動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)要求1492

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的生物

安全防護(hù)病毒學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)病毒學(xué)研究所

主要內(nèi)容實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的護(hù)理和使用原則實(shí)驗(yàn)過程的行為規(guī)范實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用程序和要求動(dòng)物生物安全實(shí)驗(yàn)室設(shè)施與防護(hù)要求一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的護(hù)理和使用原則

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是經(jīng)過科學(xué)的育種，遺傳背景清楚，攜帶的微生物狀況明確，并對(duì)其生態(tài)學(xué)、生物學(xué)、生物化學(xué)、形態(tài)結(jié)構(gòu)了解的特殊動(dòng)物，因此，對(duì)其護(hù)理和使用也有嚴(yán)格的要求。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)和使用應(yīng)遵守國家有關(guān)法律和規(guī)定。應(yīng)明確使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的理由和目的。明確實(shí)驗(yàn)所使用動(dòng)物的種類和數(shù)量，動(dòng)物的數(shù)量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)的要求。完善操作規(guī)程，避免或減輕因?qū)嶒?yàn)對(duì)動(dòng)物造成的不適和痛苦。包括使用適當(dāng)?shù)逆?zhèn)靜、鎮(zhèn)痛或麻醉方法；禁止不必要的重復(fù)。嚴(yán)格按程序?qū)嵤?shí)驗(yàn)后動(dòng)物的處理，包括麻醉、止痛、實(shí)驗(yàn)后的護(hù)理或用麻醉方法處死。實(shí)驗(yàn)過程中要求保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的良好生活條件，包括飼養(yǎng)環(huán)境、符合需求的飼料及細(xì)心的護(hù)理等。研究人員和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作人員應(yīng)接受實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的基本知識(shí)和操作技能等方面的培訓(xùn)。使用過程中要求保證周圍環(huán)境和實(shí)驗(yàn)人員的安全。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的護(hù)理和使用原則二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程的行為規(guī)范物理限制手術(shù)操作飲食的限制廢棄物和尸體處理1.物理限制

指在實(shí)驗(yàn)過程中包括檢查、收集標(biāo)本、給藥、治療或?qū)嶒?yàn)操作等，用手或工具限制動(dòng)物活動(dòng)的過程。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容不同，限制時(shí)間有差異，但要求盡量縮短限制時(shí)間。有些動(dòng)物，如狗和靈長類動(dòng)物可以通過簡單的訓(xùn)練達(dá)到目的。限制的工具不能作為常規(guī)的飼養(yǎng)工具。工具的設(shè)計(jì)應(yīng)合理，不要僅考慮實(shí)驗(yàn)的便利，主要考慮盡量減少動(dòng)物的不適，避免傷害。盡量減少限制的時(shí)間，以達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑榛鶞?zhǔn)。在限制過程中，如果發(fā)生損傷或嚴(yán)重的行為改變，應(yīng)暫?；蚪瓜拗疲⒔o予處理或治療。保證實(shí)驗(yàn)人員和周圍人員的安全。物理限制的主要原則和要求

有些實(shí)驗(yàn)需要對(duì)動(dòng)物進(jìn)行手術(shù)，即打開或刺穿動(dòng)物的身體，對(duì)動(dòng)物的物理或生理機(jī)能產(chǎn)生較大的損害。

實(shí)驗(yàn)人員也容易被血液，體液污染或被器械、針頭刺傷，存在潛在生物污染的威脅。操作一定要使用適當(dāng)?shù)逆?zhèn)靜、鎮(zhèn)痛或麻醉方法。不提倡利用一個(gè)動(dòng)物進(jìn)行多個(gè)手術(shù)實(shí)驗(yàn)，但是，為充分利用動(dòng)物資源，經(jīng)動(dòng)物倫理委員會(huì)許可，在可能的條件下可以實(shí)施。禁止不必要的重復(fù)操作。嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程，防止發(fā)生血液，體液外濺和針刺傷，避免生物污染。手術(shù)后的動(dòng)物、標(biāo)本以及所用器具材料等必須按規(guī)定程序妥善處置。2.手術(shù)操作

