植物組織培養(yǎng)實驗

植物組織培養(yǎng)實驗室基本設備：超凈工作臺；培養(yǎng)室、；洗滌、消毒室，臥式高壓消毒鍋；溫室（培養(yǎng)大棚）；常用儀器：1. 蒸餾水器（學習操作），2. 手提式高壓消毒鍋、臥式高壓消毒鍋（學習使用、操作），3.天平：⑴藥物天平（工業(yè)天平）、粗天平、（精密度1/10）⑵ 分析天平（精密度1/10000），4.超凈工作臺（學習、使用、操作），5.電熱干燥箱（烘箱），6. 恒溫光照培養(yǎng)箱（學習、操作），7.電冰箱，8.顯微鏡和解剖鏡：①手提式解剖鏡（學習、使用、操作）②立體解剖鏡③普通顯微鏡，9. 旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)機，10.離心機（學習、使用、操作），11.酸度測定儀：⑴精密PH4－7試紙；⑵筆型 袖珍酸度計。必要的器皿：（一）玻璃器皿：1. 培養(yǎng)器皿：①試管② 三角燒瓶（錐形瓶）③圓形高形培養(yǎng)瓶（罐頭瓶）④培養(yǎng)皿⑤扁身培養(yǎng)瓶⑥L型和T型管⑦ 凹面載玻片，2.盛裝器皿：①試劑瓶②燒杯，3.計量器皿①量筒②容量瓶③吸管，4.其它器皿滴瓶、稱量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等實驗室常用器皿。（二）金屬器械：1.鑷子類：①20－25cm長型鑷子（接種或轉(zhuǎn)移愈傷組織）②尖端彎曲“槍型”鑷子（鑷取較小的植物組織）③尖頭鐘表鑷子和鴨嘴鑷子（剝離表皮用）④尖端為小鏟狀鑷子（挖取帶瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)物），2. 解剖刀和刀類：①眼科用刀種牛痘疫苗的菱形刀（切割柔軟組織中小細胞團）②解剖刀（手術(shù)刀）③雙面刀片焊接在玻棒上（切取莖尖用）④鋒利小刀、大刀和小鐵鍬，3.剪刀類：① 解剖剪 ② 眉剪 ③ 眼科剪 ④ 18－25cm彎頭剪 ⑤ 俢枝剪，4.接種針。幾種常用藥劑的配制：（一）用95%嘗試酒精配比不同濃度的酒精的配制。學習配制70%和75%酒精。（二）消毒劑:1.20%次氯酸鈉溶液：稱取20g次氯酸鈉用少許水溶解，100ml水定容。2.0.1%升汞（HgCl2）溶液：稱取0.1gHgCl2少許水溶解，100ml水定容。（三）洗滌劑:1.2HCl酒精：95%酒精100ml加入2mlHCl，2.硫酸－重鉻酸鉀洗液：取10g重鉻酸鉀加入蒸餾水90ml，加熱溶解冷卻后，逐漸加入濃硫酸175ml，放入棕色玻璃瓶備用，（注意：切記不可將盛過灑精，甲醛等原劑的藥品玻璃器皿直接泡入洗液在，因為重鉻酸鉀是一種強的氧化劑，一旦被還原氧化，洗液變綠，失去洗滌作用）。這些器皿必須用自來水沖洗干凈并晾干再浸入洗液。（四）1摩爾濃度（mg/L）NaOH和1摩爾濃度（mg/L）HCl配制。摩爾濃度是指用1升（1000ml）溶液中所含溶質(zhì)的分子量數(shù)來表示的溶液的濃度。用M表示。1. NaOH摩爾濃度（M）NaOH摩爾質(zhì)量=分子克數(shù)=40g1MNaOH是指1000ml溶液中含有40克摩爾質(zhì)量的NaOH，現(xiàn)要配制100ml（0×0.1＝4g）稱取NaOH4g，用少量水解，定容至100ml.2. HCl的摩爾濃度具體配制酸的mol濃度時，應考慮原濃酸的比重mol濃度。