BriCyte E6流式細(xì)胞儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序

BriCyteE6流式細(xì)胞儀原則操作程序1目的規(guī)范原則的BriCyteE6流式細(xì)胞儀操作程序，確保儀器設(shè)備的正常使用，使得測量數(shù)據(jù)和檢測成果含有良好的溯源性、精確性和可靠性。2范疇僅合用于BriCyteE6流式細(xì)胞儀。3儀器檢測原理BriCyteE6流式細(xì)胞儀采用多路激發(fā)、熒光染色的流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分類和特性分析，并結(jié)合流量測定技術(shù)實(shí)現(xiàn)絕對計(jì)數(shù)。4儀器設(shè)備試劑BriCyteE6流式細(xì)胞儀專用試劑：見“淋巴細(xì)胞亞群檢測”、“HLA-B27檢測”試劑內(nèi)容。全部試劑應(yīng)參考試劑的使用闡明進(jìn)行保存。變質(zhì)、超出效期的全部試劑不能使用。5儀器設(shè)備標(biāo)本原始樣品采集、制備、解決、檢查和寄存見檢查科有關(guān)規(guī)范。6儀器設(shè)備環(huán)境規(guī)定，使用安全方法6.1儀器設(shè)備環(huán)境規(guī)定6.1.1空間安裝規(guī)定儀器應(yīng)安裝在穩(wěn)固工作臺上。在儀器兩側(cè)各保存最少0.5米的空間，以方便維護(hù)和保養(yǎng)。儀器后部分別最少要有0.25米的空間，以避免妨礙熱氣的排放并確保主機(jī)后的液路管道不受擠壓。將BriCyteE6流式細(xì)胞儀安放在通風(fēng)良好、灰塵少的地方。避免在過熱或過冷以及日光直射的環(huán)境中使用BriCyteE6流式細(xì)胞儀。確保操作臺面有足夠的空間放置試劑托架及鞘液桶、廢液桶。6.1.2運(yùn)行條件環(huán)境溫度規(guī)定：15℃～32℃。環(huán)境相對濕度規(guī)定：20%～85%。電源電壓規(guī)定：主機(jī)：100~240V，50Hz/60Hz，500VA。儀器設(shè)備周邊應(yīng)盡量無塵、無機(jī)械振動(dòng)、無污染、無大噪音源和電源干擾；遠(yuǎn)離強(qiáng)電磁場干擾源；不要靠近電刷型電機(jī)、閃爍熒光燈和經(jīng)常開關(guān)的電接觸性設(shè)備；建議在運(yùn)行設(shè)備之前對實(shí)驗(yàn)室的電磁環(huán)境進(jìn)行評定；避免強(qiáng)光直接照射；避免置于熱源及風(fēng)源前；選擇一種通風(fēng)良好的位置；含有良好的接地環(huán)境；不要將主機(jī)放置在斜面上；室內(nèi)使用。6.2儀器安全在儀器設(shè)備上面和周邊不要使用可燃性危險(xiǎn)品，避免引發(fā)火災(zāi)和爆炸。在電源打開狀態(tài)下，嚴(yán)禁打開儀器前面、側(cè)面及背面面板，以免損害線路板；嚴(yán)禁觸摸BriCyteE6流式細(xì)胞儀外殼里面的電子元件，特別避免濕手觸摸，以免造成電擊。儀器設(shè)備使用前，必須認(rèn)真檢查設(shè)備之間連接及外接線(件)與否對的（連接辦法見BriCyteE6使用闡明書2.3節(jié)）、正常，電源插頭與否對的插接，設(shè)備與否處在正常狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)過程中如遇水、電故障或中斷，應(yīng)立刻關(guān)閉影響儀器設(shè)備安全的有關(guān)開關(guān)，并實(shí)施安全保護(hù)方法。嚴(yán)禁魯莽裝卸儀器設(shè)備，運(yùn)輸過程中應(yīng)避免傾斜，振動(dòng)和碰撞。如果標(biāo)本、試劑溢出在分析儀上，立刻擦掉并根據(jù)檢查科有關(guān)規(guī)范解決。