實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物原則上要求隨時(shí)飲食，如果一些實(shí)驗(yàn)需要?jiǎng)游锵拗剖澄锘蛩臄z入量，應(yīng)保證動(dòng)物存活所需要的最低需求量。根據(jù)研究的目的，食物的限量應(yīng)經(jīng)過科學(xué)的論證，其限量的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)容易操作，如正常攝入量的百分比或動(dòng)物體重的百分比。

對(duì)于水分的限量攝入，一定要防止動(dòng)物發(fā)生脫水現(xiàn)象，并要保持動(dòng)物的膳食平衡。3.飲食的限制1.血液和體液標(biāo)本的處理用于抗體、抗原、病原微生物、生化指標(biāo)等檢查的血液和體液，按照要求進(jìn)行處理并檢測，檢測后的標(biāo)本經(jīng)121℃，30min高壓消毒處理。2.動(dòng)物臟器組織的處理

動(dòng)物器官組織，尤其是用于病原微生物分離的組織按照標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行處理；用于病理切片的組織，均需要經(jīng)過甲醛固定后再進(jìn)行切片。剩余的組織經(jīng)121℃，30min高壓消毒處理。4.廢棄物和尸體處理3．動(dòng)物尸體的處理

安樂處死后的動(dòng)物尸體，取材完畢后，經(jīng)121℃30min高壓滅菌處理后，集中送環(huán)保部門處理。動(dòng)物生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室及以上級(jí)的實(shí)驗(yàn)室的感染動(dòng)物尸體需經(jīng)室內(nèi)和雙扉兩道高壓滅菌，才能移出實(shí)驗(yàn)室。4.動(dòng)物咽拭子的處理

用于病原分離和PCR檢測的咽拭子，按照各自的要求處理后，進(jìn)行病毒分離和PCR檢測，剩余的標(biāo)本經(jīng)121℃，30min高壓消毒處理。5.病原分離培養(yǎng)物的處理