要求配制的ol濃度×需配制的體積×原酸分子量＝————————————————————原酸的百分濃度×原酸的比重×100配制1.0M HCl 100ml，量取38%，比重為1.19的HCl8.06ml加蒸餾水，定容至100ml。MS培養(yǎng)基母液配制（單位：毫克 mg）:母液成 分規(guī)定量濃縮倍數(shù)稱取量母液體積配制1升培養(yǎng)基吸取量定容編號種類I大量元素319001019000100010043165010165004·72O37010370024170101700l2·22O440104400II微量元素4·42O22.31002230100104·72O8.6100860336.2100620KI0.8310083a2Mo4·72O0.25100254.5240.0251002.52.62O鐵鹽a2-EDA37.310037301000104.42OIII有機物甘氨酸2.05010050010鹽酸吡哆醇0.55025鹽酸硫銨素0.1505煙酸0.55025肌酸100505000注意：1．大量元素按照使用時濃縮10倍的數(shù)值稱取，分別將各種化合物稱量后，除CaCl2?2H2O單獨配制外，其余化合物混合在500ml燒杯中加適量蒸餾水溶解，用玻璃棒攪拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸餾水定容至刻度，置小口瓶中保存，貼上標簽注明化合物名稱（或編號），濃縮倍數(shù)，配制日期和配制者姓名，CaCl2?2H2O配制同上置于另一小口瓶中。2．微量元素母液的配制按要求濃縮100倍的數(shù)值稱取，分別將各種化合物稱量除鐵鹽（FeSO4?7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作為一組單獨配制外，其余化合物可混合置于燒杯內(nèi)加少量蒸餾水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，貼上標簽。3．鐵鹽配制將FeSO4?7H2O和Na2-EDTA.2H2O分別溶于450ml蒸餾水中，加熱，不斷攪拌，溶解后，兩液混合，調(diào)pH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，貼上標簽。4．有機物母液配制，按母液要求濃縮100倍，除蔗糖按3%單獨臨時稱量外，其余分別稱量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，貼上標簽。5．母液最好在2~4℃的冰箱中貯存，特別是有機類物質(zhì)，貯存時間不宜過長，無機鹽母液最好在一個月內(nèi)用完，如發(fā)現(xiàn)有霉菌和沉淀產(chǎn)生，就不能再使用。6．制備母液和營養(yǎng)培養(yǎng)基時，所用蒸餾水或無離子水必須符合標準要求，化學藥品必須是高純度的（分析純）。7．稱量藥物采用高靈敏度的天平，每種藥品專用一藥匙。五.作業(yè)（1）將本次實驗內(nèi)容整理成實驗報告。（2）能不能把所有的母液置于一個瓶里，當作一種母液用于配制？為什么？（3）在配制大量元素母液時，CaCl2為什么要單獨配制？（4）已知大量元素的母液濃度是原配方濃度的10倍，在配制1000mlMS培養(yǎng)基時應取多少毫升母液？（5）MS培養(yǎng)基中需加入0.5mg/L的6-BA，當母液濃度為0.1mg/ml時，配制1000ml培養(yǎng)基需要取多少ml6-BA母液？