6.3人員安全儀器設(shè)備中全部與病人的樣品接觸或有潛在性接觸可能的表面與零件都視污染物。在操作、維護(hù)儀器設(shè)備時(shí)有必要穿戴保護(hù)性的外套和手套，頭發(fā)、衣物、手指等與全部的活動(dòng)部件保持距離。在儀器工作過程中，勿觸及全部運(yùn)動(dòng)部件，避免人身傷害。嚴(yán)禁觸摸BriCyteE6流式細(xì)胞儀內(nèi)部的電路，特別避免濕手觸摸，以免造成電擊。全部物品（樣本、質(zhì)控物、校準(zhǔn)物、試劑、廢液等），以及同這些物質(zhì)接觸的區(qū)域都有潛在的生物傳染性危險(xiǎn)。操作者在實(shí)驗(yàn)室接觸有關(guān)物品和區(qū)域時(shí)，應(yīng)恪守實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)定，并穿戴好個(gè)人防護(hù)裝備（如實(shí)驗(yàn)室防護(hù)衣，手套等）。試劑一旦接觸皮膚，立刻用大量水沖洗，如有需要請接受醫(yī)生治療；試劑一旦接觸眼睛，立刻用大量水沖洗，并接受醫(yī)生治療。7開關(guān)機(jī)程序7.1開機(jī)準(zhǔn)備確保鞘液余量充足，如需要，請更換鞘液桶。確保廢液桶已清空，且已進(jìn)行了必要的消毒。確保鞘液、廢液的管路無彎折，連接可靠。確保儀器的電源插頭安全插入電源插座。確保計(jì)算機(jī)電纜與儀器連接就緒。確保條碼掃描儀（如選配）、鍵盤和鼠標(biāo)的電纜與計(jì)算機(jī)連接就緒。7.2開機(jī)程序儀器開機(jī)：打開儀器背面電源開關(guān)，儀器正面批示燈變?yōu)榫G色閃爍狀態(tài)。操作軟件登錄：啟動(dòng)電腦，雙擊電腦桌面上的MRFlow軟件圖標(biāo)，輸入顧客名和密碼登錄，進(jìn)入MRFlow操作軟件界面。系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)行初始化、開機(jī)倒計(jì)時(shí)及溫控。初始化及溫控過程結(jié)束后，彈出“開機(jī)完畢”提示，單擊“擬定”，開機(jī)完畢，即可進(jìn)行正常測試。7.3關(guān)機(jī)程序單擊軟件界面上方快捷圖標(biāo)區(qū)“（關(guān)機(jī)）”按鈕，彈出“與否擬定關(guān)機(jī)？”提示，單擊“是”。再按照提示信息，分別將裝有清洗液(用蒸餾水10倍稀釋)、蒸餾水的試管放置于指定位置，單擊“擬定”后，儀器自動(dòng)執(zhí)行關(guān)機(jī)程序；關(guān)機(jī)流程結(jié)束后，彈出“關(guān)機(jī)完畢”提示，單擊“擬定”，再關(guān)閉儀器電源；清空廢液桶中的廢液，并妥善解決廢液；關(guān)閉MRFlow軟件窗口，再關(guān)閉電腦。8儀器質(zhì)控8.1實(shí)驗(yàn)試劑及解決通用名稱“流式細(xì)胞儀多色質(zhì)控微球”，英文名稱“FluorescenceSetupParticles”；在渦旋混勻儀上激烈震蕩微球，在流式試管中滴加1滴微球，用0.5ml的流式鞘液稀釋，使用前充足混勻。8.2質(zhì)控物信息設(shè)立單擊“質(zhì)控”，進(jìn)入“儀器質(zhì)控”界面。單擊“基本信息”區(qū)“批號”下拉菜單，選擇一種預(yù)先保存的質(zhì)控物批號，以下圖所示。該批號對應(yīng)的質(zhì)控物信息自動(dòng)顯示在現(xiàn)在頁面。如果該批次質(zhì)控品初次進(jìn)行測試，需要通過掃描質(zhì)控二維碼、從質(zhì)控信息存儲介質(zhì)中讀取、手動(dòng)錄入等方式進(jìn)行質(zhì)控物信息的設(shè)立，具體辦法以下：掃描質(zhì)控二維條碼：從質(zhì)控物包裝中找到廠家提供的二維碼（碼制：QRCode），以下圖所示。