谷氨酸發(fā)酵過程控制-谷氨酸棒桿菌斜面及平板劃線培養(yǎng)

子情境：谷氨酸棒桿菌斜面及平板劃線培養(yǎng)假如梅花味精廠發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸，需要大量谷氨酸棒桿菌細(xì)胞，現(xiàn)在需要同學(xué)們進(jìn)行谷氨酸棒桿菌斜面及平板劃線培養(yǎng)，以獲得斜面和平板種子，進(jìn)而通過菌種擴(kuò)大培養(yǎng)獲得生產(chǎn)谷氨酸的大量細(xì)胞細(xì)菌的接種方法（一）平板劃線分離法在被檢標(biāo)本中，常混雜有多種細(xì)菌，平板劃線分離法可使這多種細(xì)菌在培養(yǎng)基表面分散生長，各自形成菌落，以便根據(jù)菌落的形態(tài)及特征，挑選單個菌落進(jìn)行純培養(yǎng)。常用的平板劃線分離法有以下兩種：1、連續(xù)劃線分離法：此法主要用于雜菌不多的標(biāo)本。用接種環(huán)取標(biāo)本少許，于平板1/5處密集涂布，然后來回作曲線連續(xù)劃線接種，線與線間有一定距離，劃滿平板為止。2、分區(qū)劃線分離法：本法適用于雜菌量較多的標(biāo)本。先將標(biāo)本均勻涂布于平板表面邊緣一小區(qū)（第一區(qū)）內(nèi)，約占平板1/5面積，再在二、三、……區(qū)依次連續(xù)劃線。每劃完一個區(qū)，均將接種環(huán)滅菌一次。每一區(qū)的劃線均接觸上一區(qū)的接種線1、2次，使菌量逐漸減少，以獲得單個菌落（二）斜面接種法該法主要用于單個菌落的純培養(yǎng)、保存菌種或觀察細(xì)菌的某些特性。用滅菌的接種環(huán)取單個菌落或少許細(xì)菌，從培養(yǎng)基斜面底部向上劃一條直線，然后從底部向上作連續(xù)曲線劃線。

細(xì)菌接種的基本程序滅菌接種環(huán)沾取標(biāo)本接種滅菌接種環(huán)殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染標(biāo)本殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染環(huán)境斜面接種法該法主要用于單個菌落的純培養(yǎng)、保存菌種或觀察細(xì)菌的某些特性。（1）貼標(biāo)簽接種前在試管上貼上標(biāo)簽，注明菌名、接種日期、接種人姓名等。貼在距試管口約2-3cm的位臵。(若用記號筆標(biāo)記則不需標(biāo)簽)。（2）點(diǎn)燃酒精燈。（3）接種用接種環(huán)將少許菌種移接到貼好標(biāo)簽的試管斜面上。取菌種試管和待接種的斜面試管滅菌接種環(huán)斜面接種法沾取標(biāo)本斜面接種法接種斜面接種法用滅菌的接種環(huán)取單個菌落或少許細(xì)菌，從培養(yǎng)基斜面底部向上劃一條直線，然后從底部向上作連續(xù)曲線劃線，一直劃到斜面頂端接種后滅菌接種環(huán)斜面接種法平板劃線接種法（1）標(biāo)記在培養(yǎng)皿底面，用記號筆注明接種的菌名、接種者姓名、日期等。（2）滅菌接種環(huán)點(diǎn)燃酒精燈，右手以持筆式握持接種環(huán)，并放置火焰中燒灼滅菌，先將接種環(huán)的接種絲部分置于火焰中，待金屬絲燒紅并蔓延至金屬端，再直接燒灼金屬環(huán)直至燒紅，然后由金屬環(huán)至金屬桿方向快速通過火焰，隨后再反方向通過火焰，如此2~3次。然后將接種環(huán)移開火焰，待其冷卻。滅菌接種環(huán)平板劃線接種法

（3）取菌種左手持裝有金黃色葡萄球菌或大腸桿菌菌液的試管，用持有接種環(huán)的右手手掌及小指拔取試管塞，將試管管口迅速通過火焰2~3次進(jìn)行滅菌。將已滅菌且已冷卻的接種環(huán)伸入菌種管中，取一接種環(huán)的菌液，然后退出菌種管，將菌種管管口再次通過火焰2~3次滅菌，塞好試管塞，放至原來的位置。平板劃線接種法

（4）分離劃線接種細(xì)菌（四區(qū)接種法）

①左手持瓊脂平板培養(yǎng)基（將皿蓋反放在桌上酒精燈附近），盡量使之直立以免空氣中的細(xì)菌落入其中，并靠近火焰。右手持接種環(huán)在瓊脂平板上端來回劃線，涂成一細(xì)菌薄膜（約占平板的1/10），視為一區(qū)。劃線時使接種環(huán)與接種平板面呈30~40度角，以腕力在平板表面行輕而快地來回滑動動作。②旋轉(zhuǎn)瓊脂平板90度，燒灼接種環(huán)，以殺滅環(huán)上的殘留細(xì)菌，將接種環(huán)觸及培養(yǎng)基表面以使其冷卻。滅菌接種環(huán)通過薄膜處作連續(xù)平行劃線（約占平板1/5），此視為二區(qū)。平板劃線接種法

③旋轉(zhuǎn)瓊脂平板90度，灼燒接種環(huán)滅菌并使之冷卻。將滅菌接種環(huán)接二區(qū)連續(xù)平行劃線（約占平板1/4），此為三區(qū)。④旋轉(zhuǎn)瓊脂平板90度，接種環(huán)不必再滅菌，接三區(qū)連續(xù)平行劃線，劃滿平板其余部分，此視為四區(qū)。各區(qū)接種線間盡量互不交接，以達(dá)到細(xì)菌逐漸稀釋的目的。平板劃線接種法

四區(qū)劃線平板劃線接種法

（5）劃線完畢，將瓊脂平板放進(jìn)皿蓋，將培養(yǎng)皿倒放，送進(jìn)37℃