配制培養(yǎng)基:1.瓊脂稱取8g瓊脂，加入300ml蒸餾水，加熱溶解直至完全溶解為止。2.蔗糖3%：稱取30g蔗糖，溶于溶有瓊脂的300ml蒸餾水中。3.各種母液的吸取:（1）用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2?2H2O母液（B）各100ml（2）分別用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），鐵鹽（D）母液各10ml（3）用10ml移液管或吸管吸取有機物（H）10ml（4）用2ml移液管吸取生長素NAA1.5ml；用0.5ml移液管吸取KT0.5ml將上述溶液全部混合于瓊脂與蔗糖溶液中，混合均勻后，加熱至80℃左右，用酸度計或精密pH試紙測定培養(yǎng)基的pH一般要求5.8~6.0，過酸過堿則用1NNaoH和1NHCl調(diào)整。分裝：用一個接有膠管的分裝器趁熱裝培養(yǎng)基，1000ml培養(yǎng)基分裝70支試管，即每支試管15ml左右（一般占試管、三角瓶容量1/4~1/3左右）注：培養(yǎng)基勿碰試管壁。包裝：分裝好的試管用棉塞塞上，包上包裝紙，每5~7支試管捆成一扎，標明培養(yǎng)基代號即可進行滅菌。①MS+2g/L2，4-D0.%瓊脂（PH5.8；②MS+05g/L24-D+5g/L6-B0.8%脂PH5.8；③MS+05g/L24-D+0g/L6-B0.8%脂PH5.8；④MS+2g/L24-+0g/L6-BA+.8%瓊脂（5.8；⑤MS+2g/L2，4-D1.g/L6-B+08%瓊脂（PH5.8）幼葉培養(yǎng):方法步驟1.接種前半小時，可用75%酒精或新潔爾滅噴灑，地板用濕拖把拖刷。超凈工作臺在接種前用95%酒精揩抹工作臺面和有關用具，并先開機鼓風15分鐘后才能使用。2.外植體的選擇、分離：1．選擇無病害的植物葉片（可選擇不同種植物葉片）2．用單面刀片或剪刀，解剖刀把葉片從植株上剝離下來，剪成小段置于燒杯中。3.外植體的滅菌:超凈工作臺上將70%酒精倒入裝有葉片的燒杯內(nèi)消毒30s，然后將10%次氯酸鈉溶液倒入燒杯內(nèi)滅菌10分鐘，用無菌水將葉片沖洗三至四次。4.外植體的接種與培養(yǎng):用經(jīng)過滅菌的剪刀將葉片剪成0.5-1cm2大小的小塊置于經(jīng)過滅菌的培養(yǎng)皿中，打開培養(yǎng)瓶蓋子（或試管塞子）用經(jīng)過滅菌的鑷子將外植體置于培養(yǎng)容器內(nèi)，讓外植體與培養(yǎng)基緊密接觸，然后蓋上蓋子并擰緊(或塞上塞子)寫上接種日期和外植體名稱即轉(zhuǎn)入培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，室內(nèi)溫度25~30℃，光強為1000~2000LUX,每天光照約14小時。約一周后觀察愈傷誘導情況。種子培養(yǎng):材料、儀器與試劑:1、光照培養(yǎng)箱、超凈工作臺、2.三角瓶、培養(yǎng)瓶、鑷子、封口塑料、皮筋等3.1/2MS或MS固體培養(yǎng)基、70%酒精、15%的84消毒液、0.1％的Tween、無菌水等。方法步驟：1.選取飽滿完好的植物種子；以下步驟均在超凈工作臺上進行。2.將選好的植物種子放入100mL的三角瓶中，加入70％的酒精浸泡不超過1min；3.