細胞器分級分離與鑒定_第1頁
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文檔簡介

一實驗原理細胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)的比重和大小等都不相同，在同一離心場內(nèi)的沉降速度也不相同，根據(jù)這一原理，常用不同介質(zhì)和不同轉(zhuǎn)速的離心，將細胞各種組分分級分離出來(cellfractionation)。組織細胞勻漿分級分離分析細胞器（細胞核和線粒體）的分級分離和鑒定差速離心法differentialcentrifugation原理：由低速到高速逐漸沉降將不同大小的顆粒分離。勻漿離心1000G20分鐘細胞核線粒體等離心15000G120分鐘微粒體離心0.26%脫氧膽酸鈉15000G20分鐘核糖體等離心20分鐘10000G差速離心法1取兔肝，用生理鹽水反復(fù)洗滌2稱取濕重約1g的兔肝置培養(yǎng)皿中，量取8ml預(yù)冷的勻漿緩沖液（蔗糖-氯化鈣溶液）加入，盡量剪碎肝組織3將剪碎的肝組織倒入勻漿器勻漿（勻漿器下段浸入盛有冰塊的小燒杯中保持低溫），勻漿徹底后，8層紗布過濾（先用少量勻漿緩沖液潤濕紗布），濾液轉(zhuǎn)移至玻璃離心管中。4平衡、離心，2500rpm,10min（上離心機前注意平衡每對離心管），將上清移入另一玻璃離心管中，沉淀用殘余液體吹打均勻涂片①，做好標記。5將上清按4步驟重新離心一次。棄沉淀，將上清移入用于高速離心的塑料管。6離心，13500rpm,10min（離心前注意平衡每對離心管），棄上清，留沉淀,用殘余液體吹打均勻涂片②7直接在剩余沉淀中加入0.5ml詹納斯綠染液染10min（吹打均勻），滴一滴在載玻片上，蓋上蓋玻片（吸水紙吸去多余染液），用油鏡觀察8在涂片①、②滴加甲苯胺蘭染液染10min，沖去染液，在高倍鏡下觀察二實驗方法三.實驗作業(yè)：1.你

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