中學生物實驗技能實驗報告-石蠟切片的制作

中學生物實驗技能實驗報告——石蠟切片的制作PAGE3東北師范大學生命科學學院中學生物實驗技能實驗報告名稱：石蠟切片的制作姓名：路路學院：生命科學學院專業(yè)：生物科學（師范）年級：10級學號：1241410044【實驗名稱】石蠟切片的制作【實驗目的】了解石蠟切片的用途，并掌握其制作過程和方法。石蠟切片（paraffinsection），組織學常規(guī)制片技術中最為廣泛應用的方法。石蠟切片不僅用于觀察正常細胞組織的形態(tài)結構，也是病理學和法醫(yī)學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態(tài)變化的主要方法，而且也已相當廣泛地用于其他許多學科領域的研究中。例如在醫(yī)學上，常常用石蠟切片做病例分析和診斷?！緦嶒灢襟E及原理】石蠟切片法包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標本需要數(shù)日，但標本可以長期保存使用，為永久性顯微玻片標本。以下即為石蠟標本制作的流程圖：固定取材固定取材固定即是用適當?shù)幕瘜W藥液浸漬切成小塊的新鮮材料，使其迅速凝固或沉淀細胞核組織中的物質(zhì)成分、終止細胞的一切代謝過程，防止細胞自溶或組織變化，盡可能保持其活體時的結構。固定能使組織硬化，有利于切片的進行，而且有媒浸作用，有助于組織著色。固定液可以分為單一固定液以及混合固定液。前者有甲醛、酒精、醋酸以及升汞等，混合固定液一般有Bouin氏液、Carnoy氏液等，可以互補不足。10%福爾馬林（4%甲醛）或者10%磷酸緩沖福爾馬林是病理切片常規(guī)使用的固定液。固定時間根據(jù)材料快的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，一般為數(shù)小時至24小時。水洗脫水透明浸蠟包埋根據(jù)要求選取材料的來源和部位，取材時要求快速，定位準確，注意保持結構的完整性。酒精是常用的脫水劑，能與水和透明劑相混。為了減少組織材料的急劇收縮，應使用從低濃度到高濃度遞增的順序（50%—100%）逐步進行。材料塊在透明劑中浸漬的過程即為透明，常用的透明劑有二甲苯、苯、氯仿等。透明時間依據(jù)組織材料塊的大小以及屬于囊腔或者實質(zhì)器官而定，時間過短則透明不夠徹底，時間過長則組織硬化變脆，就不易切出完整切片。用石蠟代替透明劑，使石蠟浸入組織起支持作用。通常先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液中浸漬1~2小時，再移入純石蠟中浸漬3小時左右。一般使用的石蠟為了增加其粘度，常將石蠟與蜂蠟以9:1的比例混合。切片包埋好的蠟塊用刀片修成規(guī)整的四棱臺，固定在小木塊上，夾在輪轉(zhuǎn)式切片機的蠟塊鉗內(nèi)，使蠟塊面與切片刀刃平行。 貼片貼片脫蠟及水化染色脫水用粘附劑將展平的蠟片牢附于載玻片上，以免在以后的脫蠟、水化及染色等步驟中二者滑脫開。粘附劑一般是蛋白甘油。干燥后的切片需及時水化才能在水溶性染液中進行染色。用二甲苯脫蠟，再移至經(jīng)純酒精及梯度酒精直至蒸餾水。如果染料配制于酒精中，則將切片移至與酒精近似濃度時，即可染色。染色的目的是使細胞組織內(nèi)的不同結構呈現(xiàn)不同的顏色以便于觀察，未經(jīng)染色的細胞組織其折光率相似，不易辨認。經(jīng)染色可顯示細胞內(nèi)不同的細胞器及內(nèi)容物以及不同類型的細胞組織。根據(jù)不同觀察需要和研究內(nèi)容可以采用不同的染色劑和染色方法，還要注意選用適宜的固定劑才能取得滿意的結果。經(jīng)典的蘇木精和伊紅染色法是組織學標本及病理切片標本的常規(guī)染色，簡稱HE染色。經(jīng)HE染色后，細胞核被蘇木精染成紫藍色。其染色原理是：多數(shù)細胞質(zhì)及非細胞成分被伊紅染成粉紅色。由于蘇木精是帶陽離子的染料，染液呈堿性，核內(nèi)染色質(zhì)及胞質(zhì)內(nèi)核糖體等物質(zhì)對這種染料有親和性，呈嗜堿性；而帶陰離子的染料伊紅配制的染液呈酸性，對這種染料有親和性，稱嗜酸性。染色的步驟一般是：蘇木精染色—水洗浮色—蘭化（用自來水或者氨水，使藍紫色更加清晰）—水洗—脫水—伊紅染色。染色后的切片尚且不能在顯微鏡下觀察，需要經(jīng)梯度酒精脫水，在95%及純酒精中的時間可適當加長以保證脫水徹底；如染