瀝去酒精后，加入15％的84消毒液＋0.1％Tween消毒10分鐘（因品種而異，一般在8-15min）；4.瀝去消毒液后，用無菌水沖洗3~4次。5.瀝干水份，將種子均勻植入1/2MS固體培養(yǎng)基中，24℃，光強1500lx，光照16h/d。莖段培養(yǎng)：材料、儀器與試劑1.材料：菊花嫩枝或月季嫩枝2.儀器：超凈工作臺、滅菌鍋、顯微鏡、剪刀、長鑷子、燒杯（500ml）、培養(yǎng)皿、移液管等3.試劑：配制好的MS培養(yǎng)基各種母液、1mol/L的NaOH、1mol/LHCL、0.1%的升汞。①MS+0.2mg/LNAA+0.8%瓊脂（PH5.8）；②MS+0.2mg/LNAA+0.25mg/L6-BA+0.8%瓊脂（PH5.8）；③MS+0.2mg/LNAA+0.5mg/L6-BA+0.8%瓊脂（PH5.8）；④MS+0.2mg/LNAA+1mg/L6-BA+0.8%瓊脂（PH5.8）；⑤MS+0.2mg/LNAA+1.5mg/L6-BA+0.8%瓊脂（PH5.8）方法步驟1.材料的選擇；選用的枝條要求表面光滑、無病蟲害。2.培養(yǎng)步驟：（1）材料的滅菌：選取長約10厘米的菊花嫩枝或月季嫩枝于0.1%的升汞溶液中表面消毒15分鐘，然后用無菌水沖洗3次。（2）用剪刀將滅菌后的枝條剪成1-1.5厘米長、帶一個芽的小段。打開培養(yǎng)容器蓋子，將莖段按其自然極性方向垂直插入培養(yǎng)基，蓋好培養(yǎng)容器蓋子，置于超凈臺上適當位置。對接種用具、超凈臺面、操作者手等進行適當滅菌處理，繼續(xù)接種。如此操作，直至完成。（3）培養(yǎng)條件：培養(yǎng)物置于25。C左右的培養(yǎng)室中，每天光照12小時，光照度為850-1200lx。根的離體培養(yǎng)：材料、儀器與試劑1.材料：大而新鮮的胡蘿卜2.儀器：超凈工作臺、滅菌鍋、顯微鏡、解剖刀、刮皮刀、不銹鋼打孔器、長鑷子、燒杯（500ml）、培養(yǎng)皿、移液管等3.試劑：培養(yǎng)基（MS+10mg/L2，4-D+2mg/L6-BA）、70%乙醇、2%的次氯酸鈉溶液四、方法步驟1.將胡蘿卜用自來水沖洗干凈，用刮皮刀除去表皮1-2mm，橫切成大約10mm厚的切片。以下步驟均在無菌條件下進行。2.胡蘿卜片經(jīng)70%乙醇處理30秒鐘后，用無菌水沖洗一遍，再用、2%的次氯酸鈉溶液浸泡10分鐘，無菌水沖洗3~4次。3.將胡蘿卜片放入培養(yǎng)皿中，一手用鑷子固定胡蘿卜片，一手用打孔器垂直打孔，每個小孔打在靠近維管形成層的區(qū)域，務必打穿組織。然后從組織片中抽出打孔器，將胡蘿卜組織片收集在裝有無菌水的培養(yǎng)皿。重復打孔步驟，直至收集到足夠數(shù)量的組織圓片。4.用鑷子取出組織圓片，放入培養(yǎng)皿中，用刀片將組織圓片切成2mm長的小塊，放入裝有無菌水的培養(yǎng)皿中。在整個操作過程中鑷子和解剖刀要多次火焰消毒，冷卻后再使用。5、將胡蘿卜組織小塊放到滅過菌的濾紙上，吸干水分后接種到培養(yǎng)基表面。注意接種時培養(yǎng)瓶要有一定傾斜度，接種過程中鑷子不要直接在培養(yǎng)基上方完成，以減少污染機會。6、將培養(yǎng)物一部分置于25。C溫箱中暗培養(yǎng)，另一部分到光照培養(yǎng)室中進行培養(yǎng)，以比較光照和暗培養(yǎng)對愈傷組織誘導的反映。