病原分離的培養(yǎng)物，不論是陽性還是陰性結(jié)果，均需經(jīng)121℃，30min高壓消毒處理。。

4.廢棄物和尸體處理三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用程序和要求1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的基本使用程序和要求實(shí)驗(yàn)室如需要使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，應(yīng)首先向生物安全和倫理委員會(huì)提出申請(qǐng)，填寫申請(qǐng)表。見附件實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用申請(qǐng)表使用實(shí)驗(yàn)室得到認(rèn)可后，根據(jù)申請(qǐng)表中申請(qǐng)的動(dòng)物種屬和數(shù)量，安排實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)和使用。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須在指定的區(qū)域內(nèi)飼養(yǎng)和使用，禁止在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)操作結(jié)束時(shí)，動(dòng)物須返回指定的飼養(yǎng)區(qū)域內(nèi)，不能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)過夜。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)指定的區(qū)域進(jìn)行。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用申請(qǐng)表批準(zhǔn)號(hào)：_____________批準(zhǔn)日期：_____________有效日期：_____________一、申請(qǐng)者基本情況科室課題負(fù)責(zé)人電話傳真E-mail課題名稱申請(qǐng)目的□初次申請(qǐng)，□延長或□修改原申請(qǐng)（原申請(qǐng)批準(zhǔn)號(hào)______________）二、所需實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類年齡體重/大/小性別來源飼養(yǎng)場所實(shí)驗(yàn)場所數(shù)量_________+__________+__________=___________（第一年）（第一年）（第一年）（總計(jì)）三、動(dòng)物的運(yùn)送（是否需要運(yùn)送，如果需要，說明運(yùn)送的路線和使用工具等）四、研究的目的（簡單描述研究的目的，和該研究對(duì)人類，或動(dòng)物，或科學(xué)研究的貢獻(xiàn)）五、使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的原理（解釋使用動(dòng)物的原理；闡述選擇動(dòng)物屬種和數(shù)量的依據(jù)）六、描述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)和操作程序（具體包括：注射或接種的物質(zhì)、劑量、部位、體積和針次等；血標(biāo)本的收集體積、部位、方法、時(shí)間；非手術(shù)的操作步驟（手術(shù)操作見第七項(xiàng)）；限制動(dòng)物的方法；放射性同位素的使用劑量和時(shí)間；識(shí)別動(dòng)物的方法，如耳朵標(biāo)簽、飼養(yǎng)籠的卡片等；對(duì)動(dòng)物的損害，如疼痛、腹水等；實(shí)驗(yàn)終結(jié)標(biāo)準(zhǔn)，如腫瘤的大小、體重降級(jí)的百分比、行為學(xué)的改變、中毒癥狀等，及何時(shí)執(zhí)行安樂死。）七、手術(shù)操作程序（如需要，請(qǐng)?zhí)顚懕灸夸洠┚唧w操作步驟手術(shù)操作人及培訓(xùn)情況手術(shù)執(zhí)行的地點(diǎn)實(shí)驗(yàn)后的護(hù)理是否在同一動(dòng)物上進(jìn)行多個(gè)手術(shù)□否□是，具體說明：八、導(dǎo)致疼痛的分類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量第一年第二年第三年□A輕微，或一過性，或無疼痛__________________________________□B有疼痛，但能夠解除__________________________________□C不能緩解的疼痛__________________________________九、麻醉，鎮(zhèn)痛（對(duì)第八項(xiàng)目中的B或C類動(dòng)物，應(yīng)說明使用麻醉或鎮(zhèn)痛的方法，包括麻醉劑的名稱、劑量、使用方式和時(shí)間）十、實(shí)驗(yàn)終結(jié)后，如何終止動(dòng)物的生命（麻醉劑的名稱、劑量和使用方法）和如何處理動(dòng)物尸體涉及感染性材料的操作要在生物安全柜中進(jìn)行，并防止泄露在安全柜底面。操作包括感染動(dòng)物的解剖、組織的取材、采血及動(dòng)物的病原接種。動(dòng)物籠具在清洗前先做消毒處理。污物、一次性物品需放入醫(yī)療廢物專用垃圾袋中，經(jīng)高壓滅菌后方可拿出實(shí)驗(yàn)室。動(dòng)物尸體用雙層醫(yī)療廢物專用垃圾袋包裹后，放入標(biāo)有動(dòng)物尸體專用的容器中，用消毒液噴霧容器表面后，運(yùn)至解剖區(qū)域剖檢。生物安全柜使用后應(yīng)用消毒液擦拭、揩干。2.含有感染性材料的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)要求2.含有感染性材料的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)要求廢液需按比例倒入有消毒液的桶中，倒入時(shí)需沿容器壁輕倒并戴眼罩，防止濺入眼中。如果有感染性物質(zhì)濺到生物安全柜上、地上以及其他地方，應(yīng)按菌，毒外溢在臺(tái)面、地面和其他表面處理。每天工作結(jié)束時(shí)，應(yīng)用消毒液擦拭門把手和地面等表面區(qū)域。廢物放入高壓滅菌器內(nèi)時(shí)需粘貼指示條，物品移出前觀察指示條是否達(dá)到滅菌要求。顏色不符時(shí)需重復(fù)高壓滅菌。高壓滅菌器需每月做滅菌測試一次，并作記錄。

3.小動(dòng)物的飼養(yǎng)

小動(dòng)物主要指小鼠、大鼠、豚鼠等嚙齒類動(dòng)物，其飼養(yǎng)應(yīng)遵循下列原則使用動(dòng)物必須按國家標(biāo)準(zhǔn)或?qū)嶒?yàn)特殊要求檢驗(yàn)合格，充分準(zhǔn)備后進(jìn)入動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，飼養(yǎng)人員應(yīng)按實(shí)驗(yàn)設(shè)施規(guī)定程序要求進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。及時(shí)觀察動(dòng)物飲食、精神狀況，有無異常表現(xiàn)，患病或死亡。動(dòng)物應(yīng)可自由進(jìn)食、飲水。定期檢查水、料是否充足并及時(shí)補(bǔ)給。同時(shí)保證其他飼養(yǎng)條件完備。4.大動(dòng)物飼養(yǎng)