單擊“質(zhì)控物信息”界面下方“二維碼掃描”按鈕，彈出下列窗口。使用條碼掃描儀，逐個(gè)掃描二維碼，識別成功的二維碼顯示為綠色，不成功的二維碼顯示為紅色，以下圖所示。如需提前退出，可按鍵盤上的[ESC]鍵。三個(gè)二維碼全部掃描成功后，軟件自動(dòng)解析質(zhì)控物信息。解析完畢后，質(zhì)控物信息被錄入現(xiàn)在界面。從質(zhì)控信息存儲介質(zhì)中讀取單擊“質(zhì)控物信息”界面下方“導(dǎo)入”按鈕。選擇導(dǎo)入的途徑及質(zhì)控物信息文獻(xiàn)后，單擊“打開”，則質(zhì)控物信息被導(dǎo)入現(xiàn)在頁面。手動(dòng)錄入在“基本信息”區(qū)設(shè)立質(zhì)控物基本信息，涉及：批號、產(chǎn)品ID、FS閾值、流速。在“各通道靶值”區(qū)設(shè)立自動(dòng)算法項(xiàng)目各通道靶值。在“賠償矩陣”區(qū)設(shè)立自動(dòng)算法項(xiàng)目各通道之間賠償值。錄入完整后，內(nèi)容被實(shí)時(shí)保存。8.3上機(jī)測試8.3.1BriCyteE6自動(dòng)進(jìn)樣機(jī)型將配制好的質(zhì)控微球溶液，混勻后置于指定試管位。在“儀器控制”欄的位置的輸入框中單擊，即可出現(xiàn)樣本盤位置圖，在該圖上選擇質(zhì)控試管放置的盤號和位置號。單擊“”按鈕，啟動(dòng)測試。儀器自動(dòng)完畢系統(tǒng)校準(zhǔn)和電壓標(biāo)定。質(zhì)控分析完畢后，“質(zhì)控詳情”界面下顯示當(dāng)次質(zhì)控報(bào)告，報(bào)告中質(zhì)控狀態(tài)欄均顯示“pass”即可進(jìn)行樣本測試，如果有“fail”項(xiàng)，需尋找因素重新進(jìn)行質(zhì)控測試。在“儀器質(zhì)控圖”界面可查看一段時(shí)間內(nèi)的質(zhì)控圖，單擊質(zhì)控圖上的質(zhì)控點(diǎn)，右側(cè)可同時(shí)顯示該點(diǎn)當(dāng)次的質(zhì)控報(bào)告。8.3.2BriCyteE6開放進(jìn)樣機(jī)型將配制好的質(zhì)控微球溶液，混勻后置于試管托架上。單擊“”按鈕，啟動(dòng)測試。儀器自動(dòng)完畢系統(tǒng)校準(zhǔn)和電壓標(biāo)定。質(zhì)控分析完畢后，“質(zhì)控詳情”界面下顯示當(dāng)次質(zhì)控報(bào)告，報(bào)告中狀態(tài)欄均顯示“pass”即可進(jìn)行樣本測試，如果有“fail”項(xiàng)，需尋找因素重新進(jìn)行質(zhì)控測試。在“儀器質(zhì)控圖”界面可查看一段時(shí)間內(nèi)的質(zhì)控圖，單擊質(zhì)控圖上的質(zhì)控點(diǎn)，右側(cè)可同時(shí)顯示該點(diǎn)當(dāng)次的質(zhì)控報(bào)告。淋巴細(xì)胞亞群檢測9.1實(shí)驗(yàn)試劑CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色試劑（流式細(xì)胞法）；CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC四色試劑（流式細(xì)胞法）；流式溶血?jiǎng)ㄊ褂们坝谜麴s水做10倍稀釋，即溶血?jiǎng)?蒸餾水=1:9）。9.2樣本解決取兩支試管，其中1支試管中加入20ulCD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色試劑，標(biāo)記為“T_001”，另一支試管中加入20ulCD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC四色試劑，標(biāo)記為“BNK_001”；各吸取50ulEDTA抗凝靜脈血分別加入兩支試管底部（避免將血樣沾到試管壁上）；試管在渦旋混勻器上輕旋混勻，室溫（20℃~25℃）避光孵育15min；分別向兩個(gè)試管中加入450ul1×溶血素，在渦旋混勻器上輕旋混勻，室溫（20℃~25℃）避光孵育15min；上機(jī)檢測。