乳酸菌檢驗(yàn)原始記錄

乳酸菌檢驗(yàn)原始記錄（平板計數(shù)法）檢驗(yàn)單位檢驗(yàn)員檢驗(yàn)日期至環(huán)境條件溫度℃，相對濕度%檢驗(yàn)依據(jù)GB4789.35-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)乳酸菌檢驗(yàn)》樣品名稱產(chǎn)品批號儀器設(shè)備及耗材：電子天平、潔凈工作臺、電熱恒溫培養(yǎng)箱、立式壓力蒸汽滅菌器、水浴鍋、移液器、厭氧罐培養(yǎng)基及試劑：MC培養(yǎng)基：ml配制日期：MRS培養(yǎng)基：ml配制日期：莫匹羅星鋰鹽和半胱氨酸鹽酸鹽改良MRS培養(yǎng)基：ml配制日期：生理鹽水：ml配制日期：實(shí)驗(yàn)過程：1.樣品制備1.2制備樣品稀釋液根據(jù)樣品狀態(tài)，無菌操作，稱取25g/吸取25mL樣品，加入到225mL無菌生理鹽水中均質(zhì)（或混勻），制成1:10樣品勻液。用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1：10樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1：100的樣品勻液。按上面步驟操作，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1ml無菌吸管或吸頭。2.乳酸菌計數(shù)乳酸菌總數(shù)計數(shù)培養(yǎng)條件的選擇及結(jié)果說明樣品中所包括乳酸菌菌屬培養(yǎng)條件的選擇及結(jié)果說明僅包括雙歧桿菌屬按GB4789.34的規(guī)定執(zhí)行僅包括乳桿菌屬按照2.3操作。結(jié)果即為乳桿菌屬總數(shù)僅包括嗜熱鏈球菌按照2.2操作。結(jié)果即為嗜熱鏈球菌屬總數(shù)同時包括雙歧桿菌屬和乳桿菌屬1按照2.3操作。結(jié)果即為乳酸菌總數(shù)2如需單獨(dú)計數(shù)雙歧桿菌屬數(shù)目，按照操作同時包括雙歧桿菌屬和嗜熱鏈球菌1按照2.1和2.2操作，二者結(jié)果之和即為乳酸菌總數(shù)2如需單獨(dú)計數(shù)雙歧桿菌屬數(shù)目，按照2.1操作同時包括乳桿菌屬和嗜熱鏈球菌1按照2.1和2.3操作。二者結(jié)果之和即為乳酸菌總數(shù)22.2結(jié)果為嗜熱鏈球菌總數(shù)32.3結(jié)果為乳桿菌屬總數(shù)同時包括雙歧桿菌屬、乳桿菌屬和嗜熱鏈球菌1按照2.2和2.3操作。二者結(jié)果之和即為乳酸菌總數(shù)2如需單獨(dú)計數(shù)雙歧桿菌屬數(shù)目，按照2.1操作2.1雙歧桿菌計數(shù)根據(jù)對待檢樣品雙歧桿菌含量的估計，選擇2個—3個連續(xù)的適宜稀釋度，每個稀釋度吸取1mL樣品勻液于滅菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。稀釋液移入平皿后，將冷卻至48℃的莫匹羅星鋰鹽和半胱氨酸鹽酸鹽改良的MRS培養(yǎng)基傾注入平皿約15mL，轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。36℃±1℃厭氧培養(yǎng)72h±2h（//時~//時），培養(yǎng)后計數(shù)平板上的所有菌落數(shù)。從樣品稀釋到平板傾注要求在15min內(nèi)完成。2.2嗜熱鏈球菌計數(shù)根據(jù)待檢樣品嗜熱鏈球菌活菌數(shù)的估計，選擇2個—3個連續(xù)的適宜稀釋度，每個稀釋度吸取1mL樣品勻液于滅菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。稀釋液移入平皿后，將冷卻至48℃的MC培養(yǎng)基傾注入平皿約15mL，轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。36℃±1℃需氧培養(yǎng)72h士2h，（//時~//時）培養(yǎng)后計數(shù)。嗜熱鏈球菌在MC瓊脂平板上的菌落特征為：菌落中等偏小，邊緣整齊光滑的紅色菌落，直徑2mm±1mm，菌落背面為粉紅色。從樣品稀釋到平板傾注要求在15min內(nèi)完成。2.3乳桿菌計數(shù)根據(jù)待檢樣品活菌總數(shù)的估計，選擇2個—3個連續(xù)的適宜稀釋度，每個稀釋度吸取1mL樣品勻液于滅菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。稀釋液移入平皿后，將冷卻至48℃的MRS瓊脂培養(yǎng)基傾注入平皿約15mL，轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。36℃±1℃厭氧培養(yǎng)72h±2h（//時~//時）。從樣品稀釋到平板傾注要求在15min內(nèi)完成。樣品序號雙歧桿菌各稀釋度平板上的菌落數(shù)結(jié)果CFU/mL¨CFU/g¨第一稀釋度：第二稀釋度：第三稀釋度：樣品1樣品2樣品3樣品4樣品5樣品序號嗜熱鏈球菌各稀釋度平板上的菌落數(shù)結(jié)果CFU/mL¨CFU/g¨第一稀釋度：第二稀釋度：第三稀釋度：樣品1樣品2樣品3樣品4樣品5樣品序號乳桿菌各稀釋度平板上的菌落數(shù)結(jié)果CFU/mL¨CFU/g¨第一稀釋度：第二稀釋度：第三稀釋度：樣品1樣品2樣品3樣品4樣品53菌落計數(shù)3.1選取菌落數(shù)在30CFU—300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。3.2其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數(shù)。3.3當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。4結(jié)果表述若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g(mL)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。2.若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按式(1)計算。式中:N——樣品中菌落數(shù)；∑C——平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；n1——第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；n2——第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個數(shù);d——稀釋因子（第一稀釋度）。3.若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU，則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計數(shù)，其他平板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。4.若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。5.若所有稀釋度(包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算。6.若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU~300CFU之間，其中一部分小于30CFU或大于300CFU時，則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。計算過程：方法乳酸菌總數(shù)結(jié)果樣品1樣品2樣品3樣品4樣品5雙歧桿菌嗜熱鏈球菌乳桿菌總和報告1.菌落總數(shù)小于100CFU時，按“四舍五入”原則修約，