(yī)學169新生兒缺氧缺血性腦病血清CK-BB水平與腦實質CT值的相關性研究中國優(yōu)生與遺傳雜志，2006年第14卷05期張愛梅,劉長云,呂祖芳,段全紀目的：探討新生兒血清肌酸激酶腦型同工酶(CK-BB)的水平與腦實質CT值對缺氧缺血性腦病(HIE)的診斷價值.方法：采用比色法對49例HIE患兒和32例對照組新生兒血清CK-BB水平進行動態(tài)測定.同時采用日本東芝Aqilion螺旋CT掃描機單純頭顱平掃,在CT診斷分度的同時測定腦實質CT值.結果：生后24小時內HIE組血清CK-BB水平與對照組相比明顯增高(P均<0.01),且HIE各組之間差異有顯著性意義(P均<0.01);生后48及72小時重度HIE組血清CK-BB水平仍高于對照組(P<0.01),與輕、中度HIE組與對照組相比差異有非常顯著性意義(P<0.01).輕、中、重度HIE患兒腦實質CT值均明顯低于對照組(均P<0.01),且HIE各組之間差異有顯著性意義(P均<0.01).相關分析發(fā)現,HIE組生后24小時內患兒血清CK-BB水平與腦實質CT值呈顯著負相關(r=-0.747,P<0.01).結論：血清CK-BB水平監(jiān)測可作為HIE診斷及評價腦損傷程度的早期預測指標,與腦實質CT值結合可對窒息后缺氧缺血性腦病做出早期而正確的診斷,為早期治療提供依據.新生兒缺氧缺血性腦病血清CK-BB水平與腦實質CT值的相關性170腦脊液蛋白研究腦脊液蛋白研究171中樞合成免疫球蛋白是中樞神經系統(tǒng)疾患的一個重要信號，主要用于對中樞神經系統(tǒng)疾患進行診斷和鑒別診斷如：多發(fā)性硬化癥、癡呆、脊髓炎、副腫瘤性腦炎、神經性梅毒等現階段臨床上診斷中樞神經系統(tǒng)病變主要依靠影像學結合臨床分析，但是，在病變早期影像學及常規(guī)檢查常無法診斷然而中樞神經系統(tǒng)病變患者腦脊液中免疫球蛋白IgG增加卻發(fā)生較早因此實驗中對腦脊液中IgG進行蛋白電泳，形成的典型寡克隆區(qū)帶對上述疾病的早期診斷而言，是重要的、必不可少的依據中樞合成免疫球蛋白是中樞神經系統(tǒng)疾患的一個重要信號，主要用于172瓊脂糖凝膠電泳和免疫固定原理相結合利用高分辨技術在瓊脂糖凝膠上對腦脊液蛋白進行電泳分離(血清中的免疫球蛋白的濃度應該被稀釋到和腦脊液中Ig一樣的濃度:5至10mg/L).利用與標