煙草愈傷組織，胚狀體繼代培養(yǎng)：煙草嫩葉接種在誘導培養(yǎng)基上一周后便逐漸形成愈傷組織，為保持愈傷組織的旺盛生長，一般約3~4周將愈傷組織進行繼代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)控制在10代左右方法：1．在無菌條件下，用無菌的鑷子（或接種針）從培養(yǎng)瓶中取出愈傷組織，將它們放在無菌的培養(yǎng)皿中。2．用無菌解剖刀把每塊愈傷組織分割成若干小塊（一般不小于5mm×5mm）并把已壞死的區(qū)域棄去。3．用無菌鑷子將小塊愈傷組織放入新鮮的培養(yǎng)基上，每瓶（或管培養(yǎng)基可以放3~5塊，蓋上蓋子）（或塞上塞子）后置于培養(yǎng)室中繼代培養(yǎng)煙草細胞胚狀體的發(fā)生，有2種途徑：一是直接由煙草嫩葉（或芽）的愈傷組織產(chǎn)生，煙草嫩葉離體培養(yǎng)10~15天，可看到蔗葉邊緣愈傷組織上長出松散的、黃白的顆粒的胚性細胞團，并可在原培養(yǎng)基上下經(jīng)轉(zhuǎn)移直接發(fā)育成小植株；二是通過愈傷組織挑選胚狀體細胞團從中篩選胚性細胞無性系，在繼代繁殖培養(yǎng)中產(chǎn)生大量的胚狀體，前者產(chǎn)生胚狀體頻率低，后者產(chǎn)生胚狀體的頻率高。采用固體培養(yǎng)或液體培養(yǎng)培養(yǎng)基：MS+NAA1-4mg/L+KT1.3mg/L+蔗糖3%+瓊脂0.8%（液體不加）PH5.8~6.0都可育出胚性細胞無性系。分化成苗培養(yǎng)：從外植體形成器官或細胞無性系的形態(tài)發(fā)生，有兩種方法，一種是不定芽方式，指細胞或愈傷組織培養(yǎng)物，通過形成不定芽再生成植株這是細胞和組織培養(yǎng)中常見的器官發(fā)生方式，有三個不同生長階段——第一階段，細胞和離休外植體脫分化形成愈傷組織；第二階段，愈傷組織中形成一些分生細胞，繼而形成植株結(jié)構(gòu)；第三階段是器官原基的形成。器官原基是由一個或一小團分生細胞分裂而形成的，這些分生組織塊只有在一定條件下，逐漸能見到構(gòu)成器官的縱軸上表現(xiàn)出單向極性，從而分化出芽和根，另一種是胚狀體方式，指由培養(yǎng)細胞或組織誘導分化出具胚芽和胚根的胚狀體結(jié)構(gòu)（胚狀體）進而發(fā)育成完整植株。影響愈傷組織分化成器官要在一定合適的條件下才能實現(xiàn)，這些條件中，培養(yǎng)的生長調(diào)節(jié)劑種類及濃度和營養(yǎng)成分等具有重要作用，其他如光照、溫度、PH等也有一定關系。試驗證明形成器官的類型受培養(yǎng)中兩種激素的相對濃度的控制，較高濃度的KT（細胞分裂素）則促進芽的形成而抵制根的形成，反之，較高濃度的生長素有利于根的形成而抵制芽的形成，6-BA、ZT(玉米素)和Zip（N-異戊烯氨基嘌呤）等具有與KT相同的作用，而且效力更大，并被廣泛應用，試驗發(fā)現(xiàn)激動素（KT）促進芽的發(fā)生，并非濃度越高越好，而是有一合適的范圍，在有較高濃度的IAA和IBA好，但用IAA和IBA處理，產(chǎn)生的根比較健壯,而用NAA的產(chǎn)生的根較纖細，2，4-D往往對生根不利，特別是在較高的濃度下，KT玉米素（ZT）和BA均能促進芽的形成，其中BA的效果最好，玉米素的作用范圍較窄，通常都采用BA和KT來誘導芽的發(fā)生。