大孔樹脂吸附靛玉紅的研究

大孔樹脂吸附靛玉紅的研究

大孔吸附樹脂是近年來國內(nèi)外開發(fā)的一種新的分離純度技術(shù)，在藥物領(lǐng)域（尤其是天然藥物提?。┲械玫綇V泛使用。這是提取和分離中藥中水分和有效成分的有效途徑。但對非水溶性有效成分的分離純化卻未見報道。為此,我們研究了中草藥中非水溶性成分在大孔吸附樹脂上的吸附及解吸行為。復(fù)方瓜子金系由瓜子金、大青葉、紫花地丁、野菊花、海金沙、白花蛇舌草等中藥組成的復(fù)方制劑,具有清熱利喉、散結(jié)止痛、祛痰止咳的功效。臨床用于急慢性咽喉炎及上呼吸道感染,有良好的療效。靛玉紅為復(fù)方瓜子金中的重要成分之一,其不溶于水,微溶于乙醇。水煎煮靛玉紅難以提取出來,用60%酒精提取。當(dāng)回收酒精后,靛玉紅則大量沉淀。我們采用大孔吸附樹脂技術(shù),分離純化60%酒精提取液中的靛玉紅,取得滿意效果,純化倍數(shù)為9.2。1儀器和試劑盒1.1標(biāo)準(zhǔn)計量基準(zhǔn)tgl-3gWaters公司600E型泵,Waters486UV/Vis檢測器;大連依利特科學(xué)儀器有限公司ECHrom98色譜工作站;7725i進(jìn)樣閥(20μL);TGL-16G高速離心機(jī);SZ-93自動雙重純水蒸餾器,上海亞榮生化儀器廠;KQ-50型超聲波清洗器,昆明市淀山湖檢測儀器廠。12-1大孔吸附樹脂,市場上購買,由本實驗室重新編號。1.2藥品對照品甲醇、甲酸為分析純,水為重蒸水,乙醇為藥用級。靛玉對照品購自中國藥品生物制品檢定所。瓜子金、大青葉、紫花地丁、野菊花、海金沙由市場購買,由江中藥業(yè)公司質(zhì)檢部門鑒定。2實驗方法和結(jié)果2.1大孔吸附樹脂處理大孔吸附樹脂12-1用藥用酒精浸泡數(shù)天,裝柱后用藥用酒精洗至流出液與水1∶1混合不產(chǎn)生混濁,改用大量水洗,水浸泡備用。2.2再生樹脂的制備用95%酒精洗脫至流出液無色,用大量水洗去酒精,即可。再生樹脂可用于相同植物成分的提取分離。如樹脂顏色變深,可用稀酸和稀堿溶液洗滌,最后洗至洗出液呈中性,即可重復(fù)使用。2.3檢測方法根據(jù)研究要求,本文靛玉紅含量測定采用HPLC法。HPLC法直接測定復(fù)方瓜子金醇提液中靛玉紅的含量另文發(fā)表。2.4吸附量的測量2.4.1生物活性樹脂對藍(lán)玉紅的吸附動力學(xué)取經(jīng)過60%乙醇處理的12-1樹脂10mL加入60%乙醇復(fù)方瓜子金提取液樣品100mL,攪拌,每隔1小時取樣品1mL,共取10個樣。用HPLC法按上述色譜條件測定取樣的峰面積,根據(jù)靛玉紅的線性關(guān)系計算得到取樣的濃度。另取10mL同樣的12-1樹脂烘干至恒重稱重得3.14g,Qt=(Co-Ct)×V/W,式中:Qt為吸附量(mg/g),Co為起始濃度(mg/ml),Ct為剩余濃度(mg/ml),V為溶液體積(ml),W為樹脂重量(g)。求出吸附量Q。作出吸附樹脂對靛玉紅的吸附動力學(xué)曲線。結(jié)果見表1。2.4.2-1樹脂對不同吸附量的影響根據(jù)上面測定的樣品中靛玉紅的濃度計算出吸附量Q。以吸附量Q對時間T作圖,得到12-1樹脂對靛玉紅的吸附動力學(xué)曲線,見圖1。