大動(dòng)物主要指狗、豬及非人類靈長類動(dòng)物等，飼養(yǎng)原則使用動(dòng)物必須按國家標(biāo)準(zhǔn)或?qū)嶒?yàn)特殊要求，檢驗(yàn)合格，充分準(zhǔn)備后方可進(jìn)入動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室。應(yīng)將每只動(dòng)物日攝取總量分批次喂給，以保證動(dòng)物的進(jìn)食量和減少浪費(fèi)。應(yīng)經(jīng)常檢查飲水裝置，及時(shí)補(bǔ)充不足。動(dòng)物飼養(yǎng)區(qū)域應(yīng)每天打掃，保持清潔，每周將地面消毒三次。喂給瓜果、蔬菜等須洗凈消毒。禁止喂給腐爛發(fā)霉不潔的食物，飲水要清潔。對(duì)飼喂動(dòng)物所用的小推車、食物、水容器等用品每周進(jìn)行兩次消毒。室內(nèi)光照，要求明暗各12h自動(dòng)交替。。

5.動(dòng)物的檢疫

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)入檢疫室在檢疫室的緩沖間內(nèi)，用75%酒精噴灑動(dòng)物的外包裝進(jìn)行消毒，打開紫外燈照射10～15min。將經(jīng)上述處理的動(dòng)物移入檢疫室，根據(jù)要求進(jìn)行檢疫。各動(dòng)物的檢疫期不同，大動(dòng)物為2周，小動(dòng)物為1周。在檢疫期內(nèi)觀察動(dòng)物的精神狀態(tài)、食欲、營養(yǎng)狀況、排泄物等，如有任何異常，動(dòng)物不得用于實(shí)驗(yàn)，應(yīng)退出動(dòng)物檢疫室。檢疫合格的動(dòng)物經(jīng)適當(dāng)處理后由緩沖間或物流通道進(jìn)入動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室。6.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的有關(guān)操作

1.給藥根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，按不同的動(dòng)物，不同途徑給藥。主要包括灌胃和靜脈注射。對(duì)接種了高致病性病原微生物的動(dòng)物，尤其是大動(dòng)物，將動(dòng)物麻醉后方可進(jìn)行灌胃或靜脈注射。小動(dòng)物灌胃或靜脈注射可根據(jù)情況選擇是否麻醉，靜脈注射時(shí)需使用保定器。2.采樣

原則上活檢時(shí)應(yīng)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行麻醉。對(duì)接種了病原體的大動(dòng)物進(jìn)行采血或體檢時(shí)，要求將動(dòng)物麻醉。對(duì)小動(dòng)物進(jìn)行灌胃、注射和采血時(shí)，可不麻醉動(dòng)物，但要防止動(dòng)物咬抓。7.獸醫(yī)職責(zé)了解所飼養(yǎng)動(dòng)物的健康狀況，建立疾病預(yù)警機(jī)制，對(duì)工作環(huán)境與生產(chǎn)管理提出改善建議，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的品質(zhì)。主管獸醫(yī)師由單位主任指定，不得接觸有病原污染的物品主管獸醫(yī)師每天檢查實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各項(xiàng)健康事項(xiàng)，檢查各區(qū)域工作環(huán)境和衛(wèi)生條件。主管獸醫(yī)師在檢查完后應(yīng)提出報(bào)告，動(dòng)物是否進(jìn)一步隔離觀察和實(shí)驗(yàn)室檢查建議四、動(dòng)物生物安全實(shí)驗(yàn)室設(shè)施與防護(hù)要求由于實(shí)驗(yàn)內(nèi)容不同，尤其是進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)研究，使用的動(dòng)物也有具體要求，因而，關(guān)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室中使用的微生物的危害評(píng)估，需要考慮以下因素病原微生物的傳播途徑病原微生物標(biāo)本使用的容量和濃度病原微生物接種途徑和方法病原微生物能否和以何種途徑被排出體外病原微生物的總體危險(xiǎn)程度對(duì)于使用的動(dòng)物，需要考慮的因素包括動(dòng)物的自然特性，包括動(dòng)物的攻擊性和抓咬傾向性自然存在的體內(nèi)外微生物和寄生蟲等易感的動(dòng)物性疾病動(dòng)物接種病原微生物后可能產(chǎn)生的結(jié)果等動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室所使用微生物的危害評(píng)估應(yīng)考慮的因素一級(jí)動(dòng)物生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室