誘導愈傷組織形成的生長素水平往往對愈傷組織的器官發(fā)生也有影響，如高濃度2，4-D或其他生長素誘導的愈傷組織，通常結(jié)構(gòu)疏松，器官發(fā)生能力較差，如果在誘導愈傷組織形成時，加入適量細胞分裂素，對其器官發(fā)生的狀況，便會有所改善，近來，在愈傷組織器官發(fā)生中，已開始較多的使用ABA（脫落酸）、GA3（亦霉素），ABA對芽分化有促進作用已得到廣泛的實驗證明，GA3對芽的發(fā)生并未見有直接促進作用的報道，但對芽的生長有良好作用。誘導生根對培養(yǎng)基中無機離子濃度的要求低一些，故常用White二分之一MS培養(yǎng)基，同時有的情況下對某些離子的形式也有不同要求，如對氮的要求，有的植物要求硝態(tài)氮，而有的植物則提供氨態(tài)氮為佳。此外，某些微量元素對器官分化有明顯影響，如Fe對煙草花藥培養(yǎng)對其胚狀體的形成，有良好作用，其它元素如Zn、Mn等均不能代替Fe的作用。培養(yǎng)基中通常有機物有足夠的糖、硫胺素、吡哆醇、煙酸、肌醇、甘氨酸等，可以滿足愈傷組織的生長和分化的要求；此外，還可以加入適量的其他成分，如某些氨基酸，嘌呤和嘧啶等類物質(zhì)，對器官分化有促進作用。糖的種類和濃度對培養(yǎng)組織的增殖及以后的器官分化均有明顯的影響，它不僅是碳源和能源，而且也是培養(yǎng)基的滲透勢調(diào)節(jié)劑，通常在培養(yǎng)基中加2~3%的蔗糖可滿足需要。在培養(yǎng)基中添加一些天然的植物提取液，如椰子汁、麥芽汁、酵母提取物，番茄果汁、荸薺汁、馬鈴薯塊莖提取液，幼嫩玉米汁等對器官分化常有良好效果。其中最常用的是椰子乳汁（CM），這些汁液最主要作用是提供了一些生理活性物質(zhì)，其次是補充了一些未知的微量成分。通常對于組織培養(yǎng)中器官發(fā)生并不需要很強的光照，花藥培養(yǎng)中大量實踐證明了這一點，各種植物的組織培養(yǎng)的器官發(fā)生不需要光，但在組織培養(yǎng)過程中進行分化培養(yǎng)時，通常都是在一定光照下進行的，因為它至少對綠苗的形成、根的發(fā)生、枝的分化和胚狀體的形成有促進作用，特別是芽發(fā)生后，應給予適當光照，但光（尤其是較強的光）對根的發(fā)生以后生長，往往有一定的抵制作用，故通常在生根培養(yǎng)基中添加適量的活性炭，對培養(yǎng)容器的基部蓋以黑紙。光照長度對具有敏感的光周期反應的植物的組織培養(yǎng)物的器官發(fā)生有明顯的影響。溫度一般均用25-28℃恒溫條件，培養(yǎng)室的溫度最好能保持一定的晝夜溫差，白天高，夜晚低，這對器官發(fā)生和生長均有利。在組織培養(yǎng)中，必須及時轉(zhuǎn)移已形成的較幼嫩的生長旺盛的愈傷組織至分化培養(yǎng)基上，可大大提高苗的分化頻率。愈傷組織的繼代次數(shù)對器官分化影響很大，特別是一些禾谷類作物，苗的分化頻率隨愈傷組織的繼代次數(shù)而逐漸下降。培養(yǎng)物的生根培養(yǎng)：植物離休培養(yǎng)物（無菌試管苗）根的發(fā)生都來自不定根，根的形成從形態(tài)上分兩個階段即根原基形成和根原基的伸長和生長，影響植物離體培養(yǎng)生根的因素很多。有離體材料自身的生理生化狀態(tài)，也有外部的條件因素。