WatersevoTQS液相色譜質(zhì)譜操作

編寫日期李秀琴2009.1審核人編寫日期李秀琴2009.1審核人批準(zhǔn)人文件類型文件類型爭論所作業(yè)指導(dǎo)書化學(xué)所文件編號NIM-ZY-HX-0000-YJ-11716頁TQ-S液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀(三重串連四級桿質(zhì)譜)操作指南適用范圍：WatersXevoTQ-S液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀(三重串連四級桿質(zhì)譜)。儀器設(shè)備的主要技術(shù)指標(biāo)：梯度性能：保存時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)偏差〔SD〕≤0.047min。ESI正離子靈敏度和周密度：測試樣品：磺胺二甲基噠嗪(Sulfadimethoxine)，濃度：0.1pg/μl準(zhǔn)偏差〔%RSD〕≤3.0%；保存時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)偏差〔SD〕≤0.047min%RSD：2.5；保存時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)偏差〔SD：0.00min，均符合指標(biāo)要求。ESI負(fù)離子靈敏度和周密度：(chloramphenicol)，濃度：0.05pg/μl偏差〔%RSD〕≤3.0%；保存時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)偏差〔SD〕≤0.047min測試結(jié)果：信噪比〔S/N〕:520psi1500；峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差%RSD：2.8；保存時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)偏差〔SD：0.00min，均符合指標(biāo)要求。系統(tǒng)周密度〔TUV/PD峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差%RSD%；峰高相對標(biāo)準(zhǔn)偏差〔%RSD〕≤0.9%。NanoFlow正離子靈敏度指標(biāo)要求：峰強(qiáng)〔m/z=785.8〕≥1×107，Glu-FibrinopeptideB，濃度：100fmol/μl測試結(jié)果：峰強(qiáng)度〔m/z=785.8：1.48107；符合指標(biāo)要求。TRIZAICMS說明：測試樣品：ADHT19,PHOT33,ENLT4,BSAT59,ENLT43,ADHT17,BSA文件類型文件類型爭論所作業(yè)指導(dǎo)書化學(xué)所文件編號NIM-ZY-HX-0000-YJ-11726頁T10,PHOT88≤0.25%測試結(jié)果：ADHT190.02%(23.77min)；PHOT33：標(biāo)準(zhǔn)偏差0.03%(24.81min)系統(tǒng)性能測試一維保存時(shí)間重復(fù)性(PDA)指標(biāo)：保存時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD):≤1.0s；一維峰面積重復(fù)性(PDA)指標(biāo)：峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(%RSD):≤0.5%；一維峰高重復(fù)性(PDA)指標(biāo)：峰高相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(%RSD):≤0.9%；(PDA)指標(biāo)：保存時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD):≤1.0s；二維峰面積重復(fù)性(PDA)指標(biāo)：峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(%RSD):≤0.5%；二維峰高重復(fù)性(PDA)(%RSD):≤0.9%；全部檢測方式的回收率指標(biāo)：≥90.0%儀器設(shè)備的使用環(huán)境要求：壓電源，防止意外停電。25℃，保持恒溫。3)相對濕度：50%-70%操作程序：開機(jī)UPLC各電源，各部件通過自檢后，雙擊工作站圖標(biāo)進(jìn)入Masslynx工作站。選擇Instrument＞MSTune進(jìn)入調(diào)諧界面。從調(diào)諧界面選擇Vacuun＞文件類型文件類型爭論所作業(yè)指導(dǎo)書化學(xué)所文件編號NIM-ZY-HX-0000-YJ-11736頁pump，翻開真空泵，開頭抽真空。機(jī)械泵和渦輪分子泵開頭工作。質(zhì)譜上的真空燈開頭閃耀，當(dāng)系統(tǒng)到達(dá)真空狀態(tài)，燈變?yōu)榫G色，不再閃爍，同時(shí)觀看調(diào)諧界面Diagnostics→TurboSpeed泵轉(zhuǎn)速到達(dá)100%即可，到達(dá)試驗(yàn)狀態(tài)大約要抽真空4小時(shí)〔留意：真空規(guī)，測量工具，無特別狀況通常無需翻開，尤其在剛開頭抽真空時(shí)不要翻開?！?0-100psi。氬氣：0.05Mpa，不超過0.1Mpa〔試驗(yàn)前確認(rèn)氬氣瓶壓力，低于1Mpa時(shí)需更換氬氣?！