微生物的免疫技術-微生物的血清學技術

模塊十微生物的免疫技術Microbiologicalimmunologicaltechniques任務二血清學反應內容導入血清學反應按抗原抗體反應性質不同，可分為凝集性反應、沉淀反應、有補體參與的反應、中和反應以及電免疫反應、免疫轉印、蛋白質芯片等技術。任務內容凝集試驗：直接凝集試驗、間接凝集試驗、乳膠凝集試驗補體參與的試驗：補體結合試驗中和試驗：病毒中和試驗任務二血清學反應沉淀試驗：環(huán)狀沉淀試驗、絮狀沉淀試驗、瓊脂擴散試驗、免疫電泳1、凝集反應(agglutination)凝集反應——顆粒性抗原與相應抗體結合所發(fā)生的凝集反應細菌和紅細胞等顆粒性抗原，當與相應抗體特異結合后，在適量電解質存在的條件下，可逐漸聚集，出現肉眼可見的凝集現象稱為凝集反應。反應中的抗原稱為凝集原（agglutinogen）抗體稱為凝集素（agglutinin）。根據凝集反應的原理，以后又發(fā)展建立了各種直接凝集試驗、間接凝集抑制試驗以及固相免疫吸附血凝試驗等新方法。1、凝集反應(agglutination)直接凝集反應：抗原與抗體直接結合而發(fā)生的凝集反應。玻片法：已知抗體檢測未知抗原（定性）。血清（適當稀釋）與待檢菌懸液各一滴在玻片上混合，數分鐘后，出現顆粒狀凝集。試管法：已知抗原測定待測血清中有無某種抗體及其含量（定量）。將待檢血清進行倍比稀釋，然后加入等量抗原，37℃水浴數小時，觀察凝集程度。直接凝集反應1、凝集反應(agglutination)間接凝集反應：又稱為被動凝集反應。利用某些與免疫反應無關的均一的小顆粒物質作為載體，將可溶性抗原（或抗體）吸附于表面，與相應的抗體結合，在電解質存在的適宜條件下，發(fā)生凝集現象。免疫微球：表面吸附抗原（或抗體）的載體微球稱為免疫微球。2、沉淀反應(precipitation)沉淀反應——可溶性抗原與相應抗體結合所發(fā)生的沉淀反應

沉淀反應是指可溶性抗原（細菌培養(yǎng)濾液、細胞或組織的浸出液、血清蛋白等）與相應抗體在液相中特異結合后，形成的免疫復合物受電解質影響出現的沉淀現象。反應中的抗原稱為沉淀原（precipitinogen），可以是類脂、多糖或蛋白質等；抗體稱為沉淀素（precipitin）。1、絮狀沉淀反應2、環(huán)狀沉淀反應++——抗血清抗原抗原抗體2、沉淀反應(precipitation)免疫擴散試驗（瓊脂擴散法）單向擴散試驗：是將已知抗體與1%的瓊脂混均勻制成凝膠板，在上面打圓孔，在孔內加入抗原，在飽和濕度下擴散24小時，觀察環(huán)形沉淀帶。2、沉淀反應(precipitation)單向擴散試驗單向擴散試驗的適用對象有特異性單價抗血清有已知含量的標準品待檢標本抗原蛋白質含量大于1.25μg2、沉淀反應(precipitation)免疫擴散試驗（瓊脂擴散法）雙向擴散試驗：是在1%的瓊脂凝膠板上澆注2~3mm的凝膠板，在上面打梅花孔或長方形槽，在相鄰孔內加抗原或抗體，在飽和濕度下擴散24小時，觀察沉淀帶。雙向擴散試驗的用途抗原、抗體相對含量測定抗原、抗體相對分子量分析抗原性質分析3、補體結合反應(complementfixationreaction)補體結合反應——抗原抗體結合后激活補體所致的補體結合反應原理:補體的作用無特異性，能與任何一種Ag-Ab復合物結合；但當Ag與Ab不相對應時，補體則不被結合而游離存在。此時如在上述反應系統中加入綿羊紅細胞(Ag)和溶血素(Ab)系統，即可與游離的補體結合而出現溶血現象。因此，根據溶血現象是否產生，即可得知檢測系統中有無相應的抗原或抗體存在。3、補體結合反應(complementfixationreaction)補體結合試驗：（CFT）抗原、抗體、補體、紅血球懸液、溶血素溶菌系統抗原

+抗體溶血系統紅血球

+溶血素待檢系統(無可見反應)指示系統(可見反應)補體補體結合試驗原理待檢系統指示系統補體補體結合試驗原理（結果陽性）待檢系統指示系統（不溶血）補體消耗補體結合試驗原理（結果陰性）待檢系統指示系統（溶血）補體未消耗4、中和反應(neutralization)中和反應——細菌外毒素或病毒與相應抗體結合所致的中和反應中和試驗是免疫學和病毒學中常用的一種抗原抗體反應試驗方法，用以測定抗體、中和病毒感染性或細菌毒素的生物學效應。凡能與病毒結合，使其失去感染力的抗體又稱中和抗體。能與細菌外毒素結合，中和其毒性作用的抗體稱為抗毒素。1.血清學反應的類型：凝集反應的類型、原理與應用、沉淀反應的類型、原理與應用、補體結合反應的原理與應用、中和反應的原理。思考與討論：我學到什么？任務：簡述補體結合反應的原理及結果判斷？思考討論與任務模塊十微生物的免疫技術Microbiologicalimmunologicaltechniques任務二血清學反應內容導入血清學鑒定是采用含有已知特異性抗體的免疫血清（診斷血清）與分離培養(yǎng)出的未知純種細菌或標本中的抗原進行血清學反應，以確定病原菌的種或型。任務二血清學反應任務內容一、血清學反應的定義二、血清學反應的特點三、血清學反應的主要影響因素任務二血清學反應定義：抗體在體內或體外都可以與相應的抗原發(fā)生特異性的反應。在體外進行的抗原和抗體反應叫血清學反應。一、血清學反應的定義任務二血清學反應1、抗原抗體結合的特異性與交叉性血清學反應具有高度的特異性，如豬瘟病毒的抗體只與豬瘟病毒結合。同一抗原分子可具有多種不同的抗原表位，若兩種不同的抗原具有一個或多個相同（相似）的抗原表位，在與相應抗體反應時可出現交叉反應（crossreacion)二、血清學反應的特點任務二血清學反應2、抗原抗體結合的可逆性抗原與抗體的結合為弱能量的共價結合，抗原抗體結合是分子表面的結合，該過程受物理、化學和熱力學的法則所制約，結合溫度在0~40℃，pH在4~9。如溫度超過60或pH在3以下，則可解離。二、血清學反應的特點任務二血清學反應3、抗原抗體結合的比例性與結合物的可見性等價帶表示抗原與抗體比例最合適，形成大而多的結合物，此時在反應體系中測不出或有極少游離的抗原或抗體；抗體過剩帶（前帶）和抗原過剩帶（后帶）皆表示抗原與抗體的比例不合適，所形成的結合物少且小，在反應體系中存在著較多的游離抗原或抗體二、血清學反應的特點任務二血清學反應4、抗原抗體反應的階段性第一階段是抗原抗體的特異結合，此階段僅需幾秒到幾分鐘，尚無可見反應第二階段為可見反應階段，需數分鐘、數小時乃至數日，受各種因素影響二、血清學反應的特點任務二血清學反應三、血清學反應的主要影響因素1、抗原和抗體濃度、比例：抗原和抗體濃度、比例對抗原抗體反應影響最大、是決定性因素，