一般木本植物比草本植物難，成年樹比幼年樹難，喬木比灌木難，外部因素：（1）基本培養(yǎng)基：大多數(shù)使用低濃度的MS培養(yǎng)基，其中使用1/2MS或1/3MS培養(yǎng)基，降低無機鹽濃度有利于生根，加鐵鹽則更好，微量元素中以B、Fe對生根有利，糖的濃度通常采用低濃度一般在1%-3%；（2）植物激素：采用單一種生長素的占51.5%，生長素加激動素占20.1%，愈傷組織分化根時，使用NAA最多濃度為在0.02-o.6mg/L為多，使用IAA+KT的濃度范圍為0.1-4和0.01mg/L而以1-4和0.01-0.02mg/L居多數(shù)，而要胚軸、莖段插枝等材料分化根時使用IBA居首位，濃度為0.2-10mg/L以1mg/L為多，可見生根培養(yǎng)多數(shù)使用生長素，大都以IBA、IAA、NAA單獨用或配合使用或與低濃度KT配合使用，NAA與細胞分裂素配合時摩爾比在20-30：1為好。不定根形成，其中激素起決定性作用，生長素卻能促進生根，一般赤霉素、細胞分裂素、乙烯通常利于生根，如與生長素配合，一般其濃度均低于生長素濃度，脫落酸（ABA）可能有助于生根。近年來為促進試管苗的生根，改變了通常將激素預先添加在培養(yǎng)基中的做法，而是將需生根材料在一定濃度激素中浸泡或培養(yǎng)一定時間，然后轉(zhuǎn)入無激素培養(yǎng)基中培養(yǎng)，能顯著提高生根率，如蘋果新梢預先在IAA溶液中浸泡1小時，這樣比預先加到培養(yǎng)基中效果好。組培苗的移栽馴化：組織培養(yǎng)中培育出來的苗通常稱為組培苗或試管苗。由于試管苗是在無菌、有營養(yǎng)供給、適宜光照和溫度近100％的相對濕度環(huán)境條件下生長的，因此，在生理、形態(tài)等方面都與自然條件生長的正常小苗有著很大的差異。所以必須通過煉苗，例如通過控水、減肥、增光、降溫等措施，使它們逐漸地適應外界環(huán)境，從而使生理、形態(tài)、組織上發(fā)生相應的變化，使之更適合于自然環(huán)境，只有這樣才能保證試管苗順利移栽成功。1．準備工作(1)選擇育苗容器 組培苗移栽馴化一般用穴盤，經(jīng)濟實惠。原苗移栽可選穴格、穴容稍大的，插扦苗可選二者較小的。以節(jié)省空間，降低生產(chǎn)成本。(2)基質(zhì)選配 基質(zhì)選配有其固定原則。基質(zhì)的作用是固定幼苗，吸附營養(yǎng)液、改善根際透氣性。組培苗的移栽一般用土栽培，為提高空間利用率選用穴盤的格小，容納的營養(yǎng)介質(zhì)少，因而對介質(zhì)的要求高。要求基質(zhì)保肥，吸水力強，透氣性好，不易分解，支撐性好。采用泥炭、珍珠巖、蛭石、沙及少量有機質(zhì)、復合肥混合調(diào)配為好。(3)場地、工具及基質(zhì)滅菌、裝盤移栽場地及所有工具必須用滅菌藥水清洗（10％的漂白粉溶液，或800倍的高錳酸鉀液泡10-15min）?；|(zhì)要先充分混勻，用1000倍液百菌清噴霧，攪拌。如果基質(zhì)內(nèi)含土壤，消毒更應嚴格。(4)營養(yǎng)液配制①營養(yǎng)液主要成分。植物生長發(fā)育需要的大量元素有碳、氫、氧、氮、磷、鉀、鈣、鎂、硫。微量元素有鐵、氯、錳、硼、鋅、銅和鉬。②常用的鹽類的來源。配制營養(yǎng)液常用的鹽類是由工廠提供的工業(yè)化合物。微量元素用量少，也可用化學藥品代替。如：氮肥：硝酸鈣、硝酸鉀、磷酸二氫銨、硝酸銨、尿素、氮磷鉀三元復合肥。磷肥：磷酸二氫鉀、硫酸鉀、氯化鉀、氮磷鉀三元復合肥。鈣肥：硝酸鈣、硫酸鈣、過磷酸鈣、石膏2.組培苗移栽(1)自然適應 組