愁A(yù)備UPLC系統(tǒng)0.22μm2mM-5mM之間，不要超過10mM〔注：假設(shè)流淌相含有緩沖鹽，用完需使用大比為0.01%-0.1%，進(jìn)樣器高壓密封墊要求PH≥2，不能使用三氟乙酸、七氟丁酸等離子對試劑〕。有機(jī)相要使用原裝進(jìn)口的色譜純?！?〕SW+Purge〔弱洗：純水或者與流淌相梯度初始比例一樣用于清洗泵頭和密封清洗；相初始梯度比例的溶劑來溶解，并用0.22μm的膜過濾。初始化UPLC泵：在Masslynx主頁面上點(diǎn)擊MSConsole，進(jìn)入系統(tǒng)掌握界面，點(diǎn)擊左邊QuaternarySolventManager選擇CONTROL＞PrimeA/B/C/Dsolvent，選擇A/B/C/D輸入1min，假設(shè)更換了流淌相則輸入3min，按start。初始化UPLC自動(dòng)進(jìn)樣器：UPLC掌握臺(tái)上選擇SampleManager，選擇Control＞PrimesyringSamplesyringeandNumberofcycles一般選1，但在更換洗針溶液后選3。完成后，UPLC自動(dòng)進(jìn)樣器預(yù)備好。UPLC預(yù)備好。建立一個(gè)ProjectProject下進(jìn)展試驗(yàn)，此步可以不做。文件類型文件類型爭論所作業(yè)指導(dǎo)書化學(xué)所文件編號NIM-ZY-HX-0000-YJ-11746頁MasslynxFile＞ProjectWizardYes，輸入Createusingexistingprojectastemplate.Browse選擇project的模板。預(yù)備質(zhì)譜Project下進(jìn)展試驗(yàn)，此步可以不做?！布t色表示高壓已關(guān)，綠色表示高壓已開〔肯定要翻開氮?dú)夂透邏翰拍荛_流淌相，關(guān)閉流淌相后才能關(guān)高壓和氮?dú)狻S+Source.輸入以下各參數(shù):Capillary(kV):3；Cone(V):30；DesolvationTemp℃550；Desolvation(L/hr):800；Cone(L/Hr):50；以下參數(shù)最HMResolution1:15；IonEnergy1:0.5；LMResolution2:3；HMResolution2:15；IonEnergy2:0.5；Collision:2。ESI調(diào)諧調(diào)出目標(biāo)化合物的最正確質(zhì)譜參數(shù)。敏度調(diào)整樣品濃度。0.2ml/min1:1。點(diǎn)擊Tune依據(jù)靈敏度可適當(dāng)調(diào)整。設(shè)置FlowState模式〔Infusion:直接進(jìn)樣；Combined:液相和樣品混合進(jìn)樣；LC:Waste:廢液。選擇XevoTQ-SMSDetector下面的IntelliStart：SampleTuneand合物的質(zhì)譜參數(shù)。建立質(zhì)譜的MRM方法。MRM，按調(diào)諧結(jié)果輸入以下參數(shù)：離子模式、化合物名稱、母離子質(zhì)量文件類型文件類型爭論所作業(yè)指導(dǎo)書化學(xué)所文件編號NIM-ZY-HX-0000-YJ-11756頁數(shù)、子離子質(zhì)量數(shù)、離子駐留時(shí)間、錐孔電壓、碰撞能量和MRM運(yùn)行時(shí)間等。UPLC方法。MethodUPLC方法編輯界面。逐一編輯泵的方法、UPLC的方法命名保存。建立樣品運(yùn)行序列表，運(yùn)行采集數(shù)據(jù)。方法、液相方法、瓶號、進(jìn)樣體積等參數(shù)，最終把編輯好的序列表命名保存。處理數(shù)據(jù)。關(guān)機(jī)Standby狀態(tài)下即可。但假設(shè)長時(shí)間不用，或是對儀器進(jìn)展清洗和修理時(shí)需要關(guān)機(jī)。從質(zhì)譜移開到廢液瓶。點(diǎn)擊MSTune進(jìn)入調(diào)諧窗口，點(diǎn)擊Standby，關(guān)閉高壓，讓MS進(jìn)入待機(jī)狀態(tài)時(shí)，指示燈會(huì)由綠色變成紅色。等脫溶劑氣溫度降到常溫，關(guān)閉氮?dú)?。Option＞Vent，這時(shí)質(zhì)譜開頭泄真空，待機(jī)械泵停頓運(yùn)行，同時(shí)觀看調(diào)諧界面Diagnostics→TurboSpeed泵轉(zhuǎn)速為0時(shí)即可關(guān)閉質(zhì)譜電源。儀器根本維護(hù)與使用留意事項(xiàng)：儀器室要保持干凈、干凈、無塵；配套設(shè)施布局合理。開高壓之前肯定要先開氮?dú)?，關(guān)氮?dú)庵翱隙ㄒ汝P(guān)高壓。前配，并不得超過兩天。樣品必需使用0.22μm的濾膜過濾。ESI離子化與溶劑親熱相關(guān)，在使用某些溶劑和添加物需要留意以下幾個(gè)文件類型文件類型爭論所作業(yè)指導(dǎo)書化學(xué)所文件編號NIM-ZY-HX-0000-YJ-11766頁在正離子ESI條件下的離子化，也有可能會(huì)增加某些堿性化合物在負(fù)離子ESI強(qiáng)酸強(qiáng)堿、不揮發(fā)性酸及相應(yīng)的鹽〔如磷酸鹽、硼酸鹽、檸檬酸鹽等、外表活性劑、離子對試劑。定期清洗樣品錐孔：關(guān)閉隔斷閥，取下樣品錐孔，先用甲醇：水：甲酸〔45:45:10〕的溶液超聲清洗20min，然后分別用超純水和甲醇各溶液超聲清洗10IonBlock、二級錐孔和RFlens。試驗(yàn)完畢要清洗進(jìn)樣針