9.3儀器檢測9.3.1BriCyteE6自動(dòng)進(jìn)樣機(jī)型的自動(dòng)檢測單擊“”按鈕新增樣本；輸入樣本編號；單擊“檢查項(xiàng)目”框下拉列表，從中選擇“T/B/NK-Auto”模板；雙擊待測樣本T試管的“位置”框，彈出樣本盤示意圖，單擊盤號兩側(cè)的左/右箭頭按鈕，切換到欲選擇的盤號，單擊孔位選擇T試管在樣本盤上的位置；雙擊待測樣本BNK試管的“位置”框，彈出樣本盤示意圖，單擊孔位選擇BNK試管在樣本盤上的位置（樣本下的全部試管的盤號自動(dòng)保持一致，更換任何試管的盤號，該樣本下其它試管會自動(dòng)更改為與其一致的盤號）；在“樣本”界面“樣本信息”區(qū)中可錄入樣本及病人信息；將準(zhǔn)備好的樣本放入與工作單一致的樣本盤及試管位，對的安裝樣本盤。選中工作單列表中待測樣本的起始試管T試管（非常重要，自動(dòng)測試只識別工作單中起始試管下列的樣本）；單擊“儀器控制”中的“”啟動(dòng)自動(dòng)進(jìn)樣按鈕，儀器自動(dòng)從設(shè)定的起始位置處開始依次執(zhí)行樣本測定。全部試管測定完畢后，自動(dòng)進(jìn)樣停止，儀器狀態(tài)批示燈恢復(fù)為綠色長亮，此時(shí)可安全打開倉門，取出試管或卸下樣本盤。兩管樣本都測試完畢后，軟件自動(dòng)分析測試成果，并可在報(bào)告預(yù)覽中出具檢測報(bào)告。同時(shí)也可根據(jù)需要，調(diào)節(jié)圖形中的設(shè)門位置，統(tǒng)計(jì)成果隨之更新。檢測報(bào)告9.3.2BriCyteE6開放進(jìn)樣機(jī)型的檢測單擊“”按鈕新增樣本；輸入樣本編號；單擊“檢查項(xiàng)目”框下拉列表，從中選擇“T/B/NK-Auto”模板；在“樣本”界面“樣本信息”區(qū)中可錄入樣本及病人信息；將T試管混勻后置于試管托架上，單擊“儀器控制”中的“”啟動(dòng)測試；當(dāng)T試管測試完畢后，將T試管取下，將BNK試管混勻后置于試管托架上，單擊“儀器控制”中的“”啟動(dòng)測試；兩管樣本都測試完畢后，軟件自動(dòng)分析測試成果，并可在報(bào)告預(yù)覽中出具檢測報(bào)告。同時(shí)也可根據(jù)需要調(diào)節(jié)圖形中的設(shè)門位置，統(tǒng)計(jì)成果隨之更新；檢測報(bào)告：HLA-B27檢測10.1實(shí)驗(yàn)試劑IgG2a-FITC/IgG1-PE雙色試劑（流式細(xì)胞法）；HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE雙色試劑（流式細(xì)胞法）；流式溶血?jiǎng)ㄊ褂们坝谜麴s水做10倍稀釋，即溶血?jiǎng)?蒸餾水=1:9）；磷酸鹽緩沖液（自配）。10.2樣本解決取兩支試管，其中1支試管中加入20ulIgG2a-FITC/IgG1-PE雙色同型對照，標(biāo)記為“Isotype_001”，另一支試管中加入20ulHLA-B27-FITC/HLA-B7-PE雙色試劑，標(biāo)記為“B27_001”；各吸取100ulEDTA抗凝靜脈血分別加入2支試管底部（避免將血樣沾到試管壁上）；試管在渦旋混勻器上輕旋混勻，室溫（20℃～25℃）避光孵育15min；每管各加入2ml1×溶血素，在渦旋混勻器上輕旋混勻，室溫（20℃～25℃）避光孵育10min（避免細(xì)胞和溶血素過長時(shí)間的接觸，否則會造成白細(xì)胞的破壞）；300×g離心5min，棄去上清（使用移液器小心吸取上清，使剩余液