AnimialBio-safetyLevel-1

ABSL-11.標(biāo)準(zhǔn)微生物學(xué)規(guī)范實(shí)驗(yàn)人員從事在實(shí)驗(yàn)工作，需由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)，并決定限制或禁止其他人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室,門進(jìn)系統(tǒng)。工作面每天消毒一次，并及時(shí)對(duì)濺落活微生物的材料進(jìn)行消毒。采用機(jī)械吸液裝置，禁止用嘴吸液。在實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)禁止飲食、吸煙、處理隱性眼鏡及化妝，食物應(yīng)存放在專用的儲(chǔ)藏柜或冰箱內(nèi)，保存食物的柜子或冰箱應(yīng)放置在實(shí)驗(yàn)區(qū)以外。實(shí)驗(yàn)人員在操作活微生物材料及動(dòng)物，離開實(shí)驗(yàn)室之前均應(yīng)洗手。所有污染的液體或固體廢棄物在處理前應(yīng)去除污染。感染動(dòng)物尸體需用防漏、有蓋容器運(yùn)出并焚化。所有操作均應(yīng)按規(guī)程仔細(xì)小心進(jìn)行，使氣溶膠的產(chǎn)生減至最低限度。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有防昆蟲及鼠類的措施。

門進(jìn)系統(tǒng)監(jiān)控系統(tǒng)污染區(qū)半污染區(qū)清潔區(qū)雙扉高壓滅菌器焚燒爐浸泡槽2.特殊規(guī)范需告知進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室人員潛在危害，符合特定要求人員方能由負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)進(jìn)入。實(shí)驗(yàn)室要制定生物安全手冊(cè)，供需要進(jìn)入的工作人員閱讀并按程序執(zhí)行。建議穿長工作服，以防止污染或?yàn)R污便服。動(dòng)物房工作服不能穿到其它實(shí)驗(yàn)區(qū)域。需運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室外進(jìn)行消毒處理的污染材料，應(yīng)裝入堅(jiān)固、不漏的容器、密封室。制定安全使用銳利器具的方案。

3.防護(hù)設(shè)備初級(jí)屏障

ABSL－1一般不要求使用專用防護(hù)設(shè)備。接觸非人靈長動(dòng)物的人員應(yīng)進(jìn)行黏膜暴露危險(xiǎn)評(píng)估，并且應(yīng)用合適的眼部和頭部防護(hù)設(shè)備。

4.實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施要求

二級(jí)屏障動(dòng)物設(shè)施應(yīng)與大樓內(nèi)的公共區(qū)分開。動(dòng)物飼養(yǎng)區(qū)的門需能自動(dòng)關(guān)閉，向內(nèi)開啟，平時(shí)保持關(guān)閉狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)與建筑應(yīng)便于清潔。實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面不透水，耐酸、堿、有機(jī)溶劑、并耐熱。實(shí)驗(yàn)室設(shè)備堅(jiān)固。實(shí)驗(yàn)臺(tái)、柜及設(shè)備之間的空間應(yīng)有適當(dāng)距離便于清潔。實(shí)驗(yàn)室區(qū)及動(dòng)物飼養(yǎng)區(qū)應(yīng)設(shè)洗手池。如實(shí)驗(yàn)室有可開關(guān)的窗子應(yīng)裝上紗窗。實(shí)驗(yàn)室空氣直接外排，不得再循環(huán)或回流至其它動(dòng)物飼養(yǎng)區(qū)。動(dòng)物用籠架具可用手洗及機(jī)洗。機(jī)洗最后沖洗溫度最少應(yīng)為90℃。二級(jí)動(dòng)物生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室

ABSL－2

該級(jí)與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)一級(jí)生物安全水平相似，適用于那些對(duì)人及環(huán)境有中度潛在危險(xiǎn)的微生物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)工作。其不同點(diǎn)在于

(1)人員經(jīng)過操作病原性物質(zhì)專門訓(xùn)練，并由能勝任的科學(xué)人員監(jiān)督管理。(2)正在工作時(shí)限制外人進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。

(3)某些產(chǎn)生傳染性氣溶膠的工作在生物安全柜或其他物理封閉設(shè)備內(nèi)進(jìn)行。

應(yīng)有適當(dāng)?shù)尼t(yī)療監(jiān)測方案實(shí)驗(yàn)室人員須針對(duì)所應(yīng)用的病原體或潛在的病原體接受適當(dāng)?shù)拿庖吆蜋z測如乙肝疫苗，