從12-1樹脂對靛玉紅的吸附動力學(xué)曲線可以看出,12-1樹脂在3小時已趨飽和。2.560%乙醇提取物溶液對12-1樹的滲透試驗2.5.1試驗條件柱高38cm,直徑1.5cm,流速2.1ml/min。2.5.2不同濃度的加強色譜測定用經(jīng)過60%乙醇處理的12-1樹脂裝入柱中,柱高38cm,然后用60%的復(fù)方瓜子金醇提液過柱,每上樣50mL取樣一次,按上述色譜方法用HPLC法測定濃度。得到靛玉紅的穿透曲線,利用穿透曲線圖可計算出上樣量。穿透曲線如圖2。結(jié)果見表2。2.5.3吸附率根據(jù)靛玉紅對大孔樹脂的穿透曲線可計算,在上樣量為300mL時的吸附率為95.7%。2.5.4樣本量根據(jù)靛玉紅的穿透曲線計算可得到上樣量為5個柱體積(335mL)為最佳。2.612-1.60%乙醇復(fù)合瓜金提取物的動態(tài)吸附試驗2.6.1洗脫溶劑的測定取5個柱體積的60%乙醇復(fù)方瓜子金的提取液以2.1mL/min的流速上柱,過完柱后,用1個柱體積的60%乙醇過柱清洗。然后用90%乙醇洗脫得洗脫液,測量洗脫液的體積V。取少量洗脫液經(jīng)處理,以高效液相法測定其靛玉紅的濃度C。另取少量60%乙醇復(fù)方瓜子金的提取液用高效液相法測定其濃度為A。把洗脫液置水浴把乙醇蒸發(fā)后,在105℃的烘箱中烘2小時得固體,稱固體重量G。另取同樣5個柱體積的60%乙醇復(fù)方瓜子金的提取液水浴蒸干乙醇后,在105℃的烘箱中烘2小時得固體,固體稱重W。2.6.2復(fù)方瓜子金中錫玉紅對12-1樹脂的洗脫曲線上樣后,用90%的乙醇洗脫,每洗脫一個柱體積(67mL)時收集一個樣品,按上述色譜條件用高效液相色譜法測定各樣品的濃度,以濃度對洗脫量作圖,得到用90%乙醇洗脫,復(fù)方瓜子金中靛玉紅對12-1樹脂的洗脫曲線。結(jié)果見表3。根據(jù)上表作出90%乙醇對靛玉紅的洗脫曲線圖。如圖3。2.6.3洗脫率的測量根據(jù)靛玉紅的洗脫曲線圖計算可得出在洗脫了5個柱體積(335mL)時靛玉紅對90%的乙醇的解吸率。計算解吸率為89.01%。2.6.4黨建品牌的測定按上述色譜條件測定洗脫液中靛玉紅的峰面積,根據(jù)靛玉紅的線性關(guān)系得到洗脫液中靛玉紅的濃度為0.00865mg/mL。洗脫液體積為685mL。得到靛玉紅的重量為5.924mg。把洗脫液水浴蒸干乙醇后,放烘箱中在105度下干燥2小時得固體0.5g。所以每克重洗脫液固體中含靛玉紅的重量為11.849mg。取335mL的60%乙醇的復(fù)方瓜子金提取液水浴蒸干乙醇后,在烘箱中105度下干燥2小時得固體重量4.0g,原樣品按上述色譜條件測定靛玉紅的峰面積,據(jù)靛玉紅的線性關(guān)系得到原樣品中靛玉紅的濃度為0.0154mg/mL。所以335mL原樣品中靛玉紅重量為5.14854mg。所以每克原樣品固體中含靛玉紅的量為1.287mg。所以純化倍數(shù):11.849/1.287=9.2。2.6.5得固體得率根據(jù)上面純化倍數(shù)數(shù)據(jù),洗脫液固體重量為0.5g,原樣品固體重量為4.0g,所以得固體得率:(0.5÷4.0)×100%=12.5%。3大孔吸附樹脂中藥復(fù)方制劑成分復(fù)雜,有效成分的提取純化較難。靛玉紅是復(fù)方瓜子金中的主要成分之一。本