體為50～100ul，避免將管底的細(xì)胞沉淀懸起），加入2ml磷酸鹽緩沖液緩沖液，輕旋混勻，使管底細(xì)胞重新懸起，300×g離心5min，棄去上清（使用移液器小心吸取上清，使剩余液體為50～100ul，避免將管底的細(xì)胞沉淀懸起）；加入適量的磷酸鹽緩沖液（樣本在2h內(nèi)進(jìn)行檢測）或多聚甲醛溶液（樣本放置超出2h后檢測）；10.3上機(jī)檢測10.3.1BriCyteE6自動(dòng)進(jìn)樣機(jī)型的自動(dòng)檢測單擊“”按鈕新增樣本；輸入樣本編號；單擊“檢查項(xiàng)目”框下拉列表，從中選擇“HLA-B27-Auto”模板；雙擊待測樣本Isotype試管的“位置”框，彈出樣本盤示意圖，單擊盤號兩側(cè)的左/右箭頭按鈕，切換到欲選擇的盤號，單擊孔位選擇Isotype試管在樣本盤上的位置；雙擊待測樣本B27試管的“位置”框，彈出樣本盤示意圖，單擊孔位選擇B27試管在樣本盤上的位置（樣本下的全部試管的盤號自動(dòng)保持一致，更換任何試管的盤號，該樣本下其它試管會自動(dòng)更改為與其一致的盤號）；在“樣本”界面“樣本信息”區(qū)中可錄入樣本及病人信息；將準(zhǔn)備好的樣本放入與工作單一致的樣本盤及試管位，對的安裝樣本盤。選中工作單列表中待測樣本的起始試管Isotype試管（非常重要，自動(dòng)測試只識別工作單中起始試管下列的樣本）；單擊“儀器控制”中的“”啟動(dòng)自動(dòng)進(jìn)樣按鈕，儀器自動(dòng)從設(shè)定的起始位置處開始依次執(zhí)行樣本測定。全部試管測定完畢后，自動(dòng)進(jìn)樣停止，儀器狀態(tài)批示燈恢復(fù)為綠色長亮，此時(shí)可安全打開倉門，取出試管或卸下樣本盤。兩管樣本都測試完畢后，軟件自動(dòng)分析測試成果，并可在報(bào)告預(yù)覽中出具檢測報(bào)告。同時(shí)也可根據(jù)需要，調(diào)節(jié)圖形中的設(shè)門位置，統(tǒng)計(jì)成果隨之更新。檢測報(bào)告10.3.2BriCyteE6開放進(jìn)樣機(jī)型的檢測單擊“”按鈕新增樣本；輸入樣本編號；單擊“檢查項(xiàng)目”框下拉列表，從中選擇“HLA-B27-Auto”模板；在“樣本”界面“樣本信息”區(qū)中可錄入樣本及病人信息；將1號試管混勻后置于試管托架上，單擊“儀器控制”中的“”啟動(dòng)測試；當(dāng)1號試管測試完畢后，將其取下，將2號試管混勻后置于試管托架上，單擊“儀器控制”中的“”啟動(dòng)測試；兩管樣本都測試完畢后，軟件自動(dòng)分析測試成果，并可在報(bào)告預(yù)覽中出具檢測報(bào)告。同時(shí)也可根據(jù)需要調(diào)節(jié)圖形中的設(shè)門位置，統(tǒng)計(jì)成果隨之更新；檢測報(bào)告；鞘液及廢液解決11.1更換鞘液鞘液將用完時(shí)，儀器產(chǎn)生“請更換鞘液”提示；取一桶鞘液，打開桶的包裝蓋，將鞘液瓶蓋組件插入后擰緊，并放置于試劑托架上的鞘液位置；單擊提示信息中的“擬定”，之后能夠繼續(xù)進(jìn)行測試。11.2清空廢液廢液將滿時(shí)，儀器產(chǎn)生“請清空廢液”提示；取下廢液瓶蓋組件，將廢液桶清空后，裝回廢液瓶蓋組件，并放回試劑托架上的廢液位置；單擊提示信息中的“擬定”，之后能夠繼續(xù)進(jìn)行測試。維護(hù)與保養(yǎng)12.1定時(shí)維護(hù)每6個(gè)月保養(yǎng)：更換鞘液過濾器；更換氣泡過濾器；由Mindray服務(wù)進(jìn)行的計(jì)劃防止性維護(hù)。12.2按需維護(hù)12.2.1儀器長久放置后開機(jī)維護(hù)當(dāng)儀器較長時(shí)間（1周以上）不使用，再次開機(jī)后，應(yīng)進(jìn)入軟件“服務(wù)”——“維護(hù)”界